Ko, Jin-A;Ryu, Young Bae;Park, Tae-Soon;Jeong, Hyung Jae;Kim, Jang-Hoon;Park, Su-Jin;Kim, Joong-Su;Kim, Doman;Kim, Young-Min;Lee, Woo Song
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제22권9호
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pp.1224-1229
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2012
Puerarin (P), an isoflavone derived from kudzu roots, has strong biological activities, but its bioavailability is often limited by its low water solubility. To increase its solubility, P was glucosylated by three dextransucrases from Leuconostoc or Streptococcus species. Leuconostoc lactis EG001 dextransucrase exhibited the highest productivity of puerarin glucosides (P-Gs) among the three tested enzymes, and it primarily produced two P-Gs with a 53% yield. Their structures were identified as ${\alpha}$-$_D$-glucosyl-($1{\rightarrow}6$)-P (P-G) by using LC-MS or $^1H$- or $^{13}C$-NMR spectroscopies and ${\alpha}$-$_D$-isomaltosyl-($1{\rightarrow}6$)-P (P-IG2) by using specific enzymatic hydrolysis, and their solubilities were 15- and 202-fold higher than that of P, respectively. P-G and P-IG2 are easily applicable in the food and pharmaceutical industries as alternative functional materials.
A recombinant putative dextransucrase (DexT) was produced from Leuconostoc citreum KM20 as a 160 kDa protein, but its productivity was very low (264 U/l). For optimization, we examined enzyme activity in 7 Escherichia coli strains with inducer molecules such as lactose or IPTG. E. coli BL21-CodonPlus(DE3)-RIL exhibited the highest enzyme activity with lactose. Finally, DexT activity was remarkably increased by 12-fold under the optimized culture conditions of a cell density to start induction ($OD_{600}$) of 0.95, a lactose concentration of 7.5 mM, and an induction temperature of $17^{\circ}C$. These results may effectively apply to the heterologous expression of other large DexT genes.
효소반응과 부분 산가수분해 결과를 해석하여 Leuconostoc mesenteriodes M-12 덱스트란수크라제 억셉터 반응 산물인 새로운 분지올리고당의 구조를 확인하였다. 분지올리고당 B4의 구조는 62-O-$\alpha$-D-kojibiosylmaltose인 것으로 확인되었으며, 분지올리고당 B5의 구조는 63-O-$\alpha$-D-kojibiosylpanose였다. 억셉터 반응산물을 덱스트라나제로 분해한 결과 새로운 올리고당인 D4를 확인할 수 있었다. 억셉터 반응산물을 억셉터로 이용한 두 번째 억셉터 반응의 생성물을 덱스트라나제 처리하여 D4를 얻었는데 덱스트라나제와 글\ulcorner아밀라제에 의해 분해되지 않았다. 그 구조는 62-O-$\alpha$-D-kojibiosylisomaltose로 확인되었다. 직선상 또는 분지 결합을 가진 d.p. 6 이하의 억셉터 반응산물의 생성 패턴도 확인하였다.
가자미 식해에서 분리한 Leuconostoc mesenteroides(Sikhae)로부터 생산한 dextransucrase 조효소액에 10 sucrose를 반응시켜 얻은 dextran 생성액의 유변성과 생성된 dextran의 분자량 분포 및 수율을 반응시간별로 조사하였다. Dextran 생성속도는 반응액의 HPLC를 이용한 당분석과 점도측정으로 추정이 가능하였다. Periodate oxidation 시험결과 정제된 dextran은 89의 Alpha-(1-6) 결합외에 11의 Alpha-(1-3) 부결합이 존재하는 것으로 판단되며, 반응시간이 경과함에 따라 dextran 생성액은 높은 항복력을 갖는 Bingham-pseudoplastic 유체특성을 나타내었다. 반응시간이 결과함에 따라 시간의존 특성(thixothropicity)이 증가하였는데 이러한 현상은 GPC 분석을 통하여 dextran 생성액내 고분자 dextran의 비율증가에 의한 것임을 알 수 있었다. Dextran 생성액은 반응 8시간후에 최고점도 (2680 cP. $\gamma$=$33.75s^{-1}$, $25^{\circ}C$)를 나타내었으며, 그 이후부터 점도는 다시 감소하였다. 또한 dextran 생성액은 온도가 증가함에 따라 점도가 감소하였으며, 이는 Arrhenius의 일반식으로 표시할 수 있었다. Arrhenius 식으로 구한 dextran 생성액의 유동 활성화에너지는 반응시간이 경과함에 따라 증가하였으며, 8시간 반응시킨 dextran 생성액의 경우 1.69kcal/gmole 정도로써 온도증가에 의한 점도변화가 비교적 적음알 수 있었다.
Maltosyl(G2)-erythritol, produced by the transglycosylation reaction of erythritol with maltotriose by Bacillus stearothermophilus maltogenic amylase, was not utilized either as a substrate for lactic acid production or for water-insoluble glucan synthesis. An inhibition assay of dextransucrase and mutansucrase showed that the dental caries suppression effect of G2-erythritol was greater than that of erythritol.
Seo, Dong-Mi;Kim, So-Young;Eom, Hyun-Ju;Han, Nam-Soo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제17권11호
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pp.1758-1764
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2007
Synthesis of oligosaccharides during milk fermentation was attempted by inoculating Leuconostoc citreum with Lactobacillus casei, Lb. delbrueckii subsp. bulgaricus, and Streptococcus thermophilus as starters. Dextransucrase of Ln. citreum worked as a catalyst for the transglycosylation reaction of sugars; sucrose was added as the glucose donor, and lactose or maltose acted as the acceptor compound for the reaction. When 4% sucrose was added in milk, glucosyl-lactose was synthesized (about 1%, w/v) after 1-2 days of fermentation at 15 or $25^{\circ}C$. Alternatively, when sucrose and maltose (2% each, w/v) were added, panose (about 1 %, w/v) and other isomaltooligosaccharides were made in a day at $15-35^{\circ}C$. Growth patterns of lactobacilli and streptococci starters were not affected by the coculture of leuconostoc starter, but the rate of acid synthesis was slightly slowed at every temperature. Addition of sugars in milk did not give any adverse effect on the lactate fermentation. Accordingly, the use of leuconostoc starter and addition of sugars in milk allowed the production of oligosaccharides-containing fermented milk, and application of this method will facilitate the extensive development of synbiotic lactate foods.
A multiplex competitive polymerase chain reaction (PCR) method was developed for the rapid identification and quantification of Leuconostoc mesnteroides and Lactobacillus plantarum populations which are the key microorganisms in kimchi fermentation. The strain-specific primers were designed to selectively amplify the target genes encoding 165 rRNA of L. plantarum and dextransucrase of L. mesenteroides. There was a linear relationship between the band intensity of PCR products and the number of colony forming units of each model organism. The PCR quantification method was compared with a traditional plate-counting method f3r the enumeration of the two lactic acid bacteria in a mixed suspension culture and also applied to a real food system, namely, watery kimchi. The population dynamics of the two model organisms in the mixed culture were reliably predictable by the competitive PCR analysis.
26균주의 젖산균을 증편 반죽에서 분리하여 dextransucrase 활성을 측정할 결과 T. halophilus 1-12가 36.95 DSU/mg으로 가장 높았다. 이 중 Leu. mesenteroides subsp mesenteroides 2-9, T. halophilus 1-12, Leu. mesenteroides subsp dextranicum 5-13을 선별하여 starter로 이용하였다. 증편의 점도변화를 관찰한 결과 Leu. mesenteroides subsp mesenteroides 2-9를 첨가한 증편은 발효 적기인 2시간째에 첨가량이 많을수록 점도가 높아졌고 T. halophilus 1-12를 첨가한 증편의 경우는 첨가량에 따라 차이 없이 증편의 점도가 증가하였다. Leu. mesenteroides subsp dextranicum 5-13를 첨가한 증편 반죽의 경우에는 첨가량에 차이 없이 starter 균을 첨가하지 않은 증편 반죽의 발효패턴과 같은 점도 변화를 보였다. 증편반죽의 pH는 Leu. mesenteroides subsp mesenteroides 2-9 와 T. halophilus 1-12를 첨가한 경우 첨가량이 증가할수록 초기 pH도 낮았으며 발효가 진행되면서 계속 감소되는 경향을 보였다. 그러나 Leu. mesenteroides subsp dextranicum 5-13의 경우에는 첨가량에 따른 유의적인 차이가 없이 발효가 진행되면서 감소하는 패턴을 보였다. 증편의 비체적은 Leu. mesenteroides subsp dextranicum 5-13 1.0% 첨가한 군이 2.00으로 가장 높았고, T. halophilus 1-12를 1.0% 첨가한 군이 0.33으로 가장 낮았다. 증편의 단면을 관찰한 결과 Leu. mesenteroides subsp mesenteroides 2-9를 0.5 % 첨가한 것이 균일하였고, T. halophilus 1-12는 첨가량이 많을수록 기공이 거칠고 불규칙하였다. 반면 Leu. mesenteroides subsp dextranicum 5-13를 첨가한 군은 첨가량이 많을수록 기공이 균일하고 부피가 증가한 것을 볼 수 있었다. Texture는 Leu. mesenteroides subsp dextranicum 5-13를 0.5%, 1.0% 첨가한 증편이 hardnesubsp과 gumminesubsp, chewinesubsp가 대조군에 비해 매우 유의적으로 감소하였다. 관능검사를 실시한 결과 Leu. mesenteroides subsp dextranicum 5-13 0.5%를 첨가한 시료가 전체적인 기호도에서 8.500을 받아 매우 우수한 것으로 나타났다.
5%(w/v)의 설탕과 2.5%(w/v)의 녹말로 구성된 혼합기질용액을 1.5 mL/min으로 공급하였을 때 dextransucrase와 $\alpha$-amylase의 혼합효소를 함께 고정화한 비드를 이용한 방법이 두 효소를 띠로 고정화한 비드를 혼합한 방법보다 올리고당 수율이 충전형 반응기에서는 12%, 교반형 반응기에서는 11% 높았다. 혼합효소를 함께 고정화한 비드를 200시간 이상 사용하였을 경우 교반식 반응기에서는 파괴되었으나, 충전형 반응기에서는 안전하였다. 따라서 올리고당을 연속적으로 생산하는데는 충전형 반응기가 더 적합하였다. 충치균인 S. mutans를 새로운 구조의 올리고당이 함유된 배치에서 배양하였을 때 pH가 5이하로 떨어지지 않았다. 식중독균인 S. aureus를 새로운 구조의 올리고당이 첨가된 배치에서 배양한 결과, glucose와 설탕이 첨가된 배치보다 균 성장정도가 현저히 떨어졌다.
Streptococcus mutans에 의한 sucrose로 부터 축적된 polysaccharide를 조사한 결과 1 균주이 따라 36시간 후 4.41mg/ml로 부터 1.86mg/ml사이의 polysaccharide가 축적되고 2 효소에 의해서도 10시간 후 2.36mg/ml에서 1.4mg/ml의 polysaccharide가 생성되고 3 생성된 polysaccharide는 통일형의 polysaccharide였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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