Cultural method, dark field microscopy & fluorescent antibody technique were compared for their sensitivity of the detection of leptospires from experimentally infected mice. Two groups of mice were infected with L. icterohemorrhagiae (M20) and L. australis (Ballico), and the infected blood, urine and a number of organs were subjected to the bacterial isolation. The results obtained were summarized as follows: 1. L. icterohemorrhagiae (M20) and L. australis (Ballico) in blood, urine and various tissues of experimentally infected mice were detected with a negrigible non specificity, by the fluorescent antibody technique. 2. The fluorescent antibody technique, as applied to detection of leptospires in blood, urine and various infected tissue, proved to be better than cultural method and dark-field microscopy. 3. Early detection of leptospires by fluorescent antibody technique were possible in blood at 2 days after inoculation, whereas detection of organisms in liver, spleen, lung and kidney were observed later. By means of fluorescent antibody technique, the detection of leptospires in kidney and urine was possible up to 34 days postinoculation, whereas those in other parts were impossible. 4. Fluorescent antibody reaction of leptospires were highly specific to homologous antigen rather than to heterologous one. 5. Fluorescent antibody technique may be of value in the application for the demonstration of leptospira from clinical specimens.
The experiment was performed in order to investigate the applicability of the rapid detection of salmonellae in various animal-origin foods by means of the direct fluorescent antibody technique. Egg, sausage and chicken were inoculated with various concentrations of Sal.paratuphi A, Sal. paratyhi B and Sal. thompson, and the fluorescent antibody technique was applied and compared with the conventional cultura method for the sensitivity of detection of the organisms. Two methods were employed in the fluorescent antibody technique; the direct smear method in which the smear being made directly from the specimens, and the enrichment smear method in which the smear being made from the enrichment broth. The effect of various enrichment time (1,5,8,11 and 13 hours) in tetrathionate broth on the detection of salmonellae in the fluoresent antibody technique was also studied. The results obtained were summarized as followings; 1. Of the three methods, the enrichment smear method of fluorescedt antibody technique was highly effective as cultural method for the detection of salmonella organisms. 2. Direct smear method of fluorescent antibody technique was effective as two other methods $5{\times}10^4$ organisms presented in 50 g(ml) of specimens. This method may not be applicable when the specimens contained $5{\times}10^2$ or less organisms. 3. Of the three specimens, the recovery rate of Salmonella organisms from egg was slightly higher than that of sausage and chicken. 4. In fluorescent antibody technique and cultural method, the specimens inoculated with Sal. thompson were found to be higher detection rate than the specimens inoculated with Sal. paratyphi A, 5. The optimum enrichment time of Salmonella organisms in tetrathionate broth on the detection by fluorscent antibody technique was found to be 11 hours or longer when the specimens of egg, sausage and chicken were inoculated with approximately 500 organisms. The longer enrichment time was the higher detection rate up to 11 hours tested.
형광 염료와 레이저 겔스캐너 장비를 이용하여 변성아크릴 아마이드 겔에서 전기 영동된 DNA를 신속하고 간편한 방법으로 기존의 은염색법과 비슷한 감도로 검출하고자 하였다. 변성아크릴아마이드 겔을 형광 염료인 SYBR Green (Molecular Probes)이나 Vistra Green (Amersham Bioscience) 0.01 X 희석액 (pH 8)으로 염색한 후 480nm 레이져, 520nm filer 옵션으로 스캔하여 DNA를 검출하였으며, 검출감도는 기존의 은염색법과 비슷하면서 염색 단계를 한 단계로 줄일 수 있었다.
TSPO, an 18-kDa translocator protein, is a peripheral-type benzodiazepine receptor that has been associated to a variety of biological activities such as apoptosis, steroidogenesis, and cell proliferation. Because TSPO overexpression has been found in various forms of cancer, it has recently become one of the most appealing biological targets for cancer therapies and detection. In order to create new optical imaging agents for improved diagnostics, we synthesized a novel dimeric fluorescent TSPO ligand based on PRB28 structure and SCy5.5. Following the preparation of the novel TSPO ligand, in vivo and ex vivo imaging tests were performed to examine the tumor uptake characteristics of the fluorescent TSPO ligand in a glioma animal model, and it was found that novel TSPO ligand was accumulated in glioma. These results suggested that novel dimeric fluorescent TSPO ligand will be applied to detect glioma.
The Prostaglandins were derivatized rapidly with monodansyl cadaverine as a fluorophore in mild conditions. The carboxylic moiety of prostaglandins was activated with diethyl phosphorocyanidate and successively coupled with fluorophore in dimethylformamide at room temperature. The labeling yield was reached about 95% at 15 min using arachidic acid $(C_{20:0})$ as a test sample. This derivative showed constant fluorescent intensity at $4^{\circ}C$ for 180 days. The derivatives of prostaglandins were shown high solvent selectivity with tetrahydrofuran in reversed-phase column. therefore, these derivatives could be successfully separated on YMC pack A-212(S-5 120A C8) column in tetrahydrofuran-based eluents. The detection limits of these derivatives was ca. 500 fmol and determination limits was ca. 5 pmol as injected amount in fluorescent detection $({\lambda}ex.\;340\;nm,\;{\lambda}em.\;520\;nm)$. In this method, the ranges of recovery and coefficient of variation were $93.6{\sim}102.7%$ and $4.3{\sim}5.8%$, respectively.
In this work, a green and simple one-pot route was developed for the synthesis of highly fluorescent aminofunctionalized graphene quantum dots (a-GQDs) via hydrothermal process without any further modification or surface passivation. We synthesized the a-GQDs using glucose as the carbon source and ammonium as a functionalizing agent without the use of a strong acid, oxidant, or other toxic chemical reagent. The as-obtained aGQDs have a uniform size of 3-4 nm, high contents of amino groups, and show a bright green emission with high quantum yield of 32.8%. Furthermore, the a-GQDs show effective fluorescence quenching for $Cu^{2+}$ ions which can serve as effective fluorescent probe for the detection of $Cu^{2+}$. The fluorescent probe using the obtained aGQDs exhibits high sensitivity and selectivity toward $Cu^{2+}$ with the limit of detection as low as 5.6 nM. The mechanism of the $Cu^{2+}$ induced fluorescence quenching of a-GQDs can be attributed to the electron transfer by the formation of metal complex between $Cu^{2+}$ and the amino groups on the surface of a-GQDs. These results suggest great potential for the simple and green synthesis of functionalized GQDs and a practical sensing platform for $Cu^{2+}$ detection in environmental and biological applications.
Indocyanine green(ICG) and 5-aminolevulinic acid(5-ALA) have been widely used to mark blood vessels or tumors. However, fluorescent dye detection systems were designed to use one type of dyes only. In this study, we proposed a detection system capable of detecting Indocyanine green and 5-aminolevulinic acid. Multiple filters and light sources are integrated into a single system. In this study, we performed analysis of fluorescent dyes and configured a detection system. During the analysis, it was found that Indocyanine green and 5-aminolevulinic acid have the maximum intensity at $40{\mu}M$. We designed light source for fluorescent dyes and conducted compatibility test using a commercial surgical microscope. The fluorescent dye detection system was configured based on the experimental results. The developed system successfully detects Indocyanine green and 5-aminolevulinic acid. Therefore, more efficient surgical operations can be achieved using both fluorescent dyes at the same time. We expect that the developed system can increase the survival rate of patients.
A chemosensor based on a rhodamine-hydroxamate platform containing a pyridine and a cyclen binding units has been developed for the detection of $Cd^{2+}$ in aqueous solutions. The probe responds selectively toward $Cd^{2+}$ over other biologically relevant metal ions. The fluorescent probe shows 1:1 binding stoichiometry and the detection limit for $Cd^{2+}$ in water proved to be as low as 25 nM.
Polydiacetylenes (PDAs) are very attractive chemical substances which have distinctive features of color change and fluorescence emission by thermal or chemical stress. Especially, when PDAs contact with solutions of a particular pH, such as a strong alkaline sodium hydroxide (NaOH) solution or a strong acidic hydrogen chloride (HCl) solution, PDAs change their color from non-fluorescent blue to fluorescent red. In this study, we propose a novel method to detect alkaline pH using PDAs and NaOH solutions by hydrodynamic focusing on a microfluidic chip. Preliminary results indicate that the fluorescent intensity of PDAs increases in respond to the NaOH solution concentrations. Also, the fluorescence is quenched back when the PDAs are in contact with a HCl solution. These results are useful in a microfluidic PDA sensor chip design for pH detection.
In this study, we carried out the rapid diagnostic system based on indirect fluorescent anti-body technique (IFAT) for detection of bacterial diseases in cultured freshwater fishes. 1. When the fishes were tested with graded dilution of Edwardsiella tarda FPC 470 bacteria detection from ten fishes Injected with $4.1{\times}10^3$colony forming unit(CFU) /ml, all of them were detected by IFAT but only two fishes were recognizable by the culture method in the tested fishes injected with $4.1{\times}10^3$CFU /ml. 2. The bacteria E. tarda could be detected by IFAT method from 1 to 48hrs after Injection in the tissues tested such as kidney, liver and spleen of the fishes, whereas detection by culture method could be recognized from 1 to 48hrs after injection In the kidney and spleen but it was not possible from preinjection to 1 hr in the liver. 3. Thus, IFAT proved to be more useful technique than plate culture method in the diagnosis of Edwardsiellosis in the freshwater fishes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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