본 연구는 V. harveyi의 luminescence 유무와 해수 어류에 대한 병원성의 관계를 알아보고자 non-luminous V. harveyi 와 luminous V. harveyi 분리 균주로 조피볼락에 대한 병원성 시험을 시행하였다. 시험 균주 V. harveyi 모두 haemolytic activity를 나타내었으며, 어체 내 생존능은 non-luminous V. harveyi 분리 균주 FR 2가 강한 생존능을 나타내었다. 또한 조피볼락에 인위 감염시, non-luminous V. harveyi 분리 균주 FR 2가 강한 병원성을 나타내었으며 luminous V. harveyi 분리 균주 VIB 391은 낮은 병원성을 나타내었다. 결론적으로 조피볼락에서는 non-luminous V. harveyi 분리 균주 FR 2가 강한 병원성을 나타내었으며 luminous V. harveyi 분리 균주 VIB 391은 매우 약한 병원성을 나타내어 luminescence의 유무에 따라 해수 어종에 대한 병원성의 차이가 있을 것으로 생각된다

본 연구에서는 국내 연구보고는 아직 없는 실정이나 양식터봇의 연쇄구균 병원체로 보고 된 바가 있는 제주 양식넙치에서 분리되는 γ 용혈성의 연쇄구균인 Streptococcus parauberis의 특성을 제시하고자 하였다. S. parauberis에 대한 분리균주의 탄소원을 기질로 이용하는 특성은 Annette and Collllins (1990)가 보고한 결과와 유사하였다.또한 분리된 균주들을 계통분류학적 분석 결과 Accesion number AY584477 하나의 그룹으로 묶였지만 S. iniae와는 다른 그룹으로 묶였다. 그러나 Collins가 Streptococcus iniae (X58306)와 S. parauberis (X89967)이 한 그룹으로 묶인다고 발표한 것과는 다른 결과를 나타냈다. 16S rRNA gene에 대한 염기서열 분석 결과는 S. parauberis (AY942572)와 98%이상의 상동성을 나타내어 S. parauberis로 동정하였다. S. parauberis는 S. uberis type Ⅱ로 분류되었으나 Williams and Collins (1990)에 의해서 S. parauberis라는 종명이 제시되었다. 이러한 결과로 볼 때 제주도 양식넙치의 연쇄구균증 병원체로 S. parauberis로 판단되나 이번 실험에서 감염실험이 수행되지 않아 앞으로 본 병원체에 대한 감염 실험과 병리학적인 연구가 필요하다고 사료되어진다.

Phosphoinositide-specific phospholipase Cδ (PLCδ) plays an important role in many cellular responses and is involved in the production of second messenger. The present study was conducted to characterize the catalytic and regulatory properties of the PLCδ of Misgurnus mizolepis (ML-PLCδ). The ML-PLCδ gene was cloned and expressed under according to the method of the previous report (Kim et al., 2004), and its recombinant protein was purified by successive chromatography using Ni2+-NTA affinity column. The recombinant ML-PLCδ showed a concentration-dependent PLC activity to phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate (PIP2) or phosphatidylinositol (PI). Its activity was absolutely Ca2+-dependence, which was similar to mammalian PLCδ isozymes. The Ca2+ concentration yielding maximal activation of ML-PLCδ was 100 μM. However, the activity was decreased interestingly by a polyamine, such as spermine and spermidine. In vitro assay using cholate-micelle cell, ML-PLCδ activity was inhibited in dose-dependent manner by sphinogosine but increased by phosphocholine . In the lipid-binding assay, ML-PLCδ was strongly bound to LPA, PI(3)P, PI(4)P, PI(5)P, PI(3,5)P2, PI(4,5)P2, PI(3,4,5)P3 and PA, but it showed the low affinity to S1P, PI(3,4)P2 and PS. Taken together our results, it is suggested that the general catalytic and regulatory properties of ML-PLCδ are similar with those of mammalian PLCδ1 isozymes, but the N-terminal extended piscine phospholipase Cδ1 (ML-PLCδ) might reflect some distinctions in regulatory properties and inositol-lipid binding specificity between piscine ML-PLCδ and mammalian PLCδ isozymes.

인공 종묘 생산한 황복 (Takifugu obscurus)자어의 사육 중에 발생한 척추 변형의 원인을 조사하기 위하여 변형어를 병리조직학적으로 조사하였다. 척추 변형은 부화 후 80일령의 황복으로 변형의 발생율은 전체 사육 미수의 약 90%였다. 변형어를 soft-X ray로 촬영한 결과 부레의 팽창은 정상적이었으며, 병리조직학적으로는 변형이 발생한 척추 주변의 근섬유 다발이 소형화되면서 모양도 불규칙하게 변하였다. 그러나 새변 연골은 뒤틀림이나 증생 등은 관찰되지 않았다. 척추 변형이 발생한 종묘 생산장에서는 일반적인 사육 방식보다 1-2일 정도 사육수를 빨리 순환시키면서 급이하고 있었는데, 그 후 황복이 무리를 형성하고 나서, 급이하면서 사육수를 환수한 결과 변형의 발생은 없었다. 병어의 조직학적 변화를 사육방식과 더불어 고찰하였을 때, 유영 능력이 불완전한 황복에 급이하면서 사육수를 환수시킴으로써 황복이 먹이를 섭취하기 위하여 수류에 저항하면서 유영한 것이 척추 변형의 원인으로 작용하였을 것으로 생각한다.

인체에 널리 사용되고 있는 Aspirin (ASA)을 양식 뱀장어 (Anguilla japonica) 약욕 또는 경구 투여한 다음 혈장 중의 ASA와 salicylic acid (SA)의 양을 HPLC로 측정하였다. 뱀장어 혈장은 0.2 M HCl과 0.2 M orthophosphoric acid로 산성화시킨 다음 acetonitrile과 혼합하여 ASA와 SA를 추출하였다. 2약제의 정량은 Novapak C18과 UV detector (237 nm)가 장착된 HPLC로 측정하였다. 이 때 이동상은 740 ㎖의 증류수, 900 ㎕의 orthophosphoric acid와 180㎖의 acetonitrile을 사용하였다. ASA, SA 및 내부 표준물질로 사용한 2-methylbenzoic acid (MBA)의 retention time은 각각 4.8분, 8.4분 및 11.4분이였으며, 측정한계 농도는 ASA가 0.05 ㎍/㎖, SA는 0.01 ㎍/㎖였다. 혈장으로 부터의 평균회수율은 ASA가 70.8-99.6%, SA는 95.2-100.3%였다. 뱀장어에 ASA를 약욕 (20 ppm) 또는 경구투여 (50 ㎎/kg BW) 한 다음 채취한 혈장을 시료로 이 방법으로 ASA와 SA의 양을 측정한 결과 단지 SA만 검출되어졌고, ASA는 검출되지 않았다. 이는 ASA가 혈장내에서 신속히 SA로 분해되기 때문으로 판명되었다. 또 ASA에 약욕시킨 경우에는 약욕 후 3시간후에 혈장내의 SA양이 최고치에 도달하였으며, 경구투여 한 경우에는 7일후에 최고치에 도달하였다. 한편 ASA를 투여한 다음 ASA 무첨가 수조에 수용한 결과 2투여 경로 모두 48시간 이후에는 SA가 0.02-0.03 ㎍/㎖이 검출되어 잔류의 문제도 거의 없었다. HPLC를 이용한 혈장내의 ASA와 SA의 검출법은 신속하며 정확한 방법으로 뱀장어 이외의 어류에도 활용 가능할 것으로 생각된다.

2005년 11월과 12월에 걸쳐 연어 수정란 (ChS-E0511, 강원 양양), 무지개송어 수정란 (RaT-E0511, 경남 밀양), 무지개 송어 성어 (Rat-A0512, 강원 평창) 및 산천어 자어 (MaS-F0512, 강원 평창)에서 물곰팡이를 분리하였다. 분리 곰팡이의 분류 결과, 형태학적 및 유전학적 연구를 통하여 4종 모두 Saprolegnia parasitica로 확인되었으며, 연어 수정란으로부터 분리된 ChS-E0511 균주는 조란기 (oogonia)와 무성아 (gemmae)를 형성하므로 S. parasitica group 1으로 분류되었다. 분리균주인 ChS-E0511을 이용하여 다양한 약물의 성장 억제 효과를 측정한 결과, 사용금지 약물인 malchite green에 대한 약물 효과가 높게 나타났으며, 손바닥선인장 (Opuntia ficus-indica) 추출물 (MBT-01108), 2-bronopol (BNP) 및 sodium chloride 등에 대한 무지개송어 수정란의 상대발안율이 높게 나타났다. 본 연구의 결과, 국내 연어과 어류의 질병과 관련한 곰팡이는 S. parasitica로서 2가지 이상의 group으로 구분되며 다양한 약물들에 대한 평가가 지속적으로 이루어 져야 할 것으로 사료된다.

평균체중 96 ± 3.6 g (평균전장 43 cm)의 극동산 뱀장어 (Anguilla japonica)에 대한 포르말린의 급성독성 실험 (수온 27～28℃, pH 7.4, 용존산소량 5.6 ppm)을 실시하였다. 특히 이 시험은 뱀장어에서 Pseudodactylogyrus 구제를 위해 포르말린을 사용할 때 치료농도에서 뱀장어가 안전한가를 평가하기 위해서 수행하였다. 포르말린 농도별 (0～500 ppm) 침지 후, 500 ppm에서는 10시간째, 400 ppm에서는 24시간째 전 실험어가 사망하였다. 24시간 경과한 후 300 ppm에서는 96.6% 그리고 200 ppm에서는 13.3%의 누적사망률을 각각 나타내었다. 그러나, 100 ppm에서는 24시간 동안 실험어가 모두 생존하였다. 뱀장어에 대한 포르말린의 24시간-LC50은 269 ppm으로 나타났다.

손바닥선인장 가수분해 추출물을 양식어류의 사료에 첨가 투여하였을 때 어류의 체내 생리활성변화 유도 또는 세균성질병에 대한 예방효과를 가져오는지를 검토하였다. 체중, HSI, Ht수치, 혈장성분분석, 조직학적 검사에서 대조구와 첨가사료 투여구 사이에서 유의한 차이는 인정되지 않았으나, 면역활성 조사에서 첨가사료 투여구의 4주째 CL수치가 대조구와 비교하여 유의성을 나타내었다. 그러나 라이소자임 활성에는 변화가 없었다. 어병세균으로 대표적인 E. tarda와 S. iniae에 대한 공격실험에서도 4주째 첨가사료를 먹인 처리구가 대조구와의 상대생존율에서 각각 82.0%와 13.5% 수치를 나타내었다

잉어의 선천성 면역 인자가 관여하는 항바이러스 면역 반응을 조사하기 위해 UV-inactivated SVCV, Poly I:C 및 Con A를 주사한 후 3일째 라이소자임 활성, 혈청 내 보체의 살균능력 및 식세포의 활성산소량을 조사하였다. 그 결과, 모든 시험구에서 혈청 내 라이소자임의 활성은 유의적인 차이를 나타나지 않았으나, 두신 조직의 라이소자임 활성은 대조구에 비해 유의적으로 증가하였다. 또한, 혈청 내 보체의 살균 능력도 모든 시험구에서 대조구와 유의적인 차이가 없었다. 그러나 식세포의 활성은 UV-inactivated SVCV 시험구에서는 농도에 따라 증가한 것으로 나타났으며, Poly I:C 및 Con A 시험구에서는 저농도에서 활성이 증가한 것으로 나타났다. 바이러스에 대한 방어력을 조사하기 위해 주사 후 4일째 1×104 TCID50/fish 농도의 SVCV로 인위 감염한 결과 UV-inactivated SVCV 및 Poly I:C 시험구에서는 Con A 시험구에 비해 높은 방어력을 나타내었다. 또한, Poly I:C 시험구에서 라이소자임 및 식세포 활성이 다소 감소한 고농도에서도 높은 방어력이 유도된 것으로 나타나 이러한 결과는 Poly I:C에 의해 자극된 또 다른 비특이적 면역 인자가 SVCV에 대한 방어반응에 관여한 것으로 추정된다.