Objective : Alcoholic liver disease (ALD) is caused by excess alcohol intake. In the liver, alcohol breakdown results formation of toxic byproducts that lead to damage to tissue. This study is to investigate the therapeutic effects of Paeoniae Radix Alba and Puerariae Radix combination (PP) on ALD. Methods : PP was analyzed for polyphenolic compounds and free radical scavenging activity. ALD mouse model was induced by feeding ethanol and water (Control), silymarin (50 mg/kg), low-dose (PP: 100 mg/kg) or high-dose (PP: 200 mg/kg) was orally administrated to ALD mice for 14 days. The serum was assessed with levels of AST, ALT, total bilirubin, total cholesterol, and triglyceride. Liver tissues were evaluated for ROS levels, degree of liver damage and protein expression. Results : The 3:1 (Paeoniae Radix Alba:Puerariae Radix) ratio showed the best antioxidant values for the experiment. In ALD model, levels of AST, ALT, total bilirubin, total cholesterol, and triglyceride were significantly increased in the Control and the levels were decreased by treatment of PP. In addition, increased ROS, ONOO- and MDA levels in the Control were reduced in the PP groups. Western blot analysis figured out that proteins related to ROS and cholesterol metabolism were higher in ALD than in PP-treated ALD. Antioxidant enzyme expression was low in the control group and increased by PP treatment. Conclusion : Our results suggest that PP has the potential to be a medicine in ALD in terms of regulating oxidative stress and adjusting lipid metabolism.
Alcohol consumption increases the risk of type 2 diabetes. However, its effects on prediabetes or early diabetes have not been studied. We investigated endoplasmic reticulum (ER) stress in the pancreas and liver resulting from chronic alcohol consumption in the prediabetes and early stages of diabetes. We separated Otsuka Long-Evans Tokushima Fatty (OLETF) rats, a type-2 diabetic animal model, into two groups based on diabetic stage: prediabetes and early diabetes were defined as occurrence between the ages of 11 to 16 weeks and 17 to 22 weeks, respectively. The experimental group received an ethanol-containing liquid diet for 6 weeks. An intraperitoneal glucose tolerance test was conducted after 16 and 22 weeks for the prediabetic and early diabetes groups, respectively. There were no significant differences in body weight between the control and ethanol groups. Fasting and 120-min glucose levels were lower and higher, respectively, in the ethanol group than in the control group. In prediabetes rats, alcohol induced significant expression of ER stress markers in the pancreas; however, alcohol did not affect the liver. In early diabetes rats, alcohol significantly increased most ER stress-marker levels in both the pancreas and liver. These results indicate that chronic alcohol consumption increased the risk of diabetes in prediabetic and early diabetic OLETF rats; the pancreas was more susceptible to damage than was the liver in the early diabetic stages, and the adaptive and proapoptotic pathway of ER stress may play key roles in the development and progression of diabetes affected by chronic alcohol ingestion.
Carbon tetrachloride $(CCl_4)-induced$ liver injury depends on a toxic agent that has to be metabolized by the liver NAPDH-cytochrome P450 enzyme system to a highly reactive intermediate. Although several isoforms of cytochrome P450 may metabolize $CC1_4$, attention has been focused largely on the cytochrome P450 2E1 (CYP2E1), which is ethanol-inducible. Alternations in the activity of CYP2E1 affect the susceptibility to hepatic injury from $CC1_4$. In this study, the liver protective effect of the hot water extracts of Scutellaria radix (SR) was investigated. The SR exhibited a hepatoprotective activity against $CCl_4-induced$ liver damage in Chang liver cells. The expression of CYP2E1, measured by RT-PCR and Western blot analysis, was significantly decreased by SR treatment in Chang cells. Based on these findings, it is suggested that hepatoprotective effect of SR possibly related to downregulation of CYP2E1 expression.
본 연구는 에탄올을 급여하는 동안 일어나는 지질과산화에 의한 간 손상과 이에 대하여 $\beta$-carotene, retinyl acetate, 13-cis-retinoic acid의 효과를 비교ㆍ검토하고자 실시되었다. 혈 장내 MDA 함량은 에탄올 급여군 중 비타민 A를 결핍시킨 FE군과 $\beta$-carotene을 공급한 DE군에서는 감소되지 않았으나, retinyl acetate와 13-cis-retinoic acid 공급시킨 RE군과 RAE군에서 감소되었다. 간 미토콘드리아내 MDA함량은 에탄을 급여군 중 FE군과 $\beta$E군에서 높은 함량을 보인데 반해 RE군과 RAE군에서는 낮은 수준을 보였다. 에탄올 비급여군인 pair-fed군중에서는 비타민 A를 결핍시킨 FP 군에 비해 $\beta$-carotene과 retinyl acetate를 각각 공급한 5P와 RP군의 MDA 함량은 감소하였는데 반해 retinoic acid를 공급한 RAP군의 MPA 수준은 차이를 보이지 않았다. 혈장내 AP 활성도는 에탄올과 함께 $\beta$-carotene과 retinoic acid를 공급시킨 군에서 각각의 pair-fed군에 비하여 높은 활성도를 보였으며 간 마이크로솜내 G6P 활성도는 에탄올 급여군 중 비타민 A 결핍군만 pair-fed군에 비해 유의적으로 감소되었으며 비타민 A를 보충시켰을 때에는 활성도가 증가되었다. 간 사이토졸내 SOD 활성도는 에탄을 급여와 함께 비타민 A를 결핍시킨 군에 비해 13-ciz-retinoic acid을 공급시킨 군이 가장 높았으며 Pair-fed 군 중에서는 retiny acetate 공급군에서 가장 낮은 높은 활성도를 보였다. 간 사이토졸내 GSH-Px 활성도는 에탄올 급여군과 pair-fed 군 사이에 일정한 경향은 없었으며 간 사이토졸네 GST 활성도는 에탄올 급여군 중 $\beta$-carotene과 retinyl acetate 공급군이 각각의 pair-fed군에 비해 증가되었다. 간조직내 $\beta$-carotene함량은 $\beta$-carotene, 공급군에서만 검출되었고 에탄을 급여군이 pair-fed군에 비해 6배정도 높은 함량을 보였으며 혈장과 간조직 내 retinol 함량은 에탄올 급여로 낮은 함량을 보였으나 비타민 A형태 중 retinyl acetate 공급군이 가장 높았다. 간조직 내 retinoic acid 함량은 에탄을 급여군 중 $\beta$-carotene과 retinyl acetate 공급군이 각각의 Pair-fed 군에 비해 유의적인 감소를 보였다. 상기 연구 결과를 보면 에탄올 급여로 지질과 산화물 함량이 증가되고 관련 항산화 효소계의 활성도 변화로 보아 간 손상에 지질과산화 반응이 관여된 것으로 보여 지며 에탄올의 영향에 대한 비타민 A의 효과에는 retiny1 acetate가 항산화제로 작용하여 간조직의 급격한 손상을 효율적으로 경감시킬 수 있는 것으로 나타났다.
본 연구에서는 참나물의 항산화효과를 구명하기 위하여, in vitro에서 Rancimat에 의한 항산화력 측정과 in vivo에서 Sprague Dawley 종 수컷에게 만성적으로 알코올 과량 섭취로 유도된 간조직의 산화적 스트레스가 참나물을 처리함으로써 간조직의 항산화 체계에 어떠한 영향을 미치는지를 비교 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 실험군은 정상군(NOR), 대조군(CON, 35% 알코올 10 ml/kg of b.w./day), 참나물 에탄올 추출물 단독투여군(P1), 알코올과 참나물 에탄올 추출물 저용량(200 mg/kg of b.w./day) 병합투여군(P2) 및 알코올과 참나물 에탄올 추출물 고용량(400 mg/kg of b.w./day) 병합투여군(P2)의 5군으로 나누어 6주간 사육하였다. In vitro 연구 결과는 참나물 에탄올 추출물을 계통 분획하여 Rancimat에 의한 항산화지수를 측정하였는데, 분획 중 n-hexane의 항산화력이 가장 우수하였으며, 합성항산화제인 BHT와 항산화력이 비슷하였다. In vivo에서 항산화 효과를 측정한 결과는 정상식이만을 급여한 정상군과 정상식이와 참나물 에탄올 추출물을 단독투여 한 P1군간에는 유의차가 없었으나, 알코올을 투여한 군(대조군, P2 및 P3)들 간에는 유의차를 보였으며 특히, 고용량 병합투여 시 항산화 효과가 높게 나타났다. 즉 만성 알코올 투여로 감소되어진 체중과 식이섭취량은 참나물 에탄올 추출물 병합투여로 정상식이군 수준으로 회복시켰다. 또한 참나물 에탄올 추출물 병합투여 시 알코올 투여로 증가된 간조직의 유리기 해독계 효소인 XO, catalase 및 GSH-Px 활성 억제와 항산화작용을 나타내는 GSH 함량을 증가시킴으로서 지질과산화물에 대한 방어력이 증가되었다. 이상의 결과 알코올과 참나물 에탄올 추출물을 병행 투여함으로서 항산화 효소 체계가 향상되었으며, 참나물 에탄올 추출물은 알코올 섭취로 유도된 산화적 스트레스와 알코올성 독성으로부터 간을 보호하는 항산화효과가 있는 것으로 추정된다.
Increased consumption of fresh vegetables that are high in polyphenols has been associated with a reduced risk of oxidative stress-induced disease. The present study aimed to evaluate the antioxidant effects of spinach in vitro and in vivo in hyperlipidemic rats. For measurement of in vitro antioxidant activity, spinach was subjected to hot water extraction (WE) or ethanol extraction (EE) and examined for total polyphenol content (TPC), oxygen radical absorbance capacity (ORAC), cellular antioxidant activity (CAA), and antigenotoxic activity. The in vivo antioxidant activity of spinach was assessed using blood and liver lipid profiles and antioxidant status in rats fed a high fat-cholesterol diet (HFCD) for 6 weeks. The TPC of WE and EE were shown as $1.5{\pm}0.0$ and $0.5{\pm}0.0mg$ GAE/g, respectively. Increasing the concentration of the extracts resulted in increased ORAC value, CAA, and antigenotoxic activity for all extracts tested. HFCD-fed rats displayed hyperlipidemia and increased oxidative stress, as indicated by a significant rise in blood and liver lipid profiles, an increase in plasma conjugated diene concentration, an increase in liver thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) level, and a significant decrease in manganese superoxide dismutase (Mn-SOD) activity compared with rats fed normal diet. However, administration of 5% spinach showed a beneficial effect in HFCD rats, as indicated by decreased liver TBARS level and DNA damage in leukocyte and increased plasma conjugated dienes and Mn-SOD activity. Thus, the antioxidant activity of spinach may be an effective way to ameliorate high fat and cholesterol diet-induced oxidative stress.
This study aimed to investigate the hepatoprotective activities of the sea cucumber products, including extracts and hydrolysates, in vitro and in vivo. Dried sea cucumber, produced on the western coast of Korea, was boiled in water or 70% ethanol at 85℃ or 100℃ for 18 or 24 h, respectively, to extract bioactive compounds. The enzymatic hydrolysates were prepared by reacting the dried sea cucumber with pepsin or neutral protease (PNL) under optimal enzyme conditions. The anti-inflammatory effect of the samples was investigated using RAW 264.7 cells treated with lipopolysaccharide (LPS). The amount of nitric oxide (NO) was produced from the cells treated with LPS and each sample was compared. Therefore, the pepsin hydrolysate treatment decreased NO production compared to LPS sole treatment. Furthermore, the effects of the samples on cell injury in the hepatic cell line and bisphenolA-induced hepatic injury mouse model were investigated. The water extracts and the pepsin hydrolysates of sea cucumber significantly inhibited cell injury generated in the hepatocytes without cytotoxicity (p < 0.05), whereas the ethanol extracts were cytotoxic. However, these results indicate that the extracts and the enzymatic hydrolysates derived from sea cucumber can be used as beneficial materials for inhibiting liver damage.
본 연구에서는 헛개나무열매를 주성분으로 제조한 두 종류의 혼합물들(NHDT-1과 NHDT-2)이 알코올 및 아세트알데히드의 분해를 촉진시켜 숙취의 발생을 저하시킬 수 있는지 여부와 만성적으로 알코올을 복용시켰을 때 간손상 및 지방간의 발생을 억제할 수 있는지 여부를 조사하였다. NHDT-1은 헛개나무열매에 진피, 창출 및 감초를 첨가하여 제조하였고, NHDT-2는 NHDT-1에 홍삼을 첨가하여 제조하였다. NHDT-1과 NHDT-2의 조성 차이는 홍삼임에도 불구하고 백서에게 투여하였을 때 알코올 및 아세트알데히드의 분해와 간손상을 억제하는 작용에는 차이가 있었다. 홍삼이 함유되어있지 않은 NHDT-1은 급성 알코올 실험에서 알코올 및 아세트알데히드 분해를 촉진시켜 혈청농도를 저하시켰으나, 홍삼이 함유된 NHDT-2는 혈청 알코올과 아세트알데히드 농도를 저하시키지 못했다. 급성실험과는 반대로 장기간 알코올을 투여한 실험에서는 NHDT-1은 NHDT-2에 비해 알코올로 인한 간의 손상과 지방간 발생을 억제하지 못했다. 결론적으로 간기능이 좋은 상태에서 일시적으로 복용하는 경우에는 NHDT-1이 알코올과 아세트알데히드의 분해를 촉진하여 숙취해소에 효과적이지만, 간이 좋지 않은 상태에서는 장기간동안 NHDT-2를 복용하여 간의 기능을 향상시키는 것이 음주 후 숙취제거에 효과적일 것으로 사료된다.
본 연구는 다슬기의 간 보호 효능을 확인하고자 하였다. 다슬기를 단백질 가수분해효소인 alcalase를 이용하여 가수분해물을 얻은 후 실험을 수행하였다. HepG2 세포에 다슬기 가수분해물을 처리하였을 때 세포독성이 나타나지 않음을 확인하였다. 그리고 다슬기 가수분해물과 에탄올(1 M)을 가하여 24시간 후 세포생존율을 확인했을 때, 세포가 알코올 독성으로부터 보호되는 것을 확인할 수 있었다. 다음으로 다슬기 가수분해물의 간 손상 보호 효과를 Liber-DeCarli 알코올 액체 식이 급여와 동시에 경구 투여를 통한 알코올 단회 폭음(single binge)으로 알코올성 지방간과 염증을 유발시킨 마우스모델(NIAAA)을 사용하여 확인하고자 하였다. 이들 마우스 모델에서 알코올 식이 급여 후 초기에 체중이 감소하는 경향을 보이나 점차 비알코올 식이 급여군과 유사한 체중으로 회복하였다. 조직학적 관찰에서 알코올로 유도된 간 세포내 지방 축적과 지방성 염증이 에탄올과 함께 다슬기 가수분해물을 투여한 군에서 개선되는 것을 관찰 할 수 있었다. 또한, 알코올 투여에 의한 AST, ALT 및 ALP의 효소활성 증가가 다슬기 가수분해물 처리에 의해 억제되었으며, 만성 알코올 섭취에 의한 염증 매개 효소와 염증성 사인토카인의 발현 증가는 다슬기 가수분해물을 투여한 군에서 양성대조군에 비하여 유의하게 감소하였다. 이상의 연구결과를 종합해 보면 다슬기 효소 가수분해물 소재는 알코올성 지방간의 예방 및 개선을 위한 기능성식품용 상업적 소재로서 높은 실용화 가능성을 시사한다.
Objectives : The aim of this study is to investigate the inhibitory effect of Chungganhaeju-Tang on alcohol induced human hepatic cell apoptosis by synthesis of glutathione. Methods : The amount of glutathione in HepG2 cell was measured with colorimetric glutathione assay kit and glutathione-conjugated CDNB(1-chloro-2,4-dinitrobenzene) at $37^{\circ}C$ and then measured by spectrometry to assess the activity of glutathione S-transferase. Results : The synthesis of glutathione and the activity of glutathione S-transferase in HepG2 cell were promoted by Chungganhaeju-Tang and increased in dose/time-dependent manner. Chungganhaeju-Tang inhibited apoptosis induced by ethanol and acetaldehyde dependent to treatment dosage. In Buthione sulfoximine, a glutathione synthesis inhibitor, treated case, the synthesis of glutathione was inhibited and in Chungganhaeju-Tang treated case, the synthesis of glutathione is promoted with or without Buthione sulfoximine. The present findings suggest that Chungganhaeju-Tang inhibits alcohol induced apoptosis by synthesis of glutathione in HepG2 cell. Conclusions : The result indicates that Chungganhaeju-Tang protects human hepatic cell by glutathione synthesis and made the liver recover from alcohol induced damage.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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