본 연구는 뜰보리수 열매의 식품영양학적 평가 및 기능성 물질 발굴의 일환으로 뜰보리수 열매를 이용하여 성숙과정 중의 free radical 소거능을 비롯한 SOD유사활성, 아질산염 소거작용, xanthine oxidase 저해활성 등의 항산화 활성을 조사하였다. 뜰보리수 에탄올 추출물의 전자공여능은 성숙함에 따라 감소하는 경향을 나타내었으며, 에탄올 추출물의 농도가 높을수록 전자공여능의 효과는 더욱 높게 나타났다. 에탄올 추출물의 SOD 유사활성은 성숙정도에 따른 증가하였고, 농도에 비례하였다. 뜰보리수 열매의 에탄을 추출물의 아질산염 소거능은 pH가 낮을수록 높았으며, 농도가 증가할수록 아질산염 소거 작용이 높게 나타났다. Xanthine oxidase 활성 저해능은 완숙과 과숙과실의 추출물에 비해서 미숙과실 추출물에서 높았다.
본 연구에서는 무순을 추출용매 및 발아시기에 따라 추출하여 아질산염 소거능, SOD 유사 활성, tyrosinase 저해 활성, xanthine oxidase 저해 활성 그리고 ACE 저해 활성을 측정하였다. 아질산염 소거능 측정에서는 pH 1.2의 Z2조건에서 각 추출물들이 81.44~89.71%로 가장 높은 소거능을 나타내었고 pH 1.2와 pH 4.0의 조건에서 발아 4일째와 8일째의 무순 추출물이 발아 12일째의 무순 추출물보다 높은 소거능 효과를 나타내었다. 또 추출용매에 따라 소거능의 차이는 보였으나 물로 추출한 추출물이 상대적으로 다른 용매 추출물에 비해 소거능 효과가 좋은 것으로 나타났다. pH 6.0 조건에서는 에탄올 추출물이 16.12%의 활성을 보여 발아 12일째 무순의 에탄올 추출물과 메탄올 추출물의 소거능 효과와 유사한 결과를 보였다. 무순 추출물의 SOD 유사 활성은 4.57~27.05%의 범위를 보였고 비교물질인 L-ascorbic acid의 활성이 52.15%로 무순 추출물의 활성보다 높은 것으로 나타냈다. 추출물 중에서는 발아 8일째의 아세톤 추출물과 메탄올 추출물의 활성이 높은 것으로 나타났고 발아 12일째의 무순 추출물의 SOD 유사 활성은 4.57~15.59%로 현저히 감소하는 것으로 나타났다. Tyrosinase 저해 활성은 발아 8일째와 12일째의 무순 추출물의 활성이 좋았으며, 추출용매는 메탄올 추출물이 62.65~84.89% 측정되어 가장 좋은 저해 활성을 보였다. Xanthine oxidase 저해 활성은 발아 4일째의 무순 추출물이 21.26~29.52%로 아세톤 추출물이 가장 높은 저해능을 나타내었고 발아초기에 비해 발아가 진행됨에 따라 저해능은 감소하는 경향을 나타내었다. 발아시기와 추출용매에 따른 ACE 저해능은 12.48~51.78%의 저해 활성을 보였으며, 발아 8일째의 에탄올 추출물이 51.78%로 각 추출물 중 가장 높은 저해 활성을 보였다. 이와 같은 생리활성 결과를 기초로 하여 천연 기능성 식품의 소재 발굴 및 식품 개발에 있어 연구 활용의 가능성이 있을 것으로 기대되며 일반적으로 섭취하여 큰 효능을 기대하기 어려운 무순을 유효성분만을 추출하여 소재화 하는 것이 더 효율적이라고 판단된다. 또한 현행 건강기능식품법에 따르면 물, 주정, 핵산 등의 추출용매를 사용하여 유효성분을 추출하는 것을 허용하고 있으므로 용매의 종류 및 추출방법에 대한 추가적인 연구를 통해 큰 기대 효과를 줄 수 있을 것이라 생각된다.
한방생약자원으로 사용되는 가죽나무(A. altissima)의 생리학적 활성을 조사하고자 뿌리와 줄기, 잎을 에탄올을 용매로 추출하여 농도에 따라 전자공여능, SOD유사활성, 아질산염 소거능을 측정하였으며, xanthine oxidase와 tyrosinase 저해 활성을 측정하였다. 전자공여능은 $1,000{\mu}g/mL$의 농도에서 뿌리와 줄기 추출물이 64.04%와 63.27%이었으며, 잎 추출물은 17.47%를 나타내었다. SOD 유사활성능은 $7.66%{\sim}50.00%$로 잎 추출물이 뿌리와 줄기에 비해 약 5배 이상 높았고, 아질산염 소거능에 있어서도 가죽나무 잎 추출물이 $1,000{\mu}g/mL$의 농도에서 pH 1.2와 3.0에서 98%이상의 높은 소거효과를 나타내었으며 $500{\mu}g/mL$의 농도에서도 90% 이상의 소거효과를 나타내었다. Xanthine oxidase저해 활성은 $1,000{\mu}g/mL$ 농도에서 뿌리와 줄기, 잎 추출물 모두에서 90% 이상의 저해율을 보였고, tyrosinase저해는 $2,000{\mu}g/mL$의 농도에서 뿌리 추출물이 62.01%로 가장 높은 저해효과를 나타내었으며, $100{\mu}g/mL$의 농도에서도 57.70%의 저해 활성을 나타내었다. 그러므로 가죽나무는 한방생약자원으로 이용되는 뿌리(저근백피) 이외에도 잎은 높은 SOD 유사활성능과 아질산염 소거능을 나타내며 줄기에서도 뿌리보다 높은 전자공여능과 아질산염 소거능 및 유사한 xanthine oxidase 저해 활성을 나타내므로 유용한 한방생약자원인 것으로 판단된다.
본 연구에서는 마른진흙버섯 자실체를 메탄올과 열수를 이용해 추출한 물질의 anti-xanthine oxidase, anti-cholinesterase 및 염증 저해 효과에 대한 연구를 수행하였다. 마른진흙버섯 자실체의 메탄올 추출물과 열수 추출물의 xanthine oxidase에 대한 저해효과는 양성대조군으로 사용한 allopurinol과 대등하게 높은 효과를 나타냈다. Acetylcholinesterase에 대한 메탄올 추출물의 1.0~2.0 mg/mL 농도에서의 저해활성은 양성대조군인 galanthamine과 유사하게 높았지만 butyrylcholinesterase에 대한 메탄올과 열수 추출물의 저해활성은 양성대조군에 비해 실험에 사용한 모든 농도범위에서 유의하게 낮았다. PC-12 세포에 glutamate의 처리에 의해 유도된 독성은 40 mg/mL와 100 mg/mL 농도의 메탄올 추출물과 100 mg/mL 농도의 열수추출물의 처리에 의해 크게 완화되어 PC-12 세포의 생존율이 유의하게 증가하는 것이 관찰되었다. 마른진흙버섯의 메탄올과 열수 추출물의 염증 저해 실험에서 RAW 264.7 대식세포에 메탄올 추출물을 2.0 mg/mL 농도로 처리하고 염증을 매개하는 LPS를 추가로 투여한 후 RAW 264.7 세포에 생성되는 NO를 측정한 결과, 양성대조군에 비해 3.37배 높은 저해효과를 나타냈고, 처리한 자실체 메탄올 추출물의 농도가 증가함에 따라 생성된 NO의 양이 현저하게 감소하는 경향을 나타내었다. 또한 기염제인 carrageenan에 의해 흰쥐 뒷발에 유도된 부종 저해 실험에서는 투여한 버섯 추출물의 농도가 증가함에 따라 흰쥐의 뒷발에 유도된 부종의 용적이 농도 의존적으로 감소하는 경향을 나타냈다. 따라서 마른진흙버섯 자실체에 함유된 물질은 acetylcholinesterase과 butyrylcholinesterase 등의 cholinesterase에 대한 저해작용과 glutamate에 의해 유도된 PC-12세포의 독성을 완화하고 또한 염증을 저해하는 효과를 나타내 기억력이 감퇴되는 초기 알츠하이머병과 염증을 완화하는 천연소염제로의 이용이 가능할 것으로 사료된다.
국내 야생화들로부터 효모를 분리하여 이들을 고부가가치의 의약이나 건강 식품산업에 응용하기 위한 연구의 일환으로 경기도와 제주도 일부 지역의 야생화들을 채집하여 효모들을 분리, 동정하고 이들 가운데 항통풍성 xanthine oxidase 저해물질 생산 균주를 선발한 후 생산 조건을 검토하였다. 서울 구로동과 일부 경기도 지역 야생화 31점에서 26종, 54균주의 효모들을 분리, 동정하였고 이들 중 Pseudozyma sp.가 13종으로 가장 많이 분리되었다. 제주도 송악산과 성산 일출봉 지역의 야생화 21점에서 모두 14종, 32균주의 효모들을 분리, 동정하였고, 이들 균 중에서 Sporobolomyces ruberrimus가 6종으로 가장 많이 분리되었다. 86효모 균주들을 YEPD 배지에서 2일간 배양하여 각각의 배양 상등액과 무세포 추출물을 제조한 후 이들의 항통풍성 Xanthine oxidase 저해활성을 측정한 결과, Pseudozyma hubeiensis 228-S-1의 무세포 추출물이 19.5%의 가장 높은 Xanthine oxidase 저해활성을 보였다. 또한 Pseudozyma hubeiensis 228-S-1을 YEPD 배지에 접종하여 $30^{\circ}C$에서 36시간 배양하였을 때, 세포내 항통풍성 xanthine oxidase 저해물질을 가장 많이 생산하였다.
The present study was aimed at investigating the hypouricemic and xanthine oxidase inhibitory activities of the various fractions of the hydromethanolic extract of the leaves of Coccinia grandis L. Voigt (Cucurbitaceae). The leaves of this species was used in traditional medicinal system for the treatment of gout, rheumatism, jaundice, bronchitis, fever, skin eruptions, wounds, etc. The degree of xanthine oxidase inhibition was determined in vitro by measuring the increase in absorbance at 295 nm associated with uric acid formation. Among the fractions tested, the chloroform fraction exhibited highest potency ($IC_{50}$$17.8\;{\mu}g/ml$). This was followed by the pet-ether ($IC_{50}$$29.7\;{\mu}g/ml$), ethyl acetate ($IC_{50}$$41.2\;{\mu}g/ml$) and residual ($IC_{50}$$47\;{\mu}g/ml$) fractions. The $IC_{50}$ value of allopurinol was $6.1\;{\mu}g/ml$. In addition, the hypouricemic and hepatic xanthine oxidase (XO)/xanthine dehydrogenase (XDH) inhibitory activities of the fractions were examined in vivo using oxonate (280 mg/kg, i.p.) induced hyperuricemic mice. At a dose of 200 mg/kg orally for 7 days, the pet-ether, chloroform and ethyl acetate fractions produced a significant (P < 0.01) reduction in serum urate level and also inhibited hepatic XO/XDH activities when compared to hyperuricemic mice. These inhibitory effects were weaker than that observed for the standard drug, allopurinol (10 mg/kg, p.o.). Lineweaver-Burk analysis of the enzyme kinetics indicated that the mode of inhibition was of a mixed type. These results suggest that the use of Coccinia grandis leaves for the treatment of gout could be attributed to its XO inhibitory activity.
덕유산 무주 리조트 일대에서 수집한 야생화 27점에서 효모 8종 22균주를 분리 동정하였다. 이들 균주 중에서 Cryptococcus magnus 9균주, Cryptococcus flavescens 6균주와 Cryptococcus sp. 2균주 등 Cryptococcus속 균들이 가장 많이 분리되었다. 이들 22균주들을 YPD 배지에서 24시간 배양하여 각각의 배양 상등액과 무세포 추출물을 제조한 후 이들의 항산화 활성과 항통풍성 xanthine oxidase 저해활성 등의 생리기능성들을 측정한 결과, Sporobolomyces phaffii JS00583과 Rhodotorula graminis JS00581의 배양 상등액이 각각 40.4%와 39.1%의 항통풍성 xanthine oxidase 저해활성을 보였다. 또한 Cryptococcus magnus JS00570의 상등액 역시 36.1%의 미백성 tyrosinase 저해활성을 보였다.
10년 이상 자연 발효된 콩 발효 식품에서 희귀 이소플라본 성분인 7, 8, 4'-trihydroxyisoflavone을 분리하였고, 분리된 성분의 항산화 효과를 비효소적인 방법으로는 DPPH 법을, 효소적인 방법으로는 xanthine oxidase법을 이용하여 확인하였다. 그 결과 7, 8, 4'-trihydroxyisoflavone는 농도 의존적으로 비타민 C와 유사한 DPPH 라디칼 소거 효능을 가지고 있음을 보여주었고 $6.6{\pm}0.4\;{\mu}M$ 농도에서 xanthine oxidase에서 생성된 superoxide 라디칼을 50 % 수준까지 낮춤을 보여주었다. 또한, 이 희귀 이소플라본 성분은 UVB로 유도된 MMP-1의 생성을 초기 수준으로 억제하는 것으로 나타나 피부 노화 억제에 유용한 성분임을 확인할 수 있었다.
To evaluate the effect of Baepungtang(BPT) water extract on cultured mouse spinal sensory neuron which was inhibited by xanthine oxidase(XO) and hypoxanthine(HX)-induced oxigen radicals, MTT assay, NR assay, Neurofilament enzymeimmuno assay and LDH activity assay were carried out after the cultured mouse spinal sensory neuron were preincubated with various concentrations of BPT water extract for 3 hours prior to exposure of XO/HX. The results obtained were as follows: 1. XO/HX, a oxigen radical, decreased the survival rate of the cultured mouse spinal sensory neuron cell on NR assay and MTT assay. 2. $MTT_{50}$ value and $NR_{50}$ value of XO/HX were 30 mU/ml XO/O.2 mM HX. 3. BPT water extract have efficacy of increasing neurofilament. 4. BPT water extract have efficacy of increasing LDH activity. From above the results, It is concluded that BPT has marked efficacy as a treatment for the damages caused in the XO/HX-mediated oxidative process.
To investigate an effect of cyclohexanone (CHO) treatment on the serum levels of xanthine oxidase (XO) in liver damaged animals, the rats were intraperitoneally pretreated with 50% carbon tetrachloride ($CCl_4$) in olive oil (0.1 mL/ 100 g body weight) 14 times every other day. To the $CCl_4$-pretreated rats, CHO (1.56 g/kg body weight) was injected once and then the animals were sacrificed at 4 hours after CHO treatment. The increasing rate of serum and liver XO activities to the control was higher in CHO-treated animals pretreated with $CCl_4$ than the $CCl_4$-pretreated those. Concomitantly CHO injection to the $CCl_4$-pretreated animals showed somewhat higher Vmax and lower Km value in the kinetics of liver XO enzyme. Furthermore, increasing rate of hepatic malonedialdehyde content to the control was also higher in CHO-treated animals pretreated with $CCl_4$ than $CCl_4$-pretreated those. On the other hand, the injection of CHO to the $CCl_4$-pretreated animals showed the more enhanced liver damage on the basis of liver function finding; liver weight per body weight (%), serum levels of alanine aminotransferase activity and hepatic glucose-6-phosphatase activity. In conclusion, injection of CHO to the $CCl_4$-pretreated rats led to more increased activity of serum XO and it may be caused by acceleration of hepatocyte membrane permeability and induction of enzyme protein.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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