In view of free from bluetongue (BT) in the domestic cattle population in Korea, the key of quarantine testing for BT virus (BTV) infection is detection of cattle previously exposed to the virus. The objective of this study was to estimate the probability of detecting a cattle infected with BTV using a stochastic modeling analysis of existing quarantine testing data. Three testing scenarios were considered in this study: serological testing of all animals in all imported lots (scenario 1), serological testing of a sample of cattle from all imported lots (scenario 2), and serological testing of 50% of imported lots (scenario 3). In scenario 2 and 3, it was assumed that cattle were sampled (sample size) within each lot to detect 5% of the cattle in each lot with a 95% confidence, taking into account diagnostic sensitivity of the ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay). The model output was the total number of BTV-infected cattle and the prevalence of BTV infection in imported cattle from the US, Australia, Canada and Japan. Compared to the scenario 1, the probability of detecting a BTV-infected cattle was estimated to be 19% and 1.6% in scenario 2 and 3, respectively. Furthermore, the analyses showed a 95% confidence that BTV prevalence was less or equal to $9.7{\times}10^{-4}$ (median = $1.5{\times}10^{-5}$), indicating that, for the scenario 2 and 3 with serological testing for a sample of cattle, the risk of introducing an exotic strain of BTV into Korea through the importation of live cattle would not be acceptable.
Hidayat, Sri Hendrastuti;Haryadi, Dedek;Nurhayati, Endang
The Plant Pathology Journal
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제25권4호
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pp.328-332
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2009
Diseases caused by Pepper yellow leaf curl virus infection is considered to be emerging plant diseases in Indonesia in the last five years. One key factor for disease management is the availability of accurate detection of the virus in plants. Polyclonal antibody for Pepper yellow leaf curl Indonesia virus-Bogor (PYLCIV-Bgr) was produced for detection of the virus using I-ELISA and DIBA methods. The antibody was able to detect PYLCIV-Bgr from infected plants up to dilution 1/16,384 and cross reaction was not observed with Cucumber mosaic virus (CMV), Tobacco mosaic virus (TMV), and Chilli veinal mottle virus (ChiVMV). Positive reaction was readily detected in membrane containing Begomovirus samples from Yogyakarta (Kaliurang and Kulonprogo) and West Java (Bogor and Segunung). Infection of PYLCIV-Bgr in chillipepper, tomato, and Ageratum conyzoides was also confirmed using polyclonal antibody for PYLCIV-Bgr in DIBA. Polyclonal antibody for PYLCIV-Bgr is suggested to be included in disease management approach due to its good detection level.
The tissue blot immunobinding assay (TBIA) is widely used for the detection and localization of plant viruses in various plant tissues. The basic experimental procedures of TBIA sampling and blotting were simplified using commercially available micropipette tips. This method was termed the ring-blot immunobinding assay (R-BIA), as the blot on the membrane forms a ring shape. The detection efficacy of R-BIA was tested for two chili pepper viruses, pepper mild mottle tobamovirus (PMMoV) and pepper mottle potyvirus (PepMoV), following the optimized serological procedures of TBIA (length of the incubation period and BSA concentration, and primary and secondary antibodies). Sensitivity of the R-BIA was about 1 ng/ml of purified PMMoV in pepper leaf sap from a healthy pepper plant. R-BIA also showed high specificity in the detection of PMMoV and PepMoV. Moreover, the modified sampling and blotting procedures were simpler and more reliable than other TBIA methods (such as whole-leaf blotting and crushed-leaf blotting), suggesting that the R-BIA may be used for medium- to large-scale detection of plant viruses in laboratories with minimal facilities.
Tobacco mosaic virus (TMV) was detected from Kimchi by biological and serological assay 5. Kimchi samples three month after cooked were collected, and were inoculated on N. tabacum var. Burley 21 and NC 95. Out of 33 samples, 6 showed typical symptoms induced by TMV, local necrotic lesions on Burley 21 and mosaic on NC 95. All saps from tobacco leaves showed the mosaic symptom reacted positively against TMV antiserum by agar gel double diffusion test. Based on the results, the Kimchi is considered as one of the important inoculum sources in Korea.
The early and accurate detection of plant viruses is an essential component to control those. Because the globalization of trade by free trade agreement (FTA) and the rapid climate change promote the country-to-country transfer of viruses and their hosts and vectors, diagnosis of viral diseases is getting more important. Because symptoms of viral diseases are not distinct with great variety and are confused with those of abiotic stresses, symptomatic diagnosis may not be appropriate. From the last three decades, enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs), developed based on serological principle, have been widely used. However, ELISAs to detect plant viruses decrease due to some limitations such as availability of antibody for target virus, cost to produce antibody, requirement of large volume of sample, and time to complete ELISAs. Many advanced techniques allow overcoming demerits of ELISAs. Since the polymerase chain reaction (PCR) developed as a technique to amplify target DNA, PCR evolved to many variants with greater sensitivity than ELISAs. Many systems of plant virus detection are reviewed here, which includes immunological-based detection system, PCR techniques, and hybridization-based methods such as microarray. Some of techniques have been used in practical, while some are still under developing to get the level of confidence for actual use.
The studies were performed for the PRRS antigen and antibody detection from breeding farms, artificial insemination(AI) center and growing farms in Jeonbuk province. 1. Specific PRRS primers were successfully amplified ORF6 617bp and ORF7 448 bp on agarose gel. 2. RT-PCR method has been establish by commercial kit and the thermal cycler program consisted of 30 cycles: $95^{\circ}C$ for 30 sec, $45^{\circ}C$ for 30 sec, and $72^{\circ}C$ for 45 sec. 3. The results of PRRS antibody test by ELISA method in AI centers were $6.6\%,\;53.3\%$ and breeding farms $65\%,\;65\%\;and\;38.7\%$, respectively. The serological positive of the antibody in gilt higher than sow. 4. The sero-positive of the PRRS antibody showed average $21\%$ in domestic farms, $56.2\%$ in breeding farms, and $29.9\%$ in AI center.
Two infectious species of Streptococcosis pathogens were detected by multiplex PCR assay. Detection rates of Streptococcus iniae and S. parauberis could reach 44.9% and 55.1% respectively for one year during 2004 to 2005 in Jeju island. These findings showed that S. parauberis strains were important pathogen with streptococcosis of olive flounder in Jeju island. These findings showed that S. parauberis strains were important pathogen with streptococcosis of olive flounder in Jeiu island. In the present study we have investigated the interspecific relationship of all Jeju area of S. parauberis by RAPD analysis. Represent strains divided to four groups by RAPD fingerprints. The important differences observed between the olive flounder isolates suggest that they could constitute a well-differentiated group or a separate clonal line within this bacterial species. Though, serological research of S. parauberis strains in Jeju island not exist yet. These strains doing the serological evolution.
Antibodies were raised against fusion proteins of the N-terminus and a region containing the GDNQ (Gly-Asp-Asn-Gln) polymerase motif of the L (polymerase) protein of sonchus yellow net virus (SYNV). Immunoblot analyses using these antibodies revealed the presence of the L protein in purified SYNV preparations and in nuclear extracts from infected tobacco. The serological analyses and detection in a polyacrylamide gels suggested that the L protein is present in at least a 20 fold lower abundance than the G, N, M1 and M2 proteins, and has size corresponding to a molecular weight of over 200 kDa as predicted from nucleotide sequence data. Electron microscopy with gold-labelled antibodies was used to localize the N, M2, and G proteins of SYNV in thin sections of infected tissue. When sections of SYNV-infected tissue were treated with antisera against total SYNV proteins and N protein, gold label could be detected in both the viroplasms and in virus particles. With the anti-M2 protein antiserum, the gold label was strongly localized in the viroplasms but only limited labelling of the virus particle sonly. Limited labelling of the L protein was observed in the viroplasms and the virus particles, presumably because of the low abundance of L protein in the tissues.
Fowl adenovirus (FAdV) and chicken anemia virus (CAV) have gained much importance as an immunosuppressive and economically important emerging pathogen of poultry. This study was carried out to investigate the prevalence of FAdV and CAV infection in chickens. The groups were divided into Korean native chickens, broiler, layer hens and broiler breeder and set up groups according to age. As results, 12.5% of the native chicken, 2.5% of broiler and 6.7% of layer chicken were positive, respectively by PCR for FAdV. Serological test showed that 84.8%, 79.0%, 97.7% and 96.1% of chickens were positive for antibody to FAdV in native chickens, broiler, layer hens and broiler breeder. The prevalence of CAV infection were 20.0%, 7.5%, 16.7% and 10.0%, based on CAV gene detection by PCR. In serological test of CAV, 40.6%, 35.9%, 84.8% and 73.9% of chickens were positive in that groups.
Borna disease(BD) virus 특이항체검출에 대한 세 가지 혈청진단법(간접형광항체법, 세포효소면역반응법, 혈청중화시험)의 정확도를 비교하기 위해 BD virus를 실험적으로 감염시킨 273수의 토끼의 혈청으로 시험하였다. 혈청중 간접형광항체법에 의하여 판정된 123혈청들은 모두 세포효소면역반응법에 의해서 양성으로 판정되었으나 혈청중화시험법에 의해서는 단지 27혈청에서만 양성으로 판정되었다. 혈청중화시험법은 간접형광항체법과 세포효소면역반응법에 비하여 민감도가 훨씬 낮게 나타나 BD virus의 혈청학적 연구에는 간접형광항체법 및 세포효소면역반응법의 활용도가 높을 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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