Kim, Ji-Sun;Bang, Mi-Ae;Lee, Song-Mi;Chae, Ho-Zoon;Kim, Kang-Hwa
BMB Reports
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제43권3호
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pp.170-175
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2010
Chaperone;Glutathione peroxidase;Peroxiredoxin;Schizosaccharomyces pombe;Thioredoxin peroxidase;To investigate the differences in the functional roles of peroxiredoxins (Prxs) and glutathione peroxidase (GPx) of Schizosaccharomyces pombe, we examined the peroxidase and molecular chaperone properties of the recombinant proteins. TPx (thioredoxin peroxidase) exhibited a capacity for peroxide reduction with the thioredoxin system. GPx also showed thioreoxin-dependent peroxidase activity rather than GPx activity. The peroxidase activity of BCP (bacterioferritin comigratory protein) was similar to that of TPx. However, peroxidase activity was not observed for PMP20 (peroxisomal membrane protein 20). TPx, PMP20, and GPx inhibited thermal aggregation of citrate synthase at 43$^{\circ}C$, but BCP failed to inhibit the aggregation. The chaperone activities of PMP20 and GPx were weaker than that of TPx. The peroxidase and chaperone properties of TPx, BCP, and GPx of the fission yeast are similar to those of Saccharomyces cerevisiae. The fission yeast PMP20 without thioredoxin-dependent peroxidase activity may act as a molecular chaperone.
Many defined cell culture media were formulated over 3() years ago and may be deficient in certain micronutrients whose essentiality has only subsequently been recognised. The objective of this study was to evaluate whether alpha-minimal essential medium (MEM) supplemented with 10% foetal bovine serum contained sufficient selenium for optimal activity of the selenium containing enzymes cytosolic glutathione peroxidase (cGPx) and phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase (PHGPx) in cultured Chinese hamster ovary (CHO) cells. Additionally, the effect of zinc deficiency and metallothionein (MT) overexpression on cGPx and PHGPx activity was studied. The addition of 100 nM of selenous acid to the culture medium increased cGPx expression by 10-fold and PHGPx by about 2-fold in both wild-type CHO-K1 cells and CHO-K1 cells overexpressing mouse MT-1. Zinc deficiency had no significant effect on enzyme activity, but cells overexpressing mouse MT-1 had higher levels of cGPx activity. Zinc deficiency decreased cell survival but overexpression of MT-1 was partially protective, probably because its presence in quantity favoured the uptake, sequestration and cellular retention of any remaining zinc. This study demonstrates that selenium in complete alpha-MEM is insufficient for optimal cGPx and PHGPx activity and may compromise the cellular response to oxidative stress.
Glutathione (GSH)은 직접적으로 활성산소종을 제거하거나 GSH peroxidase와 같은 활성산소종 제거 효소의 조효소로써, 산화적 스트레스로부터 세포를 방어하는 데 중요한 역할을 한다. GSH peroxidase는 두 분자의 GSH을 이용해 세포 내 과산화수소를 물로 전환한다. $N$-acetyl-L cysteine (NAC)는 항산화제 중 하나로 세포 내 GSH의 전구물질로 이용된다. 본 연구는, 0mM에서 20mM의 NAC 단독 처리 또는 100 Gy 감마선과 복합 처리한 효모세포에서 GSH peroxidase를 코드화(encoding)하는 유전자인 $GPX1$과 $GPX2$의 전사적 발현을 통해 GSH, NAC와 GSH peroxidase의 연관성을 알아보았다. $GPX1$과 $GPX2$의 전사적 발현은 NAC와 100 Gy 감마선에 의해 유도되었다. 조사된 효모세포에서 NAC의 증가 농도에 따라 GSH peroxidase 두 유전자의 발현은 감소되었다. 이러한 결과로, NAC에 의해 증가된 세포 내 GSH는 GSH peroxidase 유전자의 전사적 발현을 유도하며, NAC는 감마선으로부터 생성된 활성산소종 직접적 제거와 GSH peroxidase 유전자의 전사적 발현을 유도함으로써 세포를 보호할 수 있다는 것이 밝혀졌다.
The potent environmental contaminant, 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD), induces thymus atrophy in experimental animals. However, its mechanism of action is not fully understood. To gain insight into its immunosuppressive effect, Balb/c mice were intraperitoneally injected with TCDD ($30{\mu}g/kg$ body weight) and genes regulated by TCDD were identified using cDNA arrays [Park and Lee (2002)]. One of the regulated genes was that for plasma glutathione peroxidase (pGPx). Upon TCDD injection, pGPx mRNA levels in the thymus increased, in parallel with increases in GPx activity and the frequency of anti-human pGPx antibody-reactive cells. pGPX mRNA levels were also moderately up-regulated in the testis and spleen. This is the first report that a particular isotype of the glutathione peroxidase family is regulated by TCDD at both mRNA and protein levels. pGPx is expressed in various tissues in contact with body fluids, and detoxifies hydrogen peroxides and lipid hydroperoxides. It will be of interest to assess the role of pGPx in TCDD-induced thymic atrophy.
동진벼 유묘 뿌리에 환원제인 ascorbic acid, 신호전달물질인 salicylic acid와 methyl jasmonic acid, 중금속인 $NiCl_2$와 $CuSO_4$ 및 NaCl를 다양한 농도로 처리한 후 항산화효소인 glutathione peroxidase(GPX)의 활성과 동위효소의 패턴 변화를 살펴보았다. Ascorbic acid 처리에 의한 GPX의 총활성은 ascorbic acid 농도 증가에 의존적으로 증가하였으며 이러한 GPX활성 증가는 GPX1 동위효소의 현저한 활성증가에 기인하였다. GPX는 신호전달물질인 salicylic acid와 methyl jasmonic acid에 대하여 서로 다른 반응성을 보였다. GPX의 활성은 0.1 mM salicylic acid에 의해 증가하였다가 이후 감소하였다. 이에 비해 GPX는 methyl jasmonic acid의 농도증가에 의존하여 점진적으로 증가하여 1 mM methyl jasmonic acid에 의하여 약 3배의 활성증가를 보였다. 뿐만 아니라 GPX1 동위효소는 salicylic acid 농도가 증가할수록 활성이 감소한 반면 methyl jasmonic acid 농도가 증가할수록 현저하게 증가하였다. GPX의 총활성은 $NiCl_2$ 농도 증가에 따라 점진적으로 증가되었으나, $CuSO_4$ 처리군의 경우 GPX의 총비활성도는 0.5 mM $CuSO_4$에 의하여 약 2배 증가한 이후 점차 감소하였다. $NiCl_2$와 $CuSO_4$ 처리에 의한 GPX 활성증가도 주로 GPX1 동위효소의 활성증가에 기인하였다. NaCl 처리에 의한 GPX 총활성은 300 mM NaCl 처리군에서 약 1.7배 증가되었다가 이후 감소하였다. 특이하게도 NaCl 농도가 증가함에 따라 GPX2 동위효소 활성이 점차 증가하였다.
Yayeh, Taddesse;Jeong, Ha Ram;Park, Yoon Soo;Moon, Sohyeon;Sur, Bongjun;Yoo, Hwan-Soo;Oh, Seikwan
Biomolecules & Therapeutics
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제29권1호
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pp.52-57
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2021
Fumonisin B1 (FB1) structurally resembles sphingolipids and interferes with their metabolism leading to sphingolipid dysregulation. We questioned if FB1 could exacerbate liver or kidney toxicities in glutathione peroxidase 1 (Gpx1) and catalase (Cat) knockout mice. While higher serum levels of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and sphinganine (Sa) were measured in Gpx1/Cat knockout mice (Gpx1/Cat KO) than wild type mice after 5 days of FB1 treatment, serum levels of alanine aminotransferase (ALT), sphingosine-1 phosphate (So-1-P), and sphinganine-1 phosphate (Sa-1-P) were found to be relatively low. Although Sa was highly elevated in Gpx1/Cat KO mice and wild mice, lower levels of So and Sa were found in both the kidney and liver tissues of Gpx/Cat KO mice than wild type mice after FB1 treatment. Paradoxically, FB1-induced cellular apoptosis and necrosis were hastened under oxidative stress in Gpx1/Cat KO mice.
An, Byung Chull;Jung, Nak-Kyun;Park, Chun Young;Oh, In-Jae;Choi, Yoo-Duk;Park, Jae-Il;Lee, Seung-won
Molecules and Cells
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제39권8호
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pp.631-638
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2016
Glutathione peroxidase 3 (GPx3), an antioxidant enzyme, acts as a modulator of redox signaling, has immunomodulatory function, and catalyzes the detoxification of reactive oxygen species (ROS). GPx3 has been identified as a tumor suppressor in many cancers. Although hyper-methylation of the GPx3 promoter has been shown to down-regulate its expression, other mechanisms by which GPx3 expression is regulated have not been reported. The aim of this study was to further elucidate the mechanisms of GPx3 regulation. GPx3 gene analysis predicted the presence of ten glucocorticoid response elements (GREs) on the GPx3 gene. This result prompted us to investigate whether GPx3 expression is regulated by the glucocorticoid receptor (GR), which is implicated in tumor response to chemotherapy. The corticosteroid dexamethasone (Dex) was used to examine the possible relationship between GR and GPx3 expression. Dex significantly induced GPx3 expression in H1299, H1650, and H1975 cell lines, which exhibit low levels of GPx3 expression under normal conditions. The results of EMSA and ChIP-PCR suggest that GR binds directly to GRE 6 and 7, both of which are located near the GPx3 promoter. Assessment of GPx3 transcription efficiency using a luciferase reporter system showed that blocking formation of the GR-GRE complexes reduced luciferase activity by 7-8-fold. Suppression of GR expression by siRNA transfection also induced down-regulation of GPx3. These data indicate that GPx3 expression can be regulated independently via epigenetic or GR-mediated mechanisms in lung cancer cells, and suggest that GPx3 could potentiate glucocorticoid (GC)-mediated anti-infla-mmatory signaling in lung cancer cells.
A subtracted cDNA library of a marine scuticociliate, Philasterides dicentrarchii, in response to 17β-estradiol exposure was constructed using suppression subtractive hybridization (SSH). As a result of SSH, 275 clones were isolated, and among them, only glutathione peroxidase (GPX) gene was isolated as an antioxidative enzyme responding to 17β-estradiol. The semi-quantitative reverse-transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) analysis revealed that the transcription of GPX gene of P. dicentrarchii was clearly increased by exposure to 17β-estradiol. The GPX transcription was also clearly increased by exposure to xenoestrogens such as bisphenol A (BPA) and genistein.
The cDNAs encoding glutathione peroxidase (GPx) were cloned and sequenced from the liver of three Chinese carps with different tolerance to hepatotoxic microcystins, phyto-planktivorous silver carp (Hypophthalmichthys molitrix) and bighead carp (Aristichthys nobilis), and herbivorous grass carp (Ctenopharyngodon idellus). Using genome walker method, a 750 bp 5'-flanking region of the silver carp GPx gene was obtained, and several potential regulatory elements were identified in the promoter region of the GPx gene. The silver carp GPx gene was widely expressed in all tissues examined. Despite phylogenetic analysis, assigning this newly described carp GPx to the group of mammalian GPx2, the carp GPx seems more similar to GPx1 from a physiological point of view. The constitutive expression pattern of the three carp liver GPx gene, shows a positive relationship with their tolerance to microcystins.
정세관은 매우 복잡한 조직으로 마우스의 정자 발생 과정은 12단계로 구성되어 있다. Glutathione peroxidase(GPx)는 glutathione을 이용하여 과산화물(hydroperoxide)을 환원시키는 대표적인 항산화효소로서 포유류 정자 발생 과정에 관여하는 것으로 알려져 있다. 본 연구에서는 laser capture microdissection(LCM)을 이용하여 마우스 정소에서 발생 단계별로 정세관을 채취하여 real-time PCR로 cytosolic GPx(cGPx), gastrointestinal GPx(GI-GPx), plasma GPx(pGPx) 및 phospholipid hydroperoxide GPx(PHGPx)와 같은 GPx family 유전자의 발현 정도를 비교분석하였다. 동결절편(10 ${\mu}m$)은 정상 성숙 마우스의 정소를 사용하였다. LCM 방법으로 정세관의 단면을 I~V, VII~VIII, IX~XI 단계로 구별하여 채취하였다. PHGPx mRNA의 발현은 다른 GPx mRNA보다 정소에서 현저하게 높게 발현되었다. 정자 발생 단계에서 GI-GPx, pGPx 및 PHGPx의 mRNA는 VII~VIII 단계에서 가장 높았고 XI 단계 이후에 감소되었으며, I~V 단계에서 가장 낮은 발현을 보였다. 그러나, cGPx mRNA는 VII~VIII 단계에서 가장 높았고, XI~XI 단계에서 가장 낮은 발현을 보였다. 본 연구 결과, GPx family 유전자는 정자 발생 단계에서 서로 다르게 조절되며, LCM 방법은 정소세포의 정량 분석에서 유용하게 사용될 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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