• 제목/요약/키워드: human HepG2 cells

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변이 도파민 2 수용체와 나트륨 옥소 공동 수송체 이입유전자의 이중 리포터시스템 개발 (Development of Dual Reporter System of Mutant Dopamine 2 Receptor ($D_2R$) and Sodium Iodide Symporter (NIS) Transgenes)

  • 황도원;이동수;강주현;장영수;김윤희;정재민;정준기;이명철
    • 대한핵의학회지
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    • 제38권4호
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    • pp.294-299
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    • 2004
  • 목적 : 현재 생체 내로 이식된 세포를 추적하는데 여러 가지 리포터 유전자들이 이용되고 있다. 이 연구에서는 사람 나트륨 옥소 공동 수송체 (hNIS)와 도파민 2 수용체($D_2R$)를 이중 리포터 유전자로 사용하여 각각을 비교하였다. 대상 및 방법: hNIS와 $D_2R$의 발현이 동시에 이루어지도록 하기 위해서 IRES (Internal ribosome entry site)로 연결된 재조합 플라스미드(pIRES-hNIS/D_2R)를 제조하였다. $pIRES-hNIS/D_2R$를 사람의 간암세포주인 SK-Hep1에 lipofactamine을 이용하여 형질을 도입시킨 후, 항생제(G418)를 농도별로 처리하여 2주간 선별하였다(HEP-ND). hNIS와 $D_2R$발현 유무와 발현 정도를 알아보기 위하여 각 유전자에 특이적인 프라이머를 이용하여 RT-PCR을 수행하였다. 각 형질 도입세포군에서, hNIS의 활성은 $^{125}I$ 섭취율을 이용하여 측정하고 $D_2R$의 활성은 $[^3H]spiperone$을 리간드로 이용하여 수용체 결합 정도를 측정하였다. 결과: 선별된 HEP-ND세포에서 hNIS와 $D_2R$의 발현을 RT-PCR로 확인하였을 때 IRES로 연결된 hNIS와 $D_2R$의 발현 정도는 서로 비슷하였다. HEP-ND세포의 $^{125}I$ 섭취율은 대조군인 SK-Hep1세포에 배해 30-40배 증가되었고, $KClO_4$에 의해 $^{125}I$ 섭취가 저해되었다. $D_2R$의 발현 정도를 측정할 수 있는 수용체 결합 분석법을 통해G418 농도별로 나눈 두 종류의 세포주에서, $[^3H]spiperone$을 이용한 해리상수 ($K_d$)와 최대결합 부위농도 ($B_{max}$)는 각각 2.92 nM, 745.25 fmol/mg protein과 8.91nM, 1323 fmole/mg protein이었다. hNIS와 $D_2R$발현의 상관관계에서는 높은 상관관계를 나타내었다. 결론: 이 연구에서 hNIS와 $D_2R$가 이입된 세포주에서 이중 유전자, 감마 영상 리포터 시스템을 개발하였으며, $D_2R$와 HNIS 유전자를 이중 핵 영상 시스템으로서 서로 상호보완적으로 이용할 수 있을 것으로 기대하고 있다.

간암 세포주에서 황정(黃精)의 주요 성분인 Kaempferol의 성장 억제 효과 (Anti-Growth Effect of Kaempferol, a Major Component of Polygonati Rhizoma, in Hepatocarcinoma Cells)

  • 주예진;정지천
    • 동의생리병리학회지
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    • 제26권4호
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    • pp.519-526
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    • 2012
  • Recently, herbal flavonoids have been implicated for anti-cancer therapy. Flavonoids as a commonly known for their anti-oxidant activity, are contained in the herbal medicine as well as root of plants, vegetables, fruits, grains, tea, and wine. Kaempferol, a component of Polygonati rhizoma, a member of the herbal flavonoids, has been studied for anti-hypercholesterol, anti-hypertension and anti-diabetes. It is also known to be effective in anti-cancer therapy for breast, prostate and other type of cancers. However, the anti-cancer therapeutic mechanisms are pooly understood. Here, we investigated the molecular mechanism underlying kaempferol-induced anti-cancer effects using the human liver cancer cell lines, Hep3B, HepG2, and Sk-Hep-1, and human Chang liver cell as a control. As shown by the FACS analysis, measurement of caspase activity, DAPI and trypan blue staining, and DNA fragmentation assay, kaempferol induced apoptosis in the liver cancer cells with the greater potential in Hep3B cells than other liver cancer cells. In addition, we performed microarray analysis to profile the genome-wide mRNA expression regulated by kaempferol. Many of the apoptosis-related genes were significantly induced in kaempferol-treated Hep3B cells, in particular, the genes associated with MAPK cascade. Additionally, kaempferol induced the mRNA expression of genes involved in MKK7-JNK cascade, MKK3-p38 cascade, and caspase signaling pathway, which are all known to trigger apoptosis. Overall, our data suggest that kaempferol has anti-liver cancer effects by inducing apoptosis through the MKK7-JNK cascade, MKK3-p38 cascade, and caspase signaling pathways.

Regulation of the Lactobacillus Strains on HMGCoA Reductase Gene Transcription in Human HepG2 Cells via Nuclear Factor-κB

  • Chen, Kun;Li, Shaocong;Chen, Fang;Li, Jun;Luo, Xuegang
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제26권2호
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    • pp.402-407
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    • 2016
  • Lactic acid bacteria have been identified to be effective in reducing cholesterol levels. Most of the mechanistic studies were focused on the bile salt deconjugation ability of bile salt hydrolase in lactic acid bacteria. However, the mechanism by which Lactobacillus decreases cholesterol levels has not been thoroughly studied in intact primate cells. 3-Hydroxy-3-methyl-glutaryl-coenzyme A reductase (HMGCR) is the vital enzyme in cholesterol synthesis. To confirm the effect of probiotic Lactobacillus strains on HMGCR level, in the present study, human hepatoma HepG2 cells were treated with Lactobacillus strains, and then the HMGCR level was illustrated by luciferase reporter assay and RT-PCR. The results showed that the level of HMGCR was suppressed after being treated with the live Lactobacillus strains. These works might set a foundation for the following study of the antihyperlipidemic effects of L. acidophilus, and contribute to the development of functional foods or drugs that benefit patients suffering from hyperlipidemia diseases.

상황버섯 균사체를 이용한 발효주의 추출물이 염증관련 단백질의 발현과 세포내 활성산소 생성에 미치는 영향 (Effect of the Evaporating Extract from Liquor of Fermentation Using Mycelium of Phellinus linteus on the Expression of Inflammatory Proteins and the Generation of Reactive Oxygen Species)

  • 이준혁;최영현;이용태;최성희;정경태;정영기;최병태
    • 동의생리병리학회지
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    • 제18권6호
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    • pp.1825-1831
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    • 2004
  • Phellinus linteus is known as a medicinal mushroom, which has the pharmaceutical activity on tumors and inflammatory diseases in traditional Oriental medicine. However, despite extensive pharmacological studies on P. linteus, the liquor of fermentation using mycelium of P. linteus(LFMP) has not been investigated. In the present study, it was examined the effect of the evaporating extract from LFMP(E-LFMP) on the expression of inflammatory proteins and the generation of reactive oxygen species in human hepatocarcinoma HepG2 cells. E-LFMP inhibited acetaldehyde-induced morphological change in HepG2 cells. Also, E-LFMP inhibits expression of inflammatory proteins including cyclooxygenase(COX)-1 and COX-2 through suppressing nuclear translocation of nuclear factor κB(NF-κB) and degradation of inhibitory κBα(IκBα). In addition, E-LFMP inhibits generation of reactive oxygen species(ROS) by hydrogen peroxide(H₂O₂) in HepG2 cells. These results suggest that LFMP has the pharmaceutical, especially anti-inflammatory, activity similar to P. linteus mushroom.

도라지 추출물 첨가에 의한 돌나물의 항발암 상승효과 (Enhancement of Anticarcinogenic Effect by Combination of Sedum sarmentosum Bunge with Platycodon grandiflorum A. Extracts)

  • 박윤자;김미향;배송자
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제31권1호
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    • pp.136-142
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    • 2002
  • 본 연구는 다른 산채류에 비해 칼슘이 칼슘이 특히 많은 우수한 식품으로 예부터 물김치나 겉절이 무침, 돌나무 김치로 많이 이용되어온 돌나물의 암세포 증식억제 및 암예방 효과를 검색하고 나아가 도라지 추출물과의 암세포 증식억제 상승효과를 보기 위하여 실시하였다. 돌나물의 암세포 증식억제 효과를 MTT assay로 실험한 결과, 3종의 암세포주(HepG2, HeLa, MCF-7) 모두 돌나물의 ethylether 분획층(SSMEE)에서 아주 높은 암세포 증식억제 효과를 보였으며, ethylacetate 분획층(SSMEA)에서도 유의적인 암세포 증식억제 효과를 나타내었다. 또한, 돌나물 분획물의 암예방 QR유도 활성을 HepG2 세포주를 이용하여 실험한 결과, 다른 분획층에 비해 비극성 용매층인 ethylether 분획층(SSMEE)과 hexane 분획층(SSMH)에서 유의적으로 QR유도 활성을 증가시키는 것으로 나타났다. 한편, 돌나물과 도라지와의 일정비 조합을 통해 상승효과를 본 결과, $IC_{50}$/이 되는 도라지의 butanol층 (PGMB)dfm 일정량 첨가했을 때 용매별 돌나물의 분획층 모두에서 암세포 증식억제를 상승시키는 효과를 나타내었고, 암예방 QR 유도활성 효과도 훨씬 상승하였으므로, 돌나물 조리시 유사한 부재료를 사용하는 도라지의 성분을 일정량 첨가하여 겉절이 무침이나 김치로 이용될 때 돌나물 성분의 생리활성 효과가 더욱 상승될 것으로 사료되며, 이후 돌나물의 생리활성 물질 구조 및 기전 규명에 유익한 자료가 될 것으로 사료된다.

Possible Anticancer Activity of Rosuvastatine, Doxazosin, Repaglinide and Oxcarbazepin

  • El Sharkawi, Fathia Zaky;El Shemy, Hany Abdelaziz;Khaled, Hussein Moustafa
    • Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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    • 제15권1호
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    • pp.199-203
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    • 2014
  • Background: Rosuvastatine, doxazosin, repaglinide and oxcarbazepin are therapeutic drugs available in the market for the treatment of different diseases. Potential to display antitumor activities has also been suggested. The aim of the current study was to evaluate their in vitro effects on some human transformed cell lines. Materials and Methods: Cytotoxicity of the four drugs was tested in MCF-7, HeLa and HepG2 cells by the neutral red assay method and also the effect of rosuvastatine and doxazosin against Ehrlich Ascities Carcinoma Cells (EACC) by trypan blue assay. Results: Rosuvastatine exerted the greatest cytotoxic effect against HepG2 cells with an $IC_{50}$ value of $58.7{\pm}69.3$; in contrast doxazosin showed least activity with $IC_{50}=104.4{\pm}115.7$. Repaglinide inhibited the growth of both HepG2 and HeLa cells with $IC_{50}$ values of $87.6{\pm}117.5$ and $89.3{\pm}119.5$, respectively. Oxcarbazepine showed a potent cytotoxicity against both HeLa ($IC_{50}=19.4{\pm}43.9$) and MCF7 cancer cells (($IC_{50}=22{\pm}35.7$).On the other hand the growth of EACC was completely inhibited by doxazosine (100% inhibition) while rosuvastatine had weak inhibitory activity (11.6%). Conclusions: The four tested drugs may have cytotoxic effects against hepatic, breast and cervical carcinoma cells; also doxazosine may inhibit the growth of endometrial cancer cells. Further investigations in animals are needed to confirm these results.

Detection of Anticancer Activity from the Root of Angelica gigas In Vitro

  • Ahn, Kyung-Seop;Sim, Woong-Seop;Kim, Ik-Hwan
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제5권2호
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    • pp.105-109
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    • 1995
  • Anticancer activity of a fraction of the ethanol extract from the root of Korean angelica (Angelica gigas Nakai) was recognized in human cancer cell lines HeLa $S_3$, K-562, and Hep $G_2$. The extract blocked the phorbol ester-inducing megakaryocytic differentiation of K-562 cells, which indicated the modification of protein kinase C (PKC) activity. In vitro assay showed the activation of PKC by the extract. An effective fraction of the Angelica gigas extract, of which $R_f$ value was 0.64 in a thin layer chromatography, was a different component from those of European angelicas. The $ED_50$ value of the fraction was 8, 9, and $16\;\mu\textrm{m}/ml$ against HeLa $S_3\;Hep\;G_2$, and K-562 cells, respectively, while the fraction showed higher $ED_50$ values against normal cell lines.

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A ginseng saponin metabolite-induced apoptosis in HepG2 cells involves a mitochondria-mediated pathway and its downstream caspase-8 activation and Bid cleavage

  • Hee, Oh-Seon;Lee, Bang-Wool;Quan, Yin-Hu;Kim, Hyun-Mi;Lee, Byung-Hoon
    • 대한약학회:학술대회논문집
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    • 대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2-2
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    • pp.107.1-107.1
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    • 2003
  • 20-O-(${\beta}$-D-Glucopyranosyl)-20(S)-protopanaxadiol (IH901), an intestinal bacterial metabolite of ginseng saponins formed from ginsenosides Rb1, Rb2 and Rc, is suggested to be a potential chemopreventive agent. Here we show that IH901 induces apoptosis in human hepatoblastoma HepG2 cells. IH901 led to an early activation of procaspase-3 (6 h posttreatment), and the activation of caspase-8 became evident only later (18 h posttreatment). Caspase activation was a necessary requirement for apoptosis because caspase inhibitors significantly inhibited cell death by IH901. (omitted)

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인삼(Panax ginseng) 열매로부터 분리한 ginsenoside의 동정 및 암세포독성 효과 (Ginsenosides from the fruits of Panax ginseng and their cytotoxic effects on human cancer cell lines)

  • 곽정은;이영근;황보전;김형근;오선민;이대영;백남인
    • Journal of Applied Biological Chemistry
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    • 제61권4호
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    • pp.371-377
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    • 2018
  • 인삼(Panax. ginseng) 열매를 80% MeOH 수용액으로 3회 반복 추출한 뒤, 감압 농축한 추출물을 EtOAc, n-BuOH과 $H_2O$ 층으로 계통 분획을 실시하였다. EtOAc분획에 대하여 $SiO_2$ 및 ODS column chromatography를 반복실시하여 5종의 ginsenoside 화합물을 분리 및 정제하였다. NMR, IR, FAB/MS 데이터를 해석하여, 각각 ginsenoside F1 (1), ginsenoside F2 (2), ginsenpside F3 (3), ginsenoside Ia (4) 및 notoginsenoside Fe (5)로 구조 동정 하였다. 화합물 2-5는 인삼열매에서는 이번에 처음 분리 보고되었다. 분리한 5종의 화합물을 인체 암세포주(HCT-116, SK-OV-3, HeLa, HepG2, SK-MEL-5)에 처리하여 세포독성을 측정하였다. 이 중 화합물 2, 4, 및 5가 인체 암세포주에 대해 세포독성을 저해시키는 것을 알 수 있었다. 화합물 2는 SK-MEL-5, HepG2, HeLa세포에서 $IC_{50}$값이 82.8, 86.8, $78.3{\mu}M$로 확인되었다. 화합물 4는 HCT-116, SK-MEL-5, SK-OV-3, HepG2, HeLa 세포에서 $IC_{50}$ 값이 24.5, 25.4, 26.3, 22.0, $24.9{\mu}M$로 확인되었다. 화합물 5는 SK-MEL-5 세포에서 $IC_{50}$ 값이 $81.7{\mu}M$로 확인되었다. 인삼 열매에서 분리한 화합물2, 4, 및 5가 암세포주에 대해 강한 세포독성을 나타내는 것을 확인하였으며, 이 화합물들은 공통적으로 3번 수산기에 glucopyranose를 가지고 있음을 확인하였다.

감귤류 플라보노이드의 생리기능 활성 (Biofunctional Activities of Citrus Flavonoids)

  • 차재영;조영수
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제44권2호
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    • pp.122-128
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    • 2001
  • 감귤류 유래 플라보노이드인 hesperidin 및 naringin과 이들의 agIycone 형태인 hesperetin 및 naringenin의 생리기능 활성에 대하여 동물(흰쥐 및 햄스터)실험을 통한 지질대사,인체 간종양 세포주 HepG2 세포를 이용한 암세포 생육 및 지질대사, 노화와 질병의 원인이 되는 불포화 지방산의 지질 과산화 억제 작용을 중심으로 고찰하였다. 이들 감귤류 플라보노이드는 흰쥐에서의 콜레스테롤 농도 저하작용 및 햄스터에서의 중성지질 농도 저하작용을 나타내었다. 이러한 대사 기작으로서 콜레스테를 및 중성지질 합성의 중요 조절효소로 알려진 acyl-CoA: cholesterol acyltransferase(ACAT) 및 phosphatidate phosphohydrolase(PAP) 활성이 in vivo 및 in vitro 실험계에서 현저히 저해되었으며, 특히 aglycone 형태의 플라보노이드에서 그 효과가 강하게 나타났다. 또한,이들 플라보노이드는 인체 간종양 세포주 HepG2 세포를 이용한 실험에서 암세포 생육 억제 및 세포내 콜레스테롤과 중성지질 농도를 저하시키는 효과도 인정되었다. Hesperetin은 실험적으로 유도한 간질환을 개선시켰다. 노화 및 질병의 발생과 깊이 관련된 것으로 알려진 불포화지방산 과산화 반응을 억제시키는 항산화 효과도 확인되었는데, hesperetin에서 좋은 효과를 나타내었다. 이상의 결과에서 감귤류 유래 플라보노이드는 동물의 혈중 콜레스테롤 및 중성지질 억제작용에 의한 혈관계 질환 개선효과, 지방간을 비롯한 간질환 개선효과, 암세포 증식억제 작용, 노화 및 질병의 원인이 되는 지질 과산화 억제 작용 등 건강에 관련된 다양한 생리기능 활성이 존재하는 것을 확인하여 기능성 성분의 연구로 일정의 효과를 얻었다. 따라서 이러한 감귤류 유래의 생리활성 성분의 연구목적은 건강증진 효과를 높이는 식품의 개발과 식품 첨가물의 신규 수요를 증대시켜 국민의 건강을 향상시키는데 있다.

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