본 연구에서는 벨루가 렌틸 추출물(BLE)의 항염증 효능을 NO 생성 측면에서 검토하고 이와 관련된 분자 기전을 규명하고자 하였다. LPS, LTA 및 지방세포 공동배양에 의해 활성화된 RAW 264.7 대식세포에서 BLE는 독성이 없는 농도 범위에서 유의적인 NO 생성 저해 효과를 보였다. 이와 함께 BLE 처리에 따라 iNOS mRNA 및 단백질의 발현이 유의적으로 저해됨을 확인하였으며, 이는 BLE에 의한 NO 생성 억제 효과가 전사 수준에서의 iNOS 발현을 억제함으로부터 기인하는 것임을 시사한다. 추가적으로 BLE는 NO 외에도 활성화된 대식세포에서 증가하는 다양한 염증성 사이토카인 유전자(COX-2, IL-1β 및 IL-6)의 mRNA 발현 또한 유의적으로 억제하는 것으로 나타났다. BLE의 항염증 효과와 관련된 분자 기전에 관한 추가적인 연구를 수행한 결과, 항염증 관련 대표 기전인 NF-κB/MAP kinases 신호 경로와는 연관성이 없는 것으로 나타났다. 반면, BLE 처리에 따라 Nrf2 단백질 발현의 증가 및 활성화가 유도되고 HO-1의 발현이 유의적으로 증가하는 것을 확인함으로써 Nrf2가 HO-1의 발현을 증가시키기 위한 전사 인자로서 작용할 가능성이 높음을 확인하였다. 따라서, 본 연구를 통해 식용원료 유래의 잠재적인 항염증 소재로서 BLE의 활용 가능성을 확인할 수 있었으며, 향후 동물모델을 대상으로 항염증 효과를 입증하기 위한 추가적인 연구가 필요할 것으로 생각된다.
Cirsium japonicum var. ussuriense has long been used in herbal medicine for the treatment of arthritis, dyspepsia, and bleeding in Korea. In the present study, we investigated anti-inflammatory effects of C. japonicum var. ussuriense against lipopolysaccharide(LPS)-induced activation in RAW264.7 cells by the expression of heme oxygenase (HO)-1. The 70% EtOH extract of the aerial parts of C. japonicum var. ussuriense (CJE), showed the potent anti-inflammatory effects on LPS-induced inflammation in RAW264.7 cells. The anti-inflammatory effect of CJE was demonstrated by the suppression of pro-inflammatory mediators, including pro-inflammatory enzymes (inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2). Furthermore CJE induced HO-1 expression through nuclear translocation of nuclear factor E2-related factor 2 (Nrf2) and increased HO activity in RAW264.7 macrophages. The effects of CJE on LPS-induced NO and $PGE_2$ productions were partially reversed by an HO-1 inhibitor, tin protoporphyrin (SnPP). Therefore, it is suggested that CJE-induced HO-1 expression plays a role of the resulting anti-inflammatory effects in macrophages. These results suggest that CJE may be a promising candidate for the treatment of inflammatory diseases.
본 연구센터에서는 백색과 황색의 기존 품종의 감자보다 anthocyanin함량이 높고 생리활성이 우수한 것으로 확인된 신품종인 컬러감자 '홍영'과 '자영'을 개발하였으며, 차후 컬러감자를 산업화 용도로 가공 시 전량 폐기되는 외피의 활용도를 높이기 위하여 다음과 같은 생리활성 연구를 실시하였다. 컬러감자외피의 추출물과 분획물을 이용하여 항염증 효과를 검토한 결과, 대식세포인 RAW264.7 cell에서 염증매개물질인 lipopoly sacchride(LPS)로 염증을 유발시켜 nitric oxide(NO), prostagland-in $E_2(PGE_2)$ inducible nitric oxide synthase(iNOS), 그리고 cyclo oxygenase-2(COX-2)같은 염증유발인자들의 억제효과를 확인하였다. 자색감자인 자영외피 Chloroform분획물의 염증유발인자 억제 시 $IC_{50}$ value를 측정하여 $25{\sim}50{\mu}g/ml$의 농도에서 유의성 있는 항염증 효과를 보였다. Nitric oxide 생성을 농도의존적으로 현저하게 저해하는 농도는 $36.15{\mu}g/ml$이며, 세포독성이 없는 최고 농도인 $100{\mu}g/ml$의 농도에서 LPS에 의해 유도된 $PGE_2$를 76.68%만큼 유의성 있는 저해 효과를 보였다. 그리고 iNOS와 COX-2단백질을 유의성 있게 저해하는 농도는 $50{\mu}g/ml$ 처리였으며, 특이적으로 iNOS는 $25{\mu}g/ml$을 처리하였을 때부터 유의성 있는 저해효과를 보였다. 따라서 본 연구 결과는 자영외피의 chloroform 분획물이 유의성 있는 항염증 효과를 나타내며, 이러한 효능은 예방의학적 기능성을 충분이 가지고 있기에 염증성질환의 예방을 위한 건강기능성식품의 개발가능성을 제시할 수 있을 것으로 사료된다.
Objectives : The purpose of this study was to evaluate whether acupuncture at $SP_6$ attenuates esophageal inflammation on refluxed-induced esophagitis. Methods : Acupuncture at $SP_6$ was stimulated by acupuncture torsion technique for 30 seconds four times every hour after an operation induced reflux esophagitis(RE), and its effects were assessed in comparison with RE rats without acupuncture, and normal rats. Results : $SP_6$ acupuncture stimulation markedly ameliorated mucosal damage in the histological evaluation. Reflux-induced esophagitis rats exhibited the down-regulation of antioxidant-related protein expression levels such as heme oxygenase-1(HO-1) in the esophagitis; however, the associated levels with $SP_6$ acupuncture stimulation were significantly higher than those in RE rats without acupuncture stimulation. Moreover, $SP_6$ acupuncture stimulation significantly reduced the expression of inflammatory proteins through mitogen-activated protein kinase(MAPK)-related signaling pathways. The increased protein expressions of inflammatory mediators, cyclooxygenase-2(COX-2) and inducible nitric oxide synthase(iNOS), by nuclear factor-kappa B(NF-kB) activation were significantly suppressed through $SP_6$ acupuncture stimulation. Conclusions : Our findings support the therapeutic evidence for $SP_6$ acupuncture stimulation alleviating the development of esophagitis via regulating inflammation through the activation of the antioxidant pathway.
Although hepatic microcirculatory dysfunction occurs during endotoxemia, the mechanism responsible for this remains unclear. Since Kupffer cells provide signals that regulate hepatic response in inflammation, this study was designed to investigate the role of Kupffer cells in the imbalance in the expression of vasoactive mediators. Endotoxemia was induced by intraperitoneal E. coli endotoxin (LPS, 1 mg/kg body weight). Kupffer cells were inactivated with gadolinium chloride ($GdCl_3$, 7.5 mg/kg body weight, intravenously) 2 days prior to LPS exposure. Liver samples were taken 6 h following LPS exposure for RT-PCR analysis of mRNA for genes of interest: endothelin (ET-1), its receptors $ET_A$ and $ET_B$, inducible nitric oxide synthase (iNOS), heme oxygenase (HO-1), and tumor necrosis factor-$\alpha$ (TNF-$\alpha$). mRNA levels for iNOS and TNF-$\alpha$ were significantly increased 31.8-fold and 26.7-fold in LPS-treated animals, respectively. This increase was markedly attenuated by $GdCl_3$, HO-1 expression significantly increased in LPS-treated animals, with no significant difference between saline and $GdCl_3$ groups. ET-1 was increased by LPS. mRNA levels for $ET_A$ receptor showed no change, whereas $ET_B$ transcripts increased in LPS-treated animals. The increase in $ET_B$ transcripts was potentiated by $GdCl_3$. We conclude that activation of Kupffer cells plays an important role in the imbalanced hepatic vasoregulatory gene expression induced by endotoxin.
Osteoarthritis (OA) is an inflammatory degenerative joint disease that is accompanied by irreversible joint cartilage destruction. Recently, the antioxidant effects of Carpomitra costata, which is a type of brown algae, have been reported, but their effects on OA have not been investigated. In this study, the anti-osteoarthritic effect of the ethanol extract of C. costata (EECC) on SW1353 human chondrocytes was studied. Results showed that EECC significantly attenuated the interleukin-1β (IL-1β)-induced release of pro-inflammatory mediators, including prostaglandin E2 and nitric oxide (NO), as well as expressions of cyclo-oxygenase-2 and inducible NO synthase. EECC also inhibited the IL-1β-induced expressions of matrix metalloproteinase-1, -3, and -13 in SW1353 chondrocytes, which reduced their extracellular secretion. In addition, the oxidative stress induced by IL-1β was confirmed to be blocked by EECC due to the inhibition of reactive oxygen species generation. Moreover, EECC suppressed IL-1β-mediated translocation of nuclear factor-kappa B (NF-κB) from cytosol into the nucleus and the degradation of IκB-α, which indicates that EECC exhibits anti-inflammatory effects by inhibiting the NF-κB signaling pathway. These results are the first to demonstrate the anti-inflammatory activities of C. costata extracts in chondrocytes, thus suggesting that this algae extract may be used in the treatment of OA.
본 연구에서는 C. pubescens Burkill 에탄올 추출물(CPEE)의 항산화능과 항염증 생리활성을 DPPH 라디칼 소거능, ROS 생성 억제능, NO 소거 활성 등을 통해 분석하였다. 먼저 CPEE의 항산화능을 DPPH 라디칼 소거능으로 분석한 결과 강한 소거능을 보였으며, 좀 더 자세한 항산화능 작용기작을 알아보기 위해 ROS 생성 억제능으로 분석한 결과 농도 의존적으로 강한 ROS 소거능을 보였다. 뿐만 아니라 대표적인 항산화 효소인 HO-1 및 그 전사 인자인 Nrf2의 단백질 발현에 미치는 영향을 분석한 결과 CPEE에 의해 HO-1 및 Nrf2의 발현이 증가됨을 보였다. 한편 CPEE가 LPS에 의해 유도된 NO 생성에 미치는 영향을 분석한 결과 농도의 존적인 NO 생성 저해능을 보였으며 이는 NO 생성 단백질인 iNOS의 발현 저해에서 기인함을 확인하였다. 이러한 결과를 통해 CPEE의 높은 항산화능과 항염증 활성을 확인하였으며 향후 잠재적인 기능성 소재로서 유용하게 활용될 수 있을 것으로 판단된다.
Objectives This study was carried out to find out the Antioxidant and Anti-inflammatory Effects of Components of Mahwangbujaseshin-tang in LPS-Stimulated RAW264.7 Macrophages. Methods There are 5 experimental groups. ; normal, control, EH (Ephedrae Herba), ALRP (Aconiti Lateralis Radix Preparata) and AR (Asiasari Radix). The extract of EH, ALRP and AR ($100{\mu}g/ml$) was added to each group. We examined cytotoxicity, total phenolic contents, DPPH and ABTS free radical scavenging activity, Intracellular ROS (reactive oxygen species) production, NO (Total Nitric oxide), iNOS (inducible nitric oxide synthase), PGE2 (prostaglandin E2), COX-2 (cyclooxygenase-2), $IL-1{\beta}$ ($interleukin-1{\beta}$), IL-6 (interleukin-6), $TNF-{\alpha}$ (tumor necrosis factor-${\alpha}$), MMP-9 (matrix metalloproteinase-9), TIMP-1 (tissue inhibitor of metalloproteinase-1) and HO-1 (heme oxygenase-1) expression level. Results 1. Total phenolic contents of EH were in the highest level. 2. DPPH and ABTS free radical scavenging activity of EH was in the highest level. 3. ROS production was significantly decreased in AR. 4. NO production was significantly decreased in EH, ALRP, AR and iNOS expression was decreased in EH, AR. 5. PGE2 and COX-2 expression was decreased in EH, AR. 6. $IL-1{\beta}$ production was significantly decreased in EH, AR and IL-6 production was significantly decreased in AR. $TNF-{\alpha}$ production was significantly decreased in ALRP, AR. 7. MMP-9 and TIMP-1 production were significantly decreased in EH. 8. HO-1 expression was significantly increased in EH. 9. With simultaneous usage of SnPP which is expression inhibitor of HO-1, NO, $IL-1{\beta}$, IL-6 and $TNF-{\alpha}$ production were partially increased in EH, ALRP, AR. Conclusions According to this study, Components of Mahwangbujaseshin-tang have anti-oxidants and anti-inflammation effects in LPS-Stimulated RAW264.7 Macrophages.
Mahaenggamsuk-tang (MHGS) has been widely used in Korea and China for the treatment of various diseases. MHGS was constituted the Ephedrea Herba, Armenicae Semen, Glycyrrhizae Radix and Gypsum Fibrosum. In this study, we have made three different solvents extract as MHGS water extract (MHGS-W), MHGS 50% EtOH extract (MHGS-50E), and MHGS 100% EtOH extract (MHGS-100E). The MHGS-W, MHGS-50E and MHGS-100E showed the discernible difference patterns on HPLC analysis. Furthermore, MHGS-50E and MHGS-100E significantly increased the DPPH and ABTS radical scavenging effects than MHGS-W. In addition, the MHGS-50E and MHGS-100E also inhibited significantly nitric oxide (NO) and prostaglandin E2 (PGE2) production, and inducible nitric oxide synthase (iNOS) cyclooxygenase-2 (COX-2) protein expression in RAW264.7. On the other hand, MHGS-50E and MHGS-W showed remarkable protection on the HT22 cell via heme oxygenase (HO)-1, but MHGS-100E did not show. The results of this study proved that MHGS-50E has greater potential therapeutic uses by exerting antioxidant, anti-inflammatory and neuroprotective effects compared to MHGS-100E, MHGS-W. Our study suggests that the different solvent might be affected the biological activities when make the traditional herbal medicines including MHGS.
This study was designed to investigate the effect of Trolox, a hydrophilic analogue of vitamin E, on the alteration of vasoregulatory gene expression during hepatic ischemia and reperfusion (I/R). Rats were subjected to 60 min of hepatic ischemia in vivo. The rats were treated intravenously with Trolox (2.5 mg/kg) or the vehicle as a control 5 min before reperfusion. Liver samples were obtained 5 h after reperfusion for a RT-PCR analysis on the mRNA for the genes of interest. These mRNA peptides are endothelin-1 (ET -1), potent vasoconstrictor peptide, its receptor $ET_A$ and $ET_B$, vasodilator endothelial nitric oxide synthase (eNOS), inducible nitric oxide synthase (iNOS), heme oxygenase-1 (HO-1), tumor necrosis factor-$\alpha$ (TNF-$\alpha$) and cyclooxygenase-2 (COX-2). It was seen that serum alanine aminotransferase and lipid peroxi-dation levels were markedly increased after I/R and Trolox significantly suppressed this increase. In contrast, the glutathione concentration decreased in the I/R group, and this decrease was inhibited by Trolox. ET-1 mRNA expression was increased by I/R, an increase which was prevented by Trolox. The mRNA levels for $ET_A$ receptor was significantly decreased, whereas ET$_{B}$ receptor transcript increased in the I/R group. The increase in $ET_A$ was prevented by Trolox. The mRNA levels for iNOS and HO-1 significantly increased in the I/R group and Trolox attenuated this increase. There were no significant differences in eNOS mRNA expression among any of the experimental groups. The mRNA levels for COX-2 and TNF-$\alpha$ significantly increased in I/R group and Trolox also attenuated this increase. Our findings suggest that I/R induces an imbalanced hepatic vasoregulatory gene expression and Trolox ameliorates this change through its free radical scavenging activity.y.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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