• 미생물학회지
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• 제52권3호
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• pp.383-387
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• 2016

분열효모 Schizosaccharomyces pombe의 cdc31 유전자는 진화적으로 잘 보존된 $Ca^{2+}$-결합 centrin/CDC31 계열에 속하며 방추극체(spindle pole body)의 한 성분인 단백질을 암호화하고 있다. 이 논문에서는 S. pombe의 Cdc31 단백질이 방추극체뿐만 아니라 TREX-2 복합체의 구성인자로서 mRNA의 핵에서 세포질로의 방출에 영향을 미치는지 알아보았다. cdc31 유전자의 발현을 억제하면 생장 결함을 보였고, $poly(A)^+$ RNA도 핵 안에 축적되는 현상을 보였다. 한편 cdc31 유전자를 과발현시키면, 생장과 mRNA 방출에 결함을 보이진 않았지만 세포의 길이가 길어지는 형태를 보였다. Yeast two-hybrid 분석에서 Cdc31 단백질은 TREX-2 복합체의 또 다른 구성인자인 Sac3 그리고 Pci2와 상호작용을 하였다. 이와 같은 결과들은 S. pombe의 Cdc31 단백질도 역시 TREX-2 복합체의 구성인자로 mRNA 방출에 관여하고 있음을 시사한다.

• 미생물학회지
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• 제55권2호
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• pp.112-116
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• 2019

Thp1/PCID2 단백질은 전사와 연계되어 mRNA를 핵에서 세포질로 방출하는데 필요한, 진화적으로 보존된 TREX-2 복합체의 구성요소이다. 분열효모인 Schizosaccharomyces pombe에는 Thp1/PCID2 단백질의 이종상동체가 2개 존재한다. pci2(SPBC1105.07c) 유전자 이외에, SPAC1B3.08 유전자는 PCI 영역을 갖고 있으며 TREX-2 복합체의 구성요소로 추정되는 단백질을 암호화하고 있다. SPAC1B3.08을 과발현하면, 생장이 약간 느려지고 mRNA 방출에 결함을 보였다. Yeast two-hybrid와 공동침전 분석 실험에서 SPAC1B3.08 단백질은 TREX-2 복합체의 다른 구성요소인 Sac3, Dss1 단백질들과 상호작용하였다. 이와 같은 관찰들은 S. pombe의 SPAC1B3.08 단백질도 TREX-2 복합체의 구성요소로서 mRNA 방출에 관여할 가능성을 지지한다.

• 생명과학회지
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• 제22권12호
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• pp.1608-1613
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• 2012

KIF5/Kinesin-I는 경쇄(light chain)를 통하여 결합함으로써 다양한 운반체들을 미세소관을 따라 운반한다. Kinesin light chains (KLCs)은 tetratricopeptide repeat (TPR) 영역을 매개로 운반체와 결합한다. 현재까지 KLCs와 결합하는 많은 운반체들이 확인되었으나 KLCs가 어떻게 특정운반체를 인식하여 결합하는지는 아직 확실히 밝혀지지 않았다. 본 연구에서 KLC1의 TPR 영역과 결합하는 단백질을 분리하기 위하여 효모 two-hybrid system을 이용하여 탐색한 결과 amyloid precursor protein (APP)과 결합하는 것으로 보고된 protein interacting with APP tail 1 (PAT1)을 분리하였다. KLC1은 PAT1의 C-말단 부위와 결합하며, PAT1은 KLC1의 TPR 영역을 포함한 부위와 결합함을 효모 two-hybrid assay로 확인하였다. 또한 PAT1는 KLC2와도 결합하였지만 kinesin heavy chains (KHCs)인 KIF5A, KIF5B, KIF5C와는 결합하지 않았다. 단백질간 결합은 glutathione S-transferase (GST) pull-down assay와 공동면역침강으로도 확인하였다. 생쥐의 뇌 파쇄액을 PAT1 항체와 APP 항체로 면역침강을 행한 결과 KLC와 KHCs가 같이 침강하였다. 이러한 결과들은 PAT1이 Kinesin-I와 APP 포함 소포간의 상호작용을 매개한다는 것을 시사한다.

• 생명과학회지
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• 제21권8호
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• pp.1076-1082
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• 2011

미세소관(microtubule) 위를 이동하는 키네신은 분비소포를 이동시키는 운동단백질이다. KIF5s (KIF5A, KIF5B and KIF5C)는 세포막으로 싸인 각종 세포 내 소기관과 결합하여 미세소관을 따라 목적지까지 이동시킨다는 결과는 알려져 있지만, 어떻게 상대의 cargo를 인식하는지는 밝혀지지 않았다. 본 연구는 KIF5B의 결합 단백질을 동정하기 위하여 효모 two-hybrid system을 사용하여 KIF5B와 특이적으로 결합하는 Myo9b을 확인하였다. Myo9b는 액틴위를 이동하는 운동단백질로 다른 KIF5s들과도 결합함을 효모 two-hybrid assay로 확인하였다. 또한 Myo9s의 GTPase 활성화 단백질(GAP) 영역은 KIF5B와 결합하는데 필수영역임을 확인하였고, 이러한 단백질간의 결합은 Glutathione S-transferase (GST) pull-down assay를 통하여서도 확인하였다. 생쥐의 뇌 파쇄액에 KIF5B들의 항체로 면역침강을 행하여 Myo9s 단백질을 확인한 결과, KIF5s는 Myo9s 단백질과 특이적으로 함께 침강하였다. 이러한 결과들은 kinesin-I는 액틴 결합 운동단백질과 직접 결합함을 보여준다.

• 생명과학회지
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• 제19권7호
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• pp.859-865
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• 2009

미세소관은 세포골격단백질의 중요한 구성 단백질로 축삭돌기 내에서는 세포막 방향으로 정렬되어 있다. Kinesin superfamily (KIFs)는 세포 내에서 미세소관을 따라 세포 내 소포들을 운반하는 분자 자동차 (molecular motor) 단백질이다. 본 연구에서 우리는 효모 two-hybrid system을 사용하여 KIF1A의 coiled-coil 영역과 결합하는 단백질로 미세소관 불안정화 요소인 SCG10 단백질을 분리하였다. SCG10은 KIFs에서 KIF1A와만 특이적으로 결한 하며, KIF1A의 400에서 820아미노산 부위가 SCG10과의 결합에 필수적임을 효모 two-hybrid assay로 확인하였다. 또한 SCG10의 coiled-coil영역은 KIF1A와의 결합에 필수영역임을 확인하였으며 단백질간의 결합은 Glutathione S-transferase pull-down assay를 통하여 확인하였다. 생쥐의 뇌 파쇄액에 SCG10항체로 면역침강을 행하여 KIF1A를 확인한 결과KIF1A는 SCG10과 특이적으로 같이 침강하였다. 이러한 결과들은 KIF1A는 SCG10와 결합하여 SCG10이 포함된 소포를 미세소관을 따라 이동시킴을 시사한다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제55권1호
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• pp.67-70
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• 2012

Plant MYB transcription factors regulate secondary metabolism, cellular morphogenesis, and plant hormone signaling pathway. MYB proteins in plants consist of two repeats of 50 amino acid residues, which are referred to as R2R3 and they interact with WD40 or basic helix loop helix (bHLH) proteins. Yeast two hybrid assay was determined whether rice MYB protein interacts with either OsTTG1, which contains a WD40 domain, or with OsGL3, which contains a bHLH domain. Among 30 OsMYB proteins, three interacted with OsTTG1 and five interacted with OsGL3. A series of MYB mutants were created to determine the MYB domain important for the interaction with OsTTG1 or OsGL3. By using the yeast two hybrid assay, we found that the R3 motif of OsMYB10 and the R2 motif of OsMYB16 were required for interaction with OsTTG1 and OsGL3 proteins, respectively.

• 생명과학회지
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• 제27권6호
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• pp.673-679
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• 2017

미세소관을 따라 이동하는 모터단백질들은 세포내 물질수송에 필수적인 역할을 한다. Kinesin 1은 세포내에서 미세소관을 따라 움직이는 모터단백질로서 다양한 소포, mRNA, 그리고 단백질의 세포내 수송에 관여한다. Kinesin 1은 2개의 장쇄단위체(KHCs, 또는 KIF5s)와 2개의 경쇄단위체(KLCs)로 구성되어 있다. KIF5s는 N-말단에 모터도메인을 가지고 있고 C-말단의 운반체 결합도메인을 통해 다양한 운반체와 결합한다. 본 연구에서 KIF5B와 결합하는 단백질을 분리하기 위하여 효모 two-hybrid 탐색을 수행한 결과 미세소관의 plus end 결합단백질인 cytoplasmic linker protein 170 (CLIP-170)을 분리하였다. CLIP-170의 coiled-coil 도메인은 KIF5B의 운반체 결합도메인과 결합하였다. 또한 CLIP-170은 KIF5A와 KIF5C와도 결합하였다. 그리고 glutathione S-transferase (GST) pull-down을 통해 KIF5s와 CLIP-170이 단백질수준에서 결합함을 확인하였다. 생쥐 뇌파쇄액을 KIF5B 항체로 면역침강한 결과 CLIP-170이 같이 침강함을 확인하였다. 이러한 결과들은 kinesin 1이 세포내에서 CLIP-170을 운반함을 시사한다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제44권4호
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• pp.303-312
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• 2006

Interactions between GRA proteins of dense granules in Toxoplasma gondii and host cell proteins were analyzed by yeast two-hybrid technique. The cMyc-GRA fusion proteins expressed from pGBKT7 plasmid in Y187 yeast were bound to host cell proteins from pGADT7-Rec-HeLa cDNA library transformed to AH109 yeast by mating method. By the selection procedures, a total of 939 colonies of the SD/-AHLT culture, 348 colonies of the $X-\alpha-gal$ positive and PCR, 157 colonies of the $X-\beta-gal$ assay were chosen for sequencing the cDNA and finally 90 colonies containing ORF were selected to analyze the interactions. GRA proteins interacted with a variety of host cell proteins such as enzymes, structural and functional proteins of organellar proteins of broad spectrum. Several specific bindings of each GRA protein to host proteins were discussed presumptively the role of GRA proteins after secreting into the parasitophorous vacuoles (PV) and the PV membrane in the parasitism of this parasite.

• 미생물학회지
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• 제51권2호
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• pp.181-185
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• 2015

Tho2/THOC2는 전사 과정을 mRNA 성숙 및 방출과 연결함으로써 mRNP의 생성에 중요한 역할을 담당하는 THO 복합체의 구성인자이다. 분열효모 Schizosaccharomyces pombe의 유전체 데이터에서 Tho2/THOC2의 이종상동체를 찾아 기능을 분석하였다. 4분체 분석 결과 이 유전자는 생장에 필수적이었다. S. pombe tho2 유전자의 발현을 억제하거나 과발현시키면 생장이 저해되는데, 세포의 길이가 길어지고 비정상적인 DNA분포와 $poly(A)^+$ RNA가 핵 안에 축적되는 표현형을 보였다. 또한 정상적인 기능을 가진 GFP-Tho2 단백질은 주로 핵 안에 존재하였다. Yeast two-hybrid 분석에서 Tho2는 THO 복합체의 또 다른 구성인자인 Tex1과 상호작용을 하였다. 이와 같은 결과들은 S. pombe의 Tho2 상동체도 THO 복합체의 구성인자로 mRNA 방출에 관여하고 있음을 시사한다.

• 한국양식학회:학술대회논문집
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• 한국양식학회 2004년도 수산관련학회 공동학술대회 발표요지집
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• pp.199-200
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• 2004