Van, Kyujung;Lestari, Puji;Park, Yong-Jin;Gwag, Jae-Gyun;Kim, Moon-Young;Kim, Dong-Hyun;Heu, Sung-Gi;Lee, Suk-Ha
Journal of Crop Science and Biotechnology
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v.10
no.3
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pp.147-158
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2007
Xanthomonas axonopodis pv. glycines(Xag) is a pathogen that causes bacterial leaf pustule(BLP) disease in soybeans grown in Korea and the southern United States. Typical and early symptoms of the disease are small, yellow to brown lesions with raised pustules that develop into large necrotic lesions leading to a substantial loss in yield due to premature defoliation. After Xag infects PI 96188, only pustules without chlorotic haloes were observed, indicating the different response to Xag. To identify differentially expressed genes prior to and 24 hr after Xag inoculation to PI 96188 and BLP-resistant SS2-2, an oligonucleotide macroarray was constructed with 100 genes related to disease resistance and metabolism from soybean and Arabidopsis. After cDNAs from each genotype were applied on the oligonucleotide macroarrays with three replicates and dye swapping, 36 and 81 genes were expressed as significantly different between 0 hr and 24 hr in PI 96188 and SS2-2, respectively. Six UniGenes, such as the leucine-rich repeat protein precursor or 14-3-3-like protein, were selected because they down-regulated in PI 96188 and up-regulated in SS2-2 after Xag infection, simultaneously. Using tubulin and cDNA of Jangyeobkong(BLP-susceptible) as controls, the oligonucleotide macroarray data concurred with quantitative real-time RT-PCR(QRT RT-PCR) results in most cases, supporting the accuracy of the oligonucleotide macroarray experiments. Also, QRT RT-PCR data suggested six candidate genes that might be involved in a necrotic response to Xag in PI 96188.
Xanthomonas campestris pv. glycines causes bacterial pustule disease on susceptible soybean leaves and produces a bacteriocin, named glycinecinA, against most xanthomonads including Xanthomonas campestris pv. vesicatoria. One of the 5 isolated DNA regions responsible for bacteriocin production, a 1.7 kb DNA region for the glycinecinA gene, was used as a probe to detect the presence of the homolog DNA in other bacterial strains. Among 55 bacterial strains tested, only X. campestris pv. glycines showed the positive signal with glycinecinA DNA. Two oligomers, heu2 and heu4, derived from a glycinecinA DNA were used to carry out the polymerase chain reaction (PCR) analysis with chromosomal DNA from 55 different bacterial strains including 24 different strains of X. campestris pv. glycines, 9 different pathovars of xanthomonads, and other 22 bacterial strains of different genus and species. By separation of the PCR products on agarose gel, a 0.86 kb DNA fragment was specifically detected when X. campestris pv. glycines was present in the amplification assay. The 0.86 kb fragment was not amplified when DNA from other bacteria was used for the assay. Southern analysis with glycinecinA DNA showed that the PCR signal was obtained with X. campestris pv. glycines isolates from various geographic regions and soybean cultivars. Therefore, the 1.7 kb DNA region for the glycinecinA gene can be used for the pathovar-specific probe for the DNA hybridization and the primers heu2 and heu4 can be used for the pathovar-specific primers for the PCR analysis to detect X. campestris pv. glycines.
Seo, MinJung;Kang, Sung-Taeg;Moon, Jung-Kyung;Lee, Seukki;Kim, Yul-Ho;Jeong, Kwang-Ho;Yun, Hong-Tae
Korean Journal of Breeding Science
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v.41
no.4
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pp.456-462
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2009
Bacterial pustule (BP), caused by Xanthomonas axonopodis pv. glycines, is prevalent disease in major soybean production areas. BP can reduce seed yield as well as seed quality. To identify the genomic region associated with the resistance to BP, QTL analysis was conducted using $F_{10}$ RIL (recombinant inbred lines) population, Keunolkong${\times}$Shinpaldalkong. Four QTLs for BP disease were identified on the linkage group B2, D2, I and K in field accounts for 36.4% of the phenotypic variation. Especially, QTL at near of Satt135 on LG D2 was identified in green house experiment explaining 20.9% of the phenotypic variation was found to be a major QTL conferring BP. One of these QTLs, Satt135 on the LG D2, was also identified in green house experiment. In both field and green house condition, the position of major QTL for BP was detected between Satt135 and Satt397 on the LG D2. The major QTL for BP may be used for minimizing soybean BP through effective marker-assisted selection (MAS).
Bacterial diseases in soybean are bacterial pustule by Xanthomonas axonopodis pv. glycines, wildfire by Pseudomonas syringae pv. tabaci, bacterial blight by Pseudomonas savastanoi pv. glycines and bacterial brown spot by Pseudomonas syringae pv. syringae in Korea. It is difficult to identify each disease by early symptoms in fields, because the initial symptoms of these diseases are very similar to each other. In this study, we developed multiplex PCR detection method for rapid and accurate diagnosis of bacterial diseases. The glycinecin A of X. axonopodis pv. glycines, the tabtoxin of P. syringae pv. tabaci, the coronatine of P. savastanoi pv. glycines and the syringopeptin of P. syringae pv. syringae have been reported previously. These bacteriocin or phytotoxin producing genes were targeted to design the specific diagnostic primers. The primer pairs for diagnosis of each bacterial diseases were selected without nonspecific reactions. The studies on simultaneous diagnosis method were also conducted with primarily selected 21 primers. As a result, we selected PCR primer sets for multiplex PCR. Sizes of the amplified PCR products using the multiplex PCR primer set consist of 280, 355, 563 and 815 bp, respectively. This multiplex PCR method provides a efficient, sensitive and rapid tool for the diagnosis of the bacterial diseases in soybean.
Yang, Kiwoung;Lee, Yeong Hoon;Ko, Jong Min;Jeon, Myeong Gi;Lee, Byong Won;Kim, Hyun Tae;Yun, Hong Tae;Jung, Chan Sik;Baek, In Youl
Korean Journal of Breeding Science
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v.43
no.4
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pp.282-287
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2011
Bacterial pustule (BP) is a leaf disease of soybean that is most common in Korea. Inoculation of 8ra, pathogen strain, to resistant and susceptible cultivars for finding the BP resistance gene (rxp) was much tried but the sequence of the exact gene is not found. This research performed in order to confirm the rxp gene near molecular marker by using the resistant and susceptible cultivars. Soybean BP resistance gene which related to region of near molecular marker could select the resistant cultivar. For the near molecular marker of rxp, reference genomics data available at sequenced Phytozome was used for designing molecular markers. The rxp was mapped between Satt372 and Satt486 on chromosome 17. According to previous study, rxp released in find mapping 7.2 Mbp to 7.3 Mbp on chromosome 17. In this study, we developed 3 random markers near from 6.6 Mbp to 7.3 Mbp on chromosome 17 identified to increase the genetic resolution of the rxp gene region using resistant and susceptible cultivars. Particularly, Rxp17-700 marker was mostly coincided resistance and susceptible genotype to rxp. This result suggests that Rxp17-700 marker will be more tightly linked to rxp gene.
Bacterial diseases of soybean has been recognized as a limiting factor of soybean production in Korea as it was estimated to cause around 10 percent of yield losses annually. The purpose of the study is to obtain information on the diseases through proving the kinds of pathogens and epidemiology, The wire brush method and multineedle appeared to be the best way of inoculation under all circumstances. Wire brush method, especially, was effective in shortening the incubation period and manifesting the lesion development by introducing more inoculum per unit of area. In case of spray inoculation it was necessary to apply a small amount(1 : 1,000) of wetting agent, twin-20, otherwise it was unabled to produce the diseases under field conditions. Two kinds of bacterial diseases caused by Pseudomonas glycinea and Xanthomonas phaseoli var. sljense were found from surveyed areas in Kore. Wild fire disease on soybean caused by Pseudomonas tabaci had not detectable during the experiment although there were several reports on the disease from other countries. when the pathogens were introduced into sterile soil, bacterial leaf blight pathogen could exsisted until 30 days while bacterial pustule pathogen survived only 4 days under the natural conditions of later June. Both bacteria, however, could produce the disease after more than 10 months period of storage in refrigerator when they were exsisted in infected plant tissues. In warehouse, non-temperature controlled, the bacteria lose their infectability within 6 months period from October to April even though they exsisted in infected tissues. Surface infested seeds with the pathogens could not produced the diseases on seedling stages of soybean plants when the seeds were planted in sterile soil after inoculation by dipping the seeds into bacterial suspensions, although germination was depressed by the pathogens when the seeds were planted on agar media.
In recent years, the occurrence of bacterial diseases of soybean has been increasing due to the continuous rise in spring temperature and the humid weather as a result of rain concentrated at the middle and late stages of crop growth. The resulting severe economic damage is also a concern. Unfortunately, there are no precise data on the occurrence and damage to lay the foundation for bacterial disease control in soybean in the Chungbuk Province. Therefore, the present study investigated the occurrence of major bacterial diseases, namely bacterial pustules, bacterial blight, and wildfire, in different soybean varieties in 410 fields in the Chungbuk Province in 2017. The incidence rate of bacterial pustules in the affected fields was 76.6%, and the incidence rate of infected plants was 29.3%. The incidence rate of bacterial blight in the affected fields was 13.9%, and the incidence rate of infected plants was 4.6%. The incidence rate of wildfire in the affected fields was 23.2%, and the incidence rate of infected plants was 10.1%. The overall incidence rate of bacterial diseases in the soybean fields where the diseases originated was 37.9% for bacterial pustules, 21.0% for bacterial blight, and 25.0% for wildfire, indicating that the disease incidence rate in fields where the disease originated was generally high. Among different varieties, the incidence rate of bacterial pustules was the highest in sprout soybean (88.9%), followed by Seoritae (84.0%) and Daewon (81.2%). The incidence rate of bacterial blight was the highest in the Daewon (19.6%), followed by Seoritae (15.2%) and sprout soybean (12.5%). The incidence rate of wildfire was the highest in sprout soybean (25.0%), followed by Daewon (24.7%) and Seoritae (5.4%). Meanwhile, in Uram, the incidence rate of bacterial pustules (7.1%) was the lowest, and this variety was not affected by bacterial blight or wildfire.
Xanthomonas campestris pv. glycines 8ra causes bacterial pustule disease on susceptible soybean leaves and produces a bacteriocin, named glycinecin, against related bacteria such as Xanthomonas campestris pv. vesicatoria. The antimicrobial activity of the glycinecin was effective to most tested Xanthomonas species. X. c. pv. glycines 8ra was able to produce the glycinecin in liquid media as well as solid media. Maximal productivity of glycinecin was obtained at 3$0^{\circ}C$ in the early stationary phase of growth of the X. c. pv. glycines 8ra. The production of glycinecin was not dependent on the initial inoculum level but on cell density. Glycinecin was very sensitive to proteolytic enzymes such as trypsin and proteinase K but resistant to DNase and RNase. The culture supernatant of X. c. pv. glycines 8ra retained some of its antimicrobial activity after 15 min at 6$0^{\circ}C$. It is stable at wide range of pH. The glycinecin showed the bactericidal activity after the adsorption of the glycinecin to the sensitive bacterial cell.
Park, Hyoung-Joon;Han, Sang-Wook;Oh, Chang-Sik;Lee, Seung-Don;Ra, Dong-Soo;Lee, Suk-Ha;Heu, Sung-Gi
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.18
no.9
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pp.1500-1509
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2008
The hybridization patterns with the avrBs3 gene that is known to determine the recognition of host specificity were used to study the diversity of Xanthomonas axonopodis pv. glycines causing bacterial leaf pustule in soybean. A total of 155 strains were isolated from diverse tissues of soybean cultivars collected in Korea and were classified into six different type strains of OcsF, SL1017, SL1018, SL1045, SL1157, and SL2098 according to the patterns of avrBs3-homologous bands. When these type strains were inoculated on various cultivars, most of the Korean strains mildly induced disease symptoms on the resistant CNS1 cultivars. Unlike other type strains, strain SL2098, which appeared not to contain any avrBs3 homolog, induced only a few pustules on even highly susceptible cultivars. When a plasmid carrying the 3.7-kb avrBs3-homologous gene from strain SL1045 was introduced into SL2098, the transformant could not recover the pathogenicity in susceptible host plants. However, when avrBs3-homologous genes of strain SL1018 were mutated by transposon mutagenesis, one of the mutants in which a 5.2-kb chromosomal band homologous to avrBs3 was disrupted could not induce the hypersensitive response on resistant cultivars such as William82 or CNS2. Our results suggest that the avrBs3 homologs may play important roles in the pathogenicity of Xanthomonas axonopodis pv. glycines and the recognition of soybean cultivars.
Xanthomonas axonopodis pv. glycines is the causal agent of bacterial pustule of soybean(Glycine max. (L.) Merr), which is one of the most prevalent bacterial diseases in Korea. In this study, Polymerase Chain Reaction (PCR) assay was applied to detect Xanthomonas axonopodis pv. glycines and to survey on seed contamination in 36 soybean cultivars of Korea. And we have to compare PCR assay with dilution-plating assay of detection and identification. We confirmed detection of pathogen from artificial infected seeds and natural Infected seeds using PCR assay. This assay gave results similar to a seed-wash dilution plating assay and proved more effective than classical methods. Results of survey on seed contamination by X. axonopodis pv. glycines from 36 cultivar seeds showed that the pathogen was detected from Pungsan-namulkong, Mallikong, Taekwangkong, Daemangkong, Ajukkarikong using PCR assay. Therefore, The PCR assay provides a sensitive, rapid tool for the specific detection of X. axonopodis pv. glycines in soybean seeds.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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