In order to investigate the possibility of in vitro mass propagation via somatic embryogenesis from Sicyos angulatus L., effects of plant growth regulators and carbon sources on callus induction and somatic embryogenesis were evaluated. Optimal combinations of plant growth regulator for callus induction from cotyledon and inflorescence explants were 2,4-D 2.0 mg/L + BA 0.1 mg/L and 2,4-D 1.0 mg/L + BA 0.1 mg/L in MS basal medium supplemented with sucrose 30 g/L,, respectively. Somatic embryogenesis was observed from cultured inflorescence explants, but it could not be achieved from leaf or cotyledon explants. The most effective plant growth regulators for somatic embryogenesis from callus was NAA 1.0 mg/L + kinetin 10 mg/L in the half strength of MS basal medium supplemented with 20 g/L sucrose.
An efficient regeneration protocol for stem disc culture of Populus euramericana, which is important species for bioenergy resource in agroforestry, was established. The number of explants that were obtained and the number of explants that regenerated varied with the genotypes. However, in all the genotypes, stem disc culture produced more regenerated shoots than did in axillary bud culture. A comparison of the effects of cytokinin type and concentration on shoot regeneration in different explants (i.e., petiole, leaf, and root segments of P. euramericana) revealed that a concentration of $0.002mg\;l^{-1}$ thidiazuron (TDZ) used on petiole segments resulted in the greatest shoot regeneration (95.83%). The hormonal requirements for the greatest shoot regeneration in the three explant types varied. Different concentrations of $AgNO_3$ and $CoCl_2$ were added separately to the medium to stop the yellowing and subsequent necrosis of the regenerated shoots. Lower concentrations (3 and $5mg\;l^{-1}$) of these compounds improved shoot regeneration and elongation, compared with the control. The in vitro-regenerated shoots were transferred to rooting medium and subsequently acclimatized. The highly efficient regeneration system of P. euramericana reported here can be used for mass propagation of this recalcitrant for regeneration, economically important tree species.
Leaf and petiole explants of kiwifruit were cultured on MT basal medium supplimented with 2,4-D, kinetin, NAA, and BA. Higher organogenic callus formation was observed on the media with NAA + BA than on the media added with 2,4-D + kinetin. Adventitious buds were formed only on media with NAA and BA. Leaf was better explant than petiole. When callus and adventitious buds were subcultured, shoot formation responsed best on medium with 0.1 mg/L NAA + 2.0 mg/L zeatin. When shoots were cultured on medium with 0.5 mg/L IAA + 0.1 mg/L BA after soaking for 1 hr at IBA solution, rooting was more effective than non-IBA treatment. Rooted shoots developed into normal plants.
To establish the optimum conditions of in vitro plant regeneration, the leaf, rhizome, and root explants of Belamcanda chinensis were cultured on the MS medium supplemented with different concentration of 2,4-D and BA. The callus induction was more effective in the root explants than the leaf and rhizome explants, and was the best on MS medium containing 3.0 mg/L 2,4-D or 1.0 mg/L 2,4-D and 3.0 mg/L BA. The highest numbers of shoots were regenerated when callus were cultured on MS medium containing 3.0 mg/L 2,4-D for 4 weeks. However, the multiple shoots were induced on MS medium supplemented with the combination of 2,4-D and BA. The normal root formation from shoot was effective on the MS medium lacking any plant growth regulators. For acclimatization, the regenerated plantlets were cultured on MS medium without sucrose and plant growth regulators for 2 weeks, and then transferred to the pot.
This experiment was conducted to establish the micropropagation of Calanthe discolor through multiple shoot formation from the culture of leaf, corm and root explants. Frequency of adventitious shoot formation from leaf explants was higher than those of corms and root explants. Frequency of adventitious shoot formation on medium with various concentrations of BA (0. 1.0, 3.0, and 5.0 mg/L) and NAA (0, 0.1, 0.5, and 1.0 mg/L) was tested. The maximun induction of adventitious shoot was obtained on half strength Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 3.0 mg/L BA and 1.0 mg/L NAA after 6 weeks of culture. Multiple shoots were transferred onto half strength MS medium with various concentrations of GA3 (0, 0.1, 0.5, 1.0, 3.0, and 5.0 mg/L). The number and length of multiple shoots on medium were highest on medium with 3.0 mg/L GA3. All the adventitious shoot grew well and rooted on half strength MS medium with 3.0 mg/L NAA. The plantlets were acclimatized up to 100% on sand with TKS-II or pearlite with TKS-II.
Experiments were conducted to find out the optimum cultural conditions for adventitious shoot regeneration from leaf segments of Gypsophila paniculata L. Thidiazuron (TDZ) was remarkably effective for the regeneration of leaf segment in Gypsophila paniculata compared with BA and kinetin. TDZ showed the highest rate of regeneration at $3.0mg{\cdot}L^{-1}$, while kinetin did not affect the regeneration. BA in the medium increased vitrification. Shoot formation efficiency was much higher on $0.3mg{\cdot}L^{-1}$ of IAA-containing media than NAA-containing media. Regeneration of leaf segments was induced with the agar concentrations of 1.0, 1.2 and 1.6%. Dark treatment at the initial stage of the culture increased the rate of regeneration up to 75%. The leaf explants from the 3rd subcultured stock plants after meristem culture, showed the highest adventitious shoot regeneration efficiency.
The influence of growth regulators (NAA and BA) and sucrose concentrations (0, 3, 5, 7, 9%) on in vitro rapid-propagation of virus-free sweet potato [Ipomoea batatas (L.) Lam.] was investigated with single-node or shoot-tip culture of two cultivars ('Matnami' and 'Shinhwangmi'). The survival rate and growth of shoot-tip explant was also investigated under the presence or absence of light (blue and red LED = 7:3, 150±5 μmol·m-2·s-1 PPFD) during minimal-growth in vitro conservation at 15℃. Vine length, vine diameter, fresh weight and dry weight were enhanced without callusing of explant in the MS medium supplemented with 0.2-0.5 mg·L-1 BA. The growth of single-node and shoot-tip explants were significantly enhanced with the increase of vine length, number of leaf, number of root, fresh weight, and dry weight in the solid medium containing 5% sucrose and 0.2 mg·L-1 BA. Vine elongation of shoot-tip explants were highest in the liquid medium containing 3% sucrose than the solid medium. The survival rate of minimal-growth in vitro conservation was 100% in 5 months under the presence of light (LED, 150±5 μmol·m-2·s-1 PPFD) at 15℃, but the explants in dark condition died in 3 months. The light was absolutely necessary for the in vitro conservation under minimal-growth conditions of virus-free sweet potato plantlets at 15℃, and the high density of explants (10 plantlets per Petri Dish) was increased the efficiency of mass conservation.
The single node cuttings of sweet potato (cv. Mokpo #29) plantlets maintained in vitro were cultured with (MF+) or without membrane filter (MF-) under photomixotrophic (PM), hetrotrophic (HT) and autotrophic (AT) conditions. Shoot length was the greatest (11.9cm) in 3$0^{\circ}C$ (HT) treatment and it was the shortest (3.4 cm) in $25^{\circ}C$ (PM) treatment. Nodal explants cultured in 3$0^{\circ}C$ treatment looked more vigorous than those of $25^{\circ}C$ in appearance, and node number was the greatest (10.5 per plantlet) among the treatments. But plantlets grew in 3$0^{\circ}C$ (HT) treatment were observed all overgrown. The size in leaf area was about 2 times greater and shoot length was about 2 times shorter in PM than in HT condition. Percent dry matter of shoots was 5.9% (HT) and 7.4% (PM) in $25^{\circ}C$ treatment and 6.1% (HT) and 7.4% (PM) in 3$0^{\circ}C$ treatment. Plantlets cultured in the MF+ treatments were less succulent than those cultured in the MF- treatment. Vitrified plantlets were examinated 14.8% (both $25^{\circ}C$ and 3$0^{\circ}C$) in PM condition and 22.2% ($25^{\circ}C$) and 31.5% (3$0^{\circ}C$) in HT condition. Sucrose was necessary for the survival of in vitro plantlets. In the sucrose-free medium, explants cultured in the MF- had turned yellow and were dead after 30 days of culture. But explants cultured in the MF+ were alive and produced plantlets with shoot and root (AT). On the other hand, the survival of explants on the MS basal medium (sucrose-free and hormone-free) depended entirely upon the MF attachment.
Whole plants were regenerated from callus induced from leaf explants in hybrid kiwi (Actinidia deliciosa${\times}$A. arguta). Callus was induced from leaf explants which cultured on MS solid medium supplemented with combination of auxin (2,4-D, NAA: 0.1~0.5 mg/l) and cytokinin (BA: 0.1~0.2 mg/l). them, the highest callus formation (96.2%) was obtained from the treatment of 0.5 mg/1 2,4-D+0.1 mg/l NAA+0.05 mg/l BA. In the experiment of adventitious shoots induction from primary shoots, only a few shoots were produced in the treatment of 1.0 mg/l BA+0.05 mg/l IBA or 2.0 mg/l BA+0.05 mg/l lBA. As the callus were transferred to the secondary shoot-inducing medium, multiple shoots were obtained from the medium supplemented with 1.0, 2.0 or 5.0 mg/l zeatin in addition to the mixed treatments of BA, thidiazuron (TDZ) or zeatin. However, no multiple shoots were induced on the BA-contained medium of concentrations. Therefore it turned out that addition of BA to medium was less effective for induction of multiple shoots from callus in Actinidia deliciosa${\times}$A. arguta. For producing adventitious roots from shoots, the best frequency of rooting (83.3%) were recorded on the treatment of in vitro rooting (Standardi (St)+1.0 mg/l IBA). On the other side, the lowest result (40.0%) were shown in the treatment of 500 mg/l IBA, 1 hr. Whole plants with shoots and roots were recovered and acclimatized successfully.
An efficient and reproducible procedure for the large scale propagation of Hovenia dulcis Thunb. is described. Shoot primodia emerging from the leaf surface was induced from MS medium supplemented with NAA. Stem cuttings were suitable explants for multiple shoot proliferation. They produced axillary shoots which branched repeatedly, yielding an average of 7 shoots per explants after 4 weeks in culture, when cultured on a woody plant medium (WPM) containing 0.1mg/l BA and 0.1mg/l NAA. Stem, leaf and root segments from axenic seedlings were used as explant source to induce somatic embryogenesis. A high frequency of somatic embryos were induced directly from leaf in MS medium with NAA, 2,4-D and in medium containing NAA, 2,4-D with BA. Somatic embryos were germinated in MS medium supplemented with 1mg/ l $GA_3$. Somatic embryos proliferated secondary somatic embryos rapidly after transfer to MS medium supplemented with 1mg/ l kinetin, 1mg/ l $GA_3$ and 2% dextrose.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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