Pinewood nematode (PWN) trapping by nematophagous fungi, Arthrobotrys conoides, A. dactyloides and A. oligospora and the fungal growth were characterized. The three Arthrobotrys species each was inoculated into the PWN cultured on Botrytis cinera fungal colony on potato dextrose agar (PDA). The effects of temperature, pH, PWN inoculation density and nutrients on the growth of the three Arthrobotrys spp were measured. A. conoides grew fast, 13.9 mm/day while A. dactyloides grew slow, 3 mm/day. PDA medium was the best for the fungal growth at $25^{\circ}C$ and pH 4.5. The Arthrobotrys spp growth was stimulated by 500 nematodes inoculation but not by 1000 inoculation. A. dactyloides did not grow below pH 4.5 and at high PWN density. A. conoides and A oligospora formed trapping organs with thick constricting hyphal network only when PWN present, while A. dactyloides formed the organ with circular hyphae constitutively. A. conoides formed trapping organs faster than A. oligospora did. The nematode trapping hyphae of the fungi penetrated into PNW inside to form many tiny infection bulbs and to digest the nematode. However, A. dactyloides formed a few trapping organs but no trapping was observed. Infection rate of PWN was 95% by A. conoides, 80% by A. oligospora and 92% by the combination inoculation of A. conoides and A. oligospora. In contrast A. dactyloides increased PWN density without infecton. There was no interaction effect in any combination inoculation of the three Arthrobotrys spp. A. conoides enhanced PWN infection rate by rapid hyphal growth and early trapping, while A. oligospora did it by increasing hyphal density. In conclusion A. conoides is the most effective in both hyphal growth and infection, and thus these characteristics can be utilized as a biological control of PWN.
Chitinase AO-801 is a hydrolase secreted by Arthrobotrys oligospora during nematode feeding, while its role remained elusive. This study analyzed the molecular characteristics of recombinant chitinase of Arthrobotrys oligospora (reAO-801). AO-801 belongs to the typical glycoside hydrolase 18 family with conserved chitinase sequence and tertiary structure of (α/β)8 triose-phosphate isomerase (TIM) barrel. The molecular weight of reAO-801 was 42 kDa. reAO-801 effectively degraded colloidal and powdered chitin, egg lysate, and stage I larval lysate of Caenorhabditis elegans. The activity of reAO-801 reached its peak at 40℃ and pH values between 4-7. Enzyme activity was inhibited by Zn2+, Ca2+, and Fe3+, whereas Mg2+ and K+ potentiated its activity. In addition, urea, sodium dodecyl sulfate, and 2-mercaptoethanol significantly inhibited enzyme activity. reAO-801 showed complete nematicidal activity against C. elegans stage I larvae. reAO-801 broke down the C. elegans egg shells, causing them to die or die prematurely by hatching the eggs. It also invoked degradation of Haemonchus contortus eggs, resulting in apparent changes in the morphological structure. This study demonstrated the cytotoxic effect of reAO-801, which laid the foundation for further dissecting the mechanism of nematode infestation by A. oligospora.
For the biological control of the root-lesion nematodes, Pratylenchus spp., which damage directly and indirectly to the leaf perilla, the nematical effect of three nematode-trapping fungi, Arthrobotrys oligospora, A. conoides and A. dactyloides was evaluated in the field. Three species of Arthrobotrys were isolated from the culture soil of leaf perilla in 1998 and were observed the capture of the root-lesion nematodes, Pratylenchus spp. by adhesive hyphal networks or constricting rings on agar. At 40 days after treatment, the plant-parasitic nematodes and root-lesion nematode populations were approximately increased 3.5 fold in untreated control plot, while the nematode population in fungi treatment plots was similar to initial population. In the A. dactyloides plot, however, the population of plant-parasitic nematodes and Pratylenchus spp. was approximately reduced 65% and 53%, respectively. Thus, the fungus A. dachyloides should provide as biological agent for the control of Pratylenchus spp.
Five nematophagous fungi, Arthrobotrys arthrobotryoides, A. conoides, A. oligospora, Dactylella lobata and Fusarium oxysporum were evaluated for nematicidal effect on Meloidogyne hapla in greenhouse. Treatment of nematophagous fungi reduced the root galling by M. hapla and increased red-pepper growth in naturally infested pot soil. Number of galling were significantly less inall pots in 4 different inoculum densities of 5 nematophagous fungi compared to untreated plots. Especially, treatment of F. oxysprum resutled significant reduction of root gall of red-pepper. The increased shoot growth was significantly higher in pretreated plots by A. arthrobotryoides, A. conoides, A. oligospora, D. lobata and F. oxysporum at inoculum concentration of 1:100 but other treatments were not significantly increased shoot growth. Two promising fungi, D. lobata and F. oxysporum were selected in greenhouse test and in vitro results of previously experiment and applied to field plot naturally infested by M. hapla serverely. Number of galls were remarkably fewer in plots treated with D. lobata and F. oxysporum at either 1:70 or 1:100 concentration compared to the untreated plots. The shoot growth of red-pepper was increased strikingly in the plots following the red-pepper was increased strikingly in the plots following the treatment of both fungus than greenhouse test.
Using dilution plating method, 47 fungal isolates were obtained from a soil sample collected from Dokdo in the East Sea of Korea in 2013. In this study, two fungal isolates, EML-MFS30-1 and EML-DDSF4, were confirmed as undescribed species, Metarhizium guizhouense and Mortierella oligospora in Korea based on current classification system using multi loci including rDNA internal transcribed spacer, large subunit, small subunit, and ${\beta}$-tubulin (BTUB) genes. Herein, detailed morphological descriptions on characters of the undescribed fungal species as well as their molecular phylogenetic status are provided with comparisons to related species.
42 strains belonging to the genus Arthrobotrys and 17 strains belonging to the genus Monacrosporium, were isolated from soil specimens collected from the various localities in South Korea. 4 species of Arthrobotry and 2 species of Monacrosporium, which are unrecorded in Korea, were identified according to the Harrd and Cooke classification key, respectively. The species identified are as follows ; A.conoides, A. oligospora, A. musiformis, A. oviformis, M. crystosporum nd M. salinum.
Twenty-two strains of nematophagous fungi were isolated from 100 soil samples. Nematophagous fungi were classified into three categories; 3-dimensional adhesive nets (A group), 2-dimensional adhesive nets (B group) and constricting ring (C group). Nine strains were selected and identified on the basis of morphological characteristics (hypha, conidiophore, form and size of conidia, number of conidia, node of conidophore, number and location of septa, size and color of chlamydospore) and ITS (internal transcribed spacer) region of rDNA sequences. As the results, the isolated were identified as belonging to the species of Monacrosporium thaumasium (Kan-2, Kan-4, Kan-11), Arthrobotrys oligospora (Kan-9, Kan-13, Kan-20, Kan-21), A. musiformis (Kan-12), and A. dactyloides (Kan-22).
A survey of 43 soil samples collected from southern Korea has shown that nematophagous fungi occurred in a variety of habitats. Nine predatory and two endoparasitic species were isolated. Habitats were classified into four types, i. e., mountain, upland, paddy field and greenhouse. Of these, greenhouse and upland had the highest incidence of nematophagous fungi $(95{\sim}100%)$ compared with mountain (37.5%) and paddy field (16.7%). The most common species was Arthrobotrys oligospora Fres., which was isolated from 25.5% of soil samples. Net forming species were the most abundant (72.5%), followed by constricting ring (10.0%), adhesive hyphae (7.8%), endoparasitic fungi (5.0%), and adhesive knob (4.8%). Nematophagous fungi were isolated move frequently from cultivated soil rather than uncultivated mountainous soil.
Nematode-trapping fungi develop trap and consume nematodes are an important part of the subsoil ecosystem and they share a special predator-prey relationship. Four nematode-trapping species, there with adhesive network, Arthrobotrys oligospora, A. sinensis, A. thaumasia and one with constricting ring, Drechslerella brochopaga were collected from soils in Korea and tested their predacity against 12 different nematode species. They were three feeding groups, plant-parasitic (Meloidogyne incognita and Pratylenchus penetrans), fungivorous (Aphelenchus avenae), bacteriovorous (Betlerius sp. and Diplogasteritus sp. in diplogasterid, Panagrolaimus labiatus, P. multidentatus in panagrolaimid, Mesorhabditis irregularis, Pelodera strongyloides and Rhabditis sp., in rhabditid, and Acrobeloides sp. in cephalobid). Results showed that nematode-trapping fungi successfully captured most of nematodes in Petri dish in the group of plant-parasitic nematodes and rhabditids, moderately and variably in other nematodes in 15 days. But it didn't captured A. avenae and Acrobeloides sp. both belongs to c-p group 2. Numbers of Acrobeloides sp. and A. avenae even increased during the test period. The results of this study indicated that nematode-trapping fungi may have specificity among nematode species.
Nematophagous fungi were successfully isolated by baited plating, centrifugation technique of soil, and direct isolation from naturally ingested nematodes. Predominant seven fungi isolated were identified as Artheobotrys arthroboteyides, A.conoides, A. oligospora, Dactylella lobata, Fusatium oxysporum, Monacrosporium ellopsoporum and Harposporium anguillu-lae. Of these, six fungi were tested for cultural characteristics except. H, anguillulae, extre-mely fastidious fungus in artificial media. Among 14 media tested in this experiment, Corn-meal Agar (CMA) and Oatmeal Agar (OMA) were the most suitable media for growing all six nematophagous fungi. Weakly saprophytic M. ellipsospoyum also grew vigoroualy on these two media. The radial growth, dry weight and sporulation of the fungi tested were quite diverse depending on the culture media. D. lobata revealed good growth and abundantly sporulated on Glucoes Peptone Agar (GPA). Although over-all growth of F, oxysporum was not satisfactory on Sucrose Nitrate Agar (SNA), the sporulation was best on this medium. Optimum conditious for mycelial growth and sporulation of nematophagous fungi ranged pH 5-8 and 20-$30^{\circ}C$ on SNA. D. lobata and F, oxysporum grew vigorously and most profusely sporulated on all media tested. They turned out an most promising biocontrol agents for their aggressive growth and sporulation over the ranges of temperature and pH ranges.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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