To determine whether rock bream Oplegnathus fasciatus can be protected from rock bream iridovirus (RBIV) infection by intramuscular injection of long double-stranded RNAs (dsRNAs), we compared protective effect of virus-specific dsRNAs corresponding to major capsid protein (MCP), ORF 084, ORF 086 genes, and virus non-specific green fluorescent protein (GFP) gene. Furthermore, to determine whether the non-specific type I interferon (IFN) response was associated with protective effect, we estimated the activation of type I IFN response in fish using expression level of IFN inducible Mx gene as a marker. As a result, mortality of fish injected with dsRNAs and challenged with RBIV was delayed for a few days when comparing with PBS injected control group. However, virus-specific dsRNA injected groups exhibited no significant differences in survival period when compared to the GFP dsRNA injected group. Semi-quantitative analysis indicated that the degree of antiviral response via type I IFN response is supposedly equal among dsRNA injected fish. These results suggest that type I IFN response rather than sequence-specific RNA interference might involve in the lengthened survival period of fish injected with virus-specific dsRNAs.

2009년 7~12월, 축제식 양식장에서 돌돔의 백점충 감염 조사결과, 감염률은 20.0~88.0%로 9월이 높았고 7월이 낮았다. 7, 8월에는 죽는 개체가 없었으나 9월 중순 이후에는 폐사가 발생하였다. 수온 $19.3{\sim}24.3^{\circ}C$, 용존산소 5.0~7.1 mg/L, pH 8.0~8.1, 염분 31.9~33.7psu로 폐사 발생시의 수온은 약 $24.0^{\circ}C$ 였다. 백점충 감염초기의 외부증상으로는 돌돔의 활력은 양호하였으나 체표에 점액분비로 번들거림을 확인 수 있었으며, 대량폐사가 발생한 시기인 10월에는 점액분비 과다, 꼬리지느러미 탈락 및 발적, 체표 출혈반점과 안구충혈 증상을 보였으며 유영력이 매우 저하되어 있었다. 내부증상으로 간, 장 충혈 및 비장비대 증상을 나타내었다. 백점충은 아가미의 호흡상피 아래 조직 내에 매몰되어 기생기와 자유유영기 상태였음을 확인하였다. 백점충은 7월경에 감염되어 수온 상승과 함께 사료급이량 증가와 돌돔의 빠른 성장이 백점충 증식의 호조건 조성으로 폐사가 더욱 가중된 것으로 추정되었다. 조사기간 중 간중량지수 (HSI)는 $1.9{\pm}1.1{\sim}3.5{\pm}1.7$ %로 폐사발생기인 9월에 가장 낮았으며, 11월에 가장 높았다. 백점충에 감염된 돌돔 혈액의 헤마토크릿트 값은 7, 8월에 각각 37.3%, 41.0%, 9, 10월에 각각 32.14%, 24.17%로 차이를 보였다. 총콜레스테롤, 중성지방은 7, 8월에 비해 10월에 급격한 저하를 보였고, 폐사 발생후 AST는 약 7배, ALT는 약 5배 높았다.

Pseudodactylogyrus속 아가미흡충에 자연감염된 뱀장어(체중 89.8~96g)를 대상으로 수온 $28^{\circ}$의 사육조건에서 포르말린의 구제효과를 알아보고자 실시하였다. 아가미흡충의 수적 변화에 의한 포르말린의 구제효과를 조사하기에 앞서, 포르말린의 농도별(0~500ppm) 및 시간별(30분~24시간) 약욕에 따른 뱀장어의 헤마토크릿치(Ht) 변화를 분석하여 포르말린이 뱀장어의 혈액생리에 미치는 독성효과를 살펴보았다. 그리고 Ht 결과를 기준으로 하여 포르말린의 농도 및 처리시간 등을 약욕 처리법을 다양하게 설정한 다음 아가미흡충의 감염농도를 조사하였다. 포르말린에 24시간 동안 약욕한 뱀장어의 Ht는 대조구와 비교하여 100 및 200 ppm에서는 유의적인 차이가 없었다. (P>0.05). 그러나 300~500 ppm에서는 Ht가 유의적인 증가(P<0.05)를 나타내어 이 농도에서는 포르말린의 독성이 뱀장어의 생리기능에 영향을 초래하는 것으로 나타났다. 포르말린 100 및 200 ppm 농도에서 24시간동안 약욕한 처리법에서 아가미흡충의 유의적인 감소(P<0.05)가 확인되었다. 한편, 연구자들은 앞선 연구에서 뱀장어에 대한 포르말린의 24시간 반수치사농도($LC_{50}$)를 보고하였는데, 이 때 100 및 200 ppm에서 24시간 동안 약욕할 경우 200 ppm에서는 13.3%의 누적사망률을 확인하였으나, 100 ppm에서는 사망한 개체가 한 마리도 나타나지 않았다. 결론적으로 포르말린 100 ppm에서 24시간 동안 약욕하는 처리법이 뱀장어에 기생된 Pseudodactylogyrus속 아가미흡충을 효과적으로 구제할 수 있는 것으로 생각되었다.

이전의 연구에서 참가리비(Patinopecten yessoensis) 인공종묘생산 중 수질관리를 위해 주기적으로 실시하는 환수(전량환수)가 scuticociliates 감염을 촉진 할수 있다는 가능성을 제기하였다. 본 연구에서는 수질과 scuticociliates 감염을 고려한 최적 환수 횟수를 결정하고자 하였으며, 유생성장, 생존, scuticociliates 발생을 1차 기준으로 하였으며, 부가하여 중간 육성장으로 이동하여 성장 및 기형 발생율을 2차기준으로 조사하였다. 5일 간격의 환수(3T)가 가장 좋은 결과를 보였다. 잦은 환수(5T)는 수질 개선에도 불구하고 성장 둔화가 확인되었으며, 이것은 scuticociliates의 감염과 연관이 있는 것으로 보였다. 9일간격의 환수(1T) 역시 성장둔화를 보였으며, 5T 실험구와 더불어 중간육성이후 성장 둔화(통계적 유의성 없음)와 비정상 발생을 유발하였다. 본 연구결과 최적 환수간격은 5-7일 사이로 나타났다.

Edible tunicate Halocynthia roretzi, one of the most commercially important aquatic organisms in Korea, has been killed by tunic softness syndrome since last decade. The intracellular protistan parasite observed by the transmission electron microscope in hemocytes of the tunicate was considered to be the causative agent of the mass mortality. The goal of the present work is to examine the characteristic features of the parasite by identifying the 18S rDNA sequences of the parasite. The experiments conducted include amplification of presumptive 18S rDNA from diseased tunicate tissues with UNonMet-PCR and sequencing the product. A preliminary phylogenetic analysis was performed on the presumptive parasite rDNA. A digoxigenin labeled DNA probe was designed on the basis of the sequences of rDNA. Dig-ISH assay was conducted to diagnose the protistan parasite. A PCR using UNonMet-PCR primer generated 595 bp SSU rDNA fragment. Subsequently, PCRs with primer pair expended this sequence to 1542 bp. This is the first partial sequences of SSU rDNA gene to be published on the protistan parasite that has presumed causing the mass mortality of tunicate. Since the Dig-ISH technique demonstrated the presence of infection in hemocytes on the all host tissues, the fragment was confirmed to be the intracellular protistan parasite SSU rDNA. A phylogenetic analysis suggested that the protistan parasite may be a unique eukaryote that is closely related to Apicomplexa.

Bactericidal/permeability-increasing protein (BPI) and lipopolysaccharide-binding protein (LBP) are important components of the mammalian innate defence system against Gram-negative infections. The BPI/LBP cDNA was identified from the black rockfish ConA/PMA or LPS stimulated leukocyte cDNA library. The full-length BR-BPI/LBP cDNA was 2118 bp long and contained an open reading frame (ORF) of 1422 bp that encoded 473 amino-acid residues. The 5' UTR had a length of 57 bp, and the 3' UTR 639 bp. The molecular weight and theoretical isoelectric point (pI) values were calculated 51.4 kDa and 9.72, respectively. Compared with other known BPI or BPI/LBP peptide sequences, the most conserved regions of the black rockfish BPI/LBP peptide were found to be the BPI1 N-terminal, BPI2 C-terminal domains and a LPS binding domain. Phylogenetic analysis based on the deduced amino acid sequence revealed a homologous relationship between the BPI/LBP sequence of black rockfish and that of other teleosts. The black rockfish BPI/LBP gene was predominantly expressed in the PBLs, head kidney, trunk kidney and spleen. The expression of the black rockfish BPI/LBP molecule was induced in the peripheral blood leukocytes (PBLs) from 1 to 24 h following LPS stimulation, with a peak at 12 h post-stimulation.

2008년 3월 인도네시아로부터 수입된 paradise fish에서 대량폐사가 발생하여 병원체 검사를 실시한 결과, megalocytivirus 및 Mycobacterium sp.가 검출되었으며, CHSE-214세포에서 미동정 바이러스가 분리되었다. 본 연구에서는 미동정 바이러스의 특성을 조사하였으며, 또한 병원성 실험을 통해 paradise fish의 대량 폐사와의 연관성을 조사하였다. 분리 바이러스는 CHSE-214, BF-2, GF, SSN-1, FSP 및 FFN 세포에서 합포체의 세포변성효과를 나타내었고 IUdR 및 chloroform 처리에 감염성이 상실되지 않으며, 산 (pH 3), 알카리 (pH 11) 및 열 ($56^{\circ}C$, 30분)에 안정하였다. 핵산 분석 결과에서는 적어도 10개의 segment (0.7-3.6 kb)를 지닌 RNA 바이러스로 확인되었으며, 전자현미경 관찰 결과, 약 65 nm 크기로 인벨롭이 없으며 2중의 capsid를 지닌 바이러스가 세포질에서 관찰되었다. 이상의 결과는 Reoviridae family에 속하는 바이러스의 전형적인 특성과 일치하므로 paradise fish에서 분리된 바이러스는 reovirus로 확인되었다. Reovirus를 사용한 감염실험에서는 병원성이 나타나지 않아, reovirus는 paradise fish의 대량 폐사의 직접적인 원인이 아닐 것으로 사료되었다.

This study was conducted to investigate the dietary effects of lactic acid bacteria (LAB) supplementation on growth, hematological and immune responses of grey mullet, Mugil cephalus. Three replicate groups of grey mullet (body length, $62.8{\pm}1.04\;mm$ ; body weight, $3.2{\pm}0.13\;mg$) were fed the experimental diets with 0 (control), 1, 2.5 and 5,0 % of LAB for 3 months. Total body length growth rate was increased in 2.5 % supplementation group compared to control (P<0.05). No differences were observed in hematological parameters (hematocrit, hemoglobin, RBCs) and serum chemistry (calcium, magnesium, total protein, glucose, GOT and GPT). The antioxidant activity of grey mullet fed the 5.0 % LAB diets was significantly higher than that of other groups (P<0.05). Both intracellular superoxide anion production and lysozyme activity of kidney were higher in the 2.5 % LAB diet than in the control (P<0.05).

아목시실린(Amoxicillin trihydrate; Amox)을 뱀장어(평균 체중 $220{\pm}10\;g$)에 1일 1회 경구투여(40 및 80 mg/kg body weight) 및 정맥투여(1 mg/kg)한 다음, 경시적(0시간~720시간)으로 혈장내 Amox의 잔류농도를 분석하였다. 40 및 80 mg/kg 농도로 경구투여한 모든 시험구에서 투여 6시간째 각각 $3.3{\pm}0.5$ 및 $3.4{\pm}0.1\;{\mu}g/ml$로 최대혈중농도를 나타내었다. Amox의 모든 시험구는 투여 720시간째 혈중에서 검출되지 않았다. Amox의 경구투여방법에 따른 뱀장어 체내 약물 혈중농도 측정결과를 바탕으로 WinNonlin program을 이용한 2-compartment model로 하여 Amox의 흡수, 배설, 반감기 등 약물동태학적 매개변수(parameter)를 조사하였다. 2-compartment model을 이용한 분석을 통하여 40 및 80 mg/kg Amox를 경구투여한 경우, 혈장농도-시간곡선하 면적(AUC)은 각각 464 및 $667\;{\mu}g{\cdot}h/ml$, 혈중최고농도의 도달시간(Tmax)은 2.1 및 3.6 hr, 혈중최고농도(Cmax)는 3.04 및 $3.4\;{\mu}l/ml$로 계산되었다. 1 mg/kg Amox을 정맥 투여한 경우, 혈장농도-시간곡선하 면적(AUC)은 $748\;{\mu}g{\cdot}h/ml$, 혈중최고농도(Cmax)는 $4.2\;{\mu}l/ml$로 계산되었다. 1일 1회 단독으로 40 및 80 mg/kg Amox를 각각 경구 투여시의 뱀장어내 생체내이용율(F%; bioavailability)은 각각 1.6, 1.1%로 매우 낮게 나타났다. 이러한 결과는 아목시실린을 삼수화물 형태로 사용함에도 낮은 어류내 생체내이용율을 가진다는 사실을 알 수 있다.

2005년부터 2007년 사이 매분기별로 포항, 울산, 기장, 거제, 완도 지역에서 채집한 양식넙치를 대상으로 기생충, 세균 및 바이러스에 대한 병원체 모니터링 결과를 분석하였다. 총 2,238마리 중 1,528마리(68.3%)에서 병원체가 검출되었다. 연도별 검출률을 비교한 결과, 2005년도에는 60.6%, 2006년도에는 66.7%, 2007년도에는 72.3%의 병원체 검출률을 나타내어 해마다 증가하는 것으로 나타났다. 조사시기별 총 병원체 검출률은 2월에 63.5%, 5월에 67.3%, 8월에 75.1%, 11월에 64.2%로 나타났다. 기생충, 세균 및 바이러스의 검출률은 각각 36.7%, 32.8%, 31.4%로 나타났다. 병원체의 단독감염률 및 혼합감염률은 각각 33.6%와 34.6%로 나타났다. 질병별 분포 조사에서 가장 높은 검출률을 나타낸 병원체는 Trichodina sp. (28.2%), viral nervous necrosis virus (24.3%), Vibrio spp. (11.6%), viral hemorrhagic septicaemia virus (10.5%) 순으로 나타났다.

This paper presents a computer program for easy and rapid disease diagnosis of olive flounder diseases. To design the program, standard diagnosis process of the 14 olive flounder diseases was first setup, then implemented four-steps diagnosis program. To run program, first input fundamental information such as water temperature, size of the diseased fish. Then sequentially, three categories of key factors for disease diagnosis which include external clinical signs, internal clinical signs and microscopic observations are selected. When a user selects the observed signs of olive flounder from the listed options, the program provides maximum 5 presumed disease candidates in order. The disease information, treatment and prevention methods are provided by connected web server through internet. The program would support fish doctors and farmers by providing easy and rapid diagnosis of diseased olive flounder.

넙치사료에 유자과실을 갈아서 0, 2.5, 5, 7.5% 첨가하여 3개월 간 사육한 후 사육효과 및 자체 항병력 증가 효과를 알아보았다. 유자를 첨가한 사료에서 성장의 유의적인 증가는 없었으나 7.5% 첨가 사료로 사육한 넙치는 2.5%~5% 첨가한 넙치 보다 체중 증가량이 적었다. 혈액학적인 조사 결과에서도 유자첨가로 인하여 넙치의 생리 상태에 부정적인 영향을 보이지는 않았으며 혈중 GOT 및 총콜레스테롤을 감소시키는 효과가 있어 건강도가 증진되는 것으로 나타났다. 혈청의 항세균 활성은 7.5% 시험구에서 높았으나, 라이소자임 활성은 실험구간 차이가 없었다. 어류병원세균의 인위감염에 대한 넙치의 질병저항성은 실험구 간에 차이가 없었으나 2.5% 유자 첨가구의 넙치에서 폐사가 지연되는 효과를 보였다. 그러므로 사료에 유자를 첨가하여 사육하는 것은 넙치의 어류생리학적 식품영양학적인 면에서 부정적인 영향은 없으나 유자첨가량을 2.5 %~5 % 사이로 하여 사육하는 것이 바람직할 것으로 판단되었다.

10 개체의 붕어, Carassius auratus 아가미뚜껑의 한쪽면에 1-4개체의 거머리, Limnotrachelobdella sinensis들이 기생하고 있었다. 거머리들의 평균 길이는 약 41.0 mm 정도였고, 폭은 11 mm였다. 이들의몸체는 anterior sucker, neck, trunk, posterior sucker로 구성되어 있었고 각각의 평균 길이는 2.3 mm, 7.2 mm, 23.3 mm, 8.7 mm였다. 몸통의 양 옆에는 11쌍의 lateral vesicle이 존재하였다. Anterior sucker를 SEM으로 관찰한 결과 이들은 반구모양으로 중앙에는 proboscis가 나오는 입이 존재하고 있었다. Proboscis는 식도와 바로 연결되어 있었다. 거머리에 의해서 흡혈되어진 붕어의 아가미를 광학현미경으로 관찰하였을 때 새판융합, 새엽 및 새판 상피세포 과증식, 점액세포 증가 및 울혈이 관찰되었다. 하지만 몇몇 개체들에서 나타나는 새엽 상피세포의 괴사 및 수종변성과 식세포의 침투 등은 거머리의 흡혈 활동 이후 세균 혹은 바이러스에 의한 2차 감염이 원인인 것으로 생각되어진다.

Effects of various concentrations of garlic powder and garlic extract in the diets on growth, serum chemistry and immune response of olive flounder were determined. Thirty-five juvenile fish averaging 5.1 g were randomly distributed into 21 of 180 L flow-through tanks. Seven experimental diets with various concentrations of garlic powder (GP) and garlic extract (GE) were prepared in triplicate: GP-0 without garlic supplementation, GP-0.5, GP-1, GP-2, GP-3 and GP-5 diets containing garlic powder at the concentrations of 0.5, 1, 2, 3 and 5%, respectively at the expense of wheat flour and finally, GE-0.4 diet containing 0.4% garlic extract were prepared. At the end of the 8-week feeding trial, serum chemistry of fish was measured. In addition, twenty fish from each tank were artificially infected with E. tarda for the following 96 h to monitor cumulative mortality. Weight gain of fish fed GP-0 diet was higher than that of fish fed GP-1, GP-2, GP-3 and GP-5 diets. No difference in serum criteria (total protein, glucose, glutamate oxaloacetate transaminase, cholesterol and triglyceride levels) of olive flounder was found among the experimental diets except for glutamate pyruvate transaminase. Lysozyme activity of fish fed GP-0, GP-1, GP-3 and GE-0.4 diets was higher than that of fish fed GP-5 diet. The highest cumulative mortality was 93.3% in fish fed GP-0 diet at 96 h after E. tarda infection, followed by GP-3, GP-1, GP-5, GP-2, GP-0.5 and GE-0.4 diets. In considering these results, dietary inclusion of garlic powder and garlic extract has no distinctive positive effect on improvement in growth, serum chemistry and immune response of olive flounder in this experimental conditions, therefore, its application should be carefully considered.

Anisakid nematodes third stage larvae were isolated from the muscles of masou salmon (Oncorhynchus masou). Fish were purchased from Jumunjin fishery market in Gangneung. Four Anisakid third stage larvae were isolated from 4 fish. Molecular identification of the isolated worms was conducted by PCR-RFLP analysis of ribosomal DNA internal transcribed spacer region and direct sequencing of mitochondrial DNA cox2 gene. As results, all the tested individual worms were identified as Anisakis simplex (sensu stricto). This is the first report of molecular detection of anisakid worms in salmonid fishes in Korea.

We constructed a rock bream (Oplegnathus fasciatus) gill cDNA library and a total of 1450 expressed sequence tag (EST) clones were generated. Gene annotation procedures and homology searches of the sequenced ESTs were locally done by BLASTX for amino acid similarity comparisons. Of the 1450 EST clones, 1022 EST clones showed significant homology to previously described genes while 428 ESTs were unidentified, and 259 clones were hypothetical, or unnamed proteins. Encoding 313 different sequences were identified as putative bio-defense genes or genes associated with immune response.