• 제목/요약/키워드: 역전사중합효소연쇄반응

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한우 난포낭종에서 증가되는 섬유소원 유전자 발현 (Fibrinogen mRNA Expression Up-Regulated in Follicular Cyst of Korean Cattle)

  • 탁현민;한재희;강다원
    • 한국수정란이식학회지
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    • 제25권1호
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    • pp.29-34
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    • 2010
  • 난포낭종은 소 번식 장애의 주요 원인 중의 하나이며, 다양한 유전자의 변화는 여러 세포와 조직 기능에 영향을 준다. 이러한 유전자 변화는 낭종성 난소에서도 나타날 수 있다. 이온 및 수송체와 관련된 유전자 변화가 한우의 난포낭종을 유발할 수 있을 것이라는 가설 하에 난포낭종성 난포에서 발현 변화를 보이는 유전자를 찾기 위하여 마이크로어레이 분석을 수행하였다. 마이크로어레이 분석 결과, 난포낭종성 난포에서 FGG와 LRP8이 증가하고, SLC44A4, SLC27A5, ANXA8 및 aquaporin 4는 감소하였다. 반정량적 역전사중합효소 연쇄 반응으로 마이크로어레이 분석 결과를 재확인하였다. 6개의 DEG 중 3개의 DEG(FGG, SLC44A4 및 aquaporin 4)는 마이크로어레이 분석 결과와 동일하게 증가와 감소를 보였다. 마이크로어레이와 역전사중합효소 반응에서 동일한 결과를 보이는 3개의 유전자 중 가장 크게 변화를 보인 섬유소원에 중점을 두고 연구를 수행하였다. 마이크로어레이와 역전사중합효소 연쇄 반응은 난포낭종성 난포에서 섬유소원 유전자 발현을 각각 8.4배와 1.7배 증가시켰다. 그러나 난포 및 과립층세포에서 섬유소원의 단백질 양은 웨스턴 블랏 분석으로 분석한 결과, 정상에 비하여 낭종에서 유의한 차이를 보이지 않았다. 본 연구에서 섬유소원은 유전자와 단백질 발현에 있어 상관관계는 보이지 않았지만 섬유소원 유전자는 정상 조직으로부터 난포낭종을 구별하는데 있어서 중요한 생물표지자가 될 수 있는 가능성을 제시한다.

역전사중합효소연쇄반응을 이용한 개심장사상충의 검출 (Detection of Dirofilaria immitis by Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction in Canine)

  • 이영준;박진호;권오덕;이주목
    • 한국임상수의학회지
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    • 제16권1호
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    • pp.177-181
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    • 1999
  • This study was undertaken to clarify the more accurate detecting method of Dirofilaria immitis. Seven dogs, average 7.47 years old, confirmed with Dirofilaria immitis infection by modified Knott's method were used as the experimental animals. cDNA was constructed using oligodT(15) primer after extracting total RNA from the blood of dogs that were confirmed with Dirofilaria immitis infection. As a result of polymerase chain reaction with template using constructed cDNA, the predicted products of a 378 base-pair DNA fragment was amplified. From these results, RT-PCR was more sensitive and effective than modified Knott's method to detect Dirofilaria immitis in dogs.

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순무모자이크바이러스에 대한 무 육종 계통 저항성 평가 (Resistance Evaluation of Radish (Raphanus sativus L.) Inbred Lines against Turnip mosaic virus)

  • 윤주연;최국선;김수;최승국
    • 식물병연구
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    • 제23권1호
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    • pp.60-64
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    • 2017
  • 무(Raphanus sativus L.) 육종 계통들에 대한 순무모자이크 바이러스(Turnip mosaic virus, TuMV) 저항성을 평가하기 위하여, 20개 무 육종계통들의 잎에 순무모자이크바이러스 BR 병원성을 가지는 국내 분리 계통을 즙액 접종하였다. 순무모자이크바이러스를 접종한 무 개체들은 $22^{\circ}C{\pm}3^{\circ}C$에서 재배하였으며 4주 동안 바이러스 병징 발현을 육안으로 조사하여 저항성을 평가하였다. 순무모자이크바이러스 감염에 의해서 무 육종계통들의 다른 병징 발현에 의해 분석한 결과, 16개 무 계통은 약한 모자이크, 모틀링에서 심한 모자이크 전신 병징을 보였으며 감수성으로 판별되었다. 이러한 결과는 순무모자이크바이러스 외피단백질 유전자에 대한 특이적 역전사중합효소연쇄반응에 의하여 확인되어, 순무모자이크바이러스가 병징을 발현시킨 원인이었다. 이와는 다르게 4개 무 육종계통들에서는 모자이크 등 전신 감염 병징이 발현되지 않았으며, 동일한 무 육종 계통들의 개체들에서 8주 동안 병징이 관찰되지 않았다. 역전사중합효소연쇄반응으로 조사한 결과 4개 무 육종 계통들의 상엽들에서 순무모자이크바이러스가 검출되지 않았다. 이런 결과는 4개 무 육종계통들이 순무모자이크바이러스에 대한 강한 저항성을 가지고 있음을 예시해준다.

생쥐의 자궁내막에서 발정주기에 따른 aquaporin 4, 5, 8의 발현양상과 존재부위

  • 이지원;계명찬;강수만;이성은;강한승;김문규
    • 한국발생생물학회:학술대회논문집
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    • 한국발생생물학회 2003년도 제3회 국제심포지움 및 학술대회
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    • pp.61-61
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    • 2003
  • Aquaporins (AQPs)는 다양한 상피세포와 내피세포에 존재하며 다량의 물 수송을 촉진하는 막성단백질로 현재 11개의 AQP가 (AQP0-10) 발견되었으나, 아직 생리적, 기능적 분석은 불충분한 상태이다. 생쥐의 자궁내막은 발정주기 동안 호르몬의 자극에 따라 부풀어오르거나 수축하는 변화를 보이며 에스트로젠과 몇몇 혈관에 작용하는 매개체에 의해 자궁 혈관의 투수성이 증가한다는 보고는 있으나, 자궁액의 수송 메커니즘에 대해서는 뚜렷하게 밝혀진 바가 없다. 발정기의 생쥐 자궁은 자궁내막세포의 증식과 함께 수화되는 특징을 보이며 자궁내강으로 물이 수송되어 luminal fluid의 점성이 낮아지는 현상이 나타나는데, 이 때 AQP가 water channel로서 중요한 역할을 할 것으로 보고 본 실험에서는 면역조직화학법(immunohistochemistry)과 역전사중합효소연쇄반응(Reverse-transcriptase polymerase chain reaction)을 통해 발정기 자궁의 수화와 AQP 발현의 상관성에 대해 알아보고자 하였다. 면역조직화학법의 결과 발정주기의 다른 시기에 비해 발정기(estrus phase)에 자궁상피세포에 AQP4, 5, 8 protein이 다량 존재하는 것으로 밝혀졌고, 근육층(myometrium)에서의 발현은 발정주기 동안 차이가 없었다. Whole uterus로 RT-PCR을 수행한 결과 AQP4, 5, 8 mRNA는 luteal phase에 비해 follicular phase에 더 많이 발현하는 것으로 확인되었다. 또한 LCM(Laser Capture Microdissection) system을 이용하여 luminal epithelium과 stromal cell을 분리하여 RT-PCR을 수행한 결과 AQP4, 5, 8 mRNA는 stromal cell 보다는 luminal epithelium에 더 많이 발현하며, 이 역시 follicular phase에 발현량이 증가함을 확인하였다. 이러한 결과로 미루어 생쥐 자궁에서 AQP4, 5, 8은 발정주기 내막에 발현이 증가하며 이는 자궁내강 안으로 수분을 수송하는데 주요한 기작으로 사료되며 estrogen에 의한 조절 가능성을 암시한다.

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우유 내 활력있는 Salmonella를 검출하기 위한 fimA 유전자의 역전사중합효소 연쇄반응의 개발 (Development of Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction of fimA Gene to Detect Viable Salmonella in Milk)

  • 최석호;이승배
    • Journal of Animal Science and Technology
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    • 제46권5호
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    • pp.841-848
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    • 2004
  • 살균된 우유에 오염된 Salmonella의 신속한 검출 방법을 공중 보건의 보호를 위하여 중요하다. RT-PCR 방법은 생균과 사균을 분별하여 검출할 수 있는 분자유전학적 방법이다. 본 연구의 RT-PCR 방법은 Salmonella의 type 1 fImbriae의 단량체 단백질을 암호화하는 fimA 유전자의 mRNA를 주형으로 하여 DNA를 증폭하는 방법으로서 활력이 있는 Salmonella를 검출할수 있기 위하여 개발되었다. RNA 시료를 RQRNase-free DNase로 처리하여 오염된 DNA를 파괴하여 RT-PCR 반응에서 주형으로서 DNA가 합성되는 것을 방지할 수 있었다. 이 RT-PCR 방법은 Salmonella 7균주를 검출하였으나 Escherichia coli, Shigella sonnei, Citrobacter freundii, 및 Klebsiella pneumoniae 는 검출하지 않았다. 우유 내에서 열처리된 $10^7/ml10^6/ml$ 세균수의 Salmonella는 검출되 었으나 $10^5{\sim}100/ml$는 검출되지 않았다. RT-PCR를 검출할 수 있는 활력이 있는 Salmonella의 최소 세균수는 100/ml이었다.

약용식물 추출물의 아토피성 피부염에 대한 항염증 및 항알레르기 효과 (제 2 보) (Anti-inflammatory and Anti-allergic Effects of Herbal Extracts on Atopic Dermatitis ( Part II ))

  • 랑문정
    • 한국응용과학기술학회지
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    • 제30권1호
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    • pp.173-182
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    • 2013
  • 아토피성 피부염은 만성 재발성 염증성 피부질환으로 피부장벽기능의 이상과 환경유발인자에 대한 피부과민성과 연관되어 있다. 이전의 연구에서는 아토피성피부염에 효과적인 약용식물 추출물을 발굴하기 위하여 노회, 자회지정, 석류, 석곡 추출물들의 세포독성, 항산화, 항염, 항알레르기 효과를 검토하였다. 본 연구에서는 지질다당류로 활성화시킨 대식세포 RAW26.7 에 대한 약용식물 추출물들의 항염작용을 보다 상세하게 검토하여 항염작용의 근본적인 분자기전을 확인하고자 하였다. 역전사중합효소연쇄반응분석(reverse transcription polymerase chain reaction analysis) 결과, 석류, 석곡, 노회는 염증성 사이토카인인 IL-6 와 IL-$1{\beta}$ 유전자발현을 현저하게 억제시켰으며 자화지정은 영향이 없었다. 형질주입과 발광효소분석(transfection and luciferase analysis) 결과, 약용식물 모두가 전사 핵인자 카파비(NF-${\kappa}B$)의 활성화를 억제시켰다. 웨스턴 블럿 분석(western blot analysis) 결과, 노회는 JNK MAP 인산화효소의 활성화를 차단하였지만 p38 MAP 인산화효소의 활성화는 차단하지 못하였다. 반면에 자화지정, 석류, 석곡은 JNK MAP 인산화효소뿐만 아니라 p38 MAP 인산화효소의 활성화도 차단하였다. 이들 실험결과들은 노회, 자화지정, 석류, 석곡은 항염효능을 가지고 있으며 따라서 아토피성 피부염의 증상을 경감 또는 완화시키는 잠재력이 있음을 보여 준다.

C형 간염의 진단을 위한 역전사중합효소연쇄반응과 효소면역측정법의 타당성 평가 (Assessment of Validity of RT-PCR and EIA for The Detection of Hepatitis C Virus Infection)

  • 손병철;전진호;박영홍;신해림;조규일;김종한;정귀옥;이종태;이채언;백낙환
    • Journal of Preventive Medicine and Public Health
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    • 제28권2호
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    • pp.526-541
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    • 1995
  • This study was conducted to estimate the validity of reverse transcriptase-polymerase chain reaction(RT-PCR) compared to enzyme immunoassay(EIA) for the detection of hepatitis C virus (HCV) infection. EIA for antibody to HCV(anti-HCV) and RT-PCR for HCV was executed on the subjects from Pusan and Kyungnam area with questionnaire survey to collect some relating factors of HCV infection. As the result from 617 cases, the prevalence of HCV infection was 1.5% by EIA and 3.7% by RT-PCR(p<0.05), and the age standardized rate was 1.7% and 3.4% by EIA and RT-PCR, respectively. The prevalence of hepatitis B surface antigen(HBsAg) was 6.8% by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) and the age standardized rate was 7.7%. It was the higher in male group comparing to female group(p<0.01). Both of the prevalence of HCV and HBsAg were higher in elevated asparate aminotransferase(AST) and alanine aminotransferase (ALT) group than in normal AST and ALT group(p<0.01). There was no specific risk factor of HCV infection. Though the degree of agreement of EIA and RT-PCR by gamma statistics was 97.2%, it showed a significant difference between the two methods(p<0.01). For the detection of HCV infection, positive predictive value of EIA was 66.7% and negative predictive value of EIA was 97.2%. This study suggests that negative result to anti-HCV by EIA didn't mean the free state of HCV infection, therefore it would be helpful that further monitoring for HCV infection by RT-PCR in the case of elevated AST and ALT and/or clinically suspected.

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위암에서 CK20과 CEA의 RT-PCR을 이용한 수술조작 전후 유출 정맥과 복막에서의 미세전이의 검출 (Use of RT-PCR for CK20 and CEA mRNA to Detect of Micrometastasis in the Draining Venous Blood and the Peritoneum in Gastric Cancer Patients)

  • 주재균;이지희;고양석;김정철;류성엽;김동의;김영진
    • Journal of Gastric Cancer
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    • 제3권3호
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    • pp.128-133
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    • 2003
  • Purpose: The benefits of the 'no-touch' isolation techniquethat is usually performed to prevent the circulation of tumor cells are not evident. The aim of this study was to determine whether the no-touch isolation technique for treating gastrointestinal cancers could prevent the circulation of tumor cells detected by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). Matrials and Methods: By using RT-PCR to amplify mRNAs for two specific epithelial markers, carcinoembryonic antigen (CEA) and cytokeratin 20 (CK-20), we examined 34 gastric cancer patients who had been histologically diagnosed and 22 patients had undergone serosal and peritoneal brushing. Results: In 10 ($29.4\%$) of the 34 gastric cancer patients, we detected CK20 mRNA before manipulation, and in 17 ($51.5\%$) of those patients, after we detected it. The density of the CK20 mRNA band was increased in 11 cases ($33.3\%$) and the density was decreased in 2 cases ($6.1\%$). In 16 ($48.5\%$) of the 34 gastric cancer patients, we detected CEA mRNA before manipulation, and in 17 ($51.5\%$) patients after we detected it. The density of the CEA mRNA band was increased in 8 cases ($24.2\%$) and decreased in 3 cases ($9.1\%$). Conclusion: These result suggest that the ' no-touch isolation technique ' might be useful when operating on advanced gastric cancer patients and that serosal or Douglas pouch brushing can be used to determine the status of micrometastasis.

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부산지역 급성 호흡기 증상으로 외래 방문한 환자의 바이러스 원인과 역학: 2007-2008년 (Viral Etiology and Epidemiology of Outpatients with Acute Respiratory Illnesses in Busan: 2007-2008)

  • 정진우;황윤하;조경순;정명주;민상기;김성준;정우식
    • Pediatric Infection and Vaccine
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    • 제17권2호
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    • pp.130-136
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    • 2010
  • 목적 : 부산에서 급성호흡기 증상으로 외래 방문한 환자를 대상으로 원인 바이러스 및 역학을 연구하고자 하였다. 방법 : 2007년 1월부터 2008년 12월까지 3개 병원 소아청소년과 외래에 급성 호흡기 증상을 주소로 내원한 990명을 대상으로, 비강 세척법으로 검체를 채취하여 역전사중합효소연쇄반응을 시행하였다. 결과 : 총 검체 990건 중 351건(35.5%)이 검출되었으며, 남녀 비는 1.6대 1이었고, 5세 이하가 93.7%였다. hRV가 가장 흔한 원인으로 연중 202건(57.5%), 그 다음으로는 RSV로 10월부터 3월까지 57건(16.2%), ADV는 연중 37건(10.5%), INF는 12월부터 4월까지 21건(6%), hBoV는 1월부터 8월까지 15건(4.3%), PIV는 4월부터 7월까지 9건(2.6%), hCoV는 1월부터 7월까지 7건(2%), EV는 6월부터 9월에 3건(0.9%) 검출되었다. 결론 : 본 연구는 부산의 소아급성호흡기 질환을 예방하고 치료하는데 도움이 되고자 하며, 앞으로도 원인 바이러스에 대한 지속적인 연구가 필요하다.