크기 분포를 가진 금 나노 입자 콜로이드의 소광 스펙트럼을 미 이론으로 계산하고 실험과 비교하였다. 입자 크기 분포를 고려한 계산이 크기 분포를 고려하지 않은 계산보다 실험과 더 가까움을 확인하였다. 최소 자승법을 이용하여 실험에서 얻은 소광 스펙트럼으로부터 입자 크기 분포를 이론적으로 도출하였다. 이렇게 얻은 입자 크기는 입자 지름이 10에서 28 나노미터인 경우 투과전자현미경 분석 결과와 잘 일치하였다.
We have investigated the effects of formalin on the assembly of colloidal gold nanoparticles (AuNPs) prepared by laser ablation of a solid gold target in deionized water. Upon addition of formalin, the surface plasmon resonance (SPR) band at 519 nm for pure AuNPs decreases and shifts to red while a new broad SPR band appears at ~700 nm. The red-shift is prominent with increase in the incubation time. The average size of the initial AuNPs is around 12 nm but it increases to 23 nm after addition of formalin. It turns out that formalin acts as a cationic surfactant for AuNPs with negative surface charge in the colloidal solutions. Furthermore, through analysis of the Raman spectrum of formalin and the density functional theory calculations, we confirm that methanediol is the main species in formalin which is in charge of the aggregation of AuNPs.
An immunochromatographic (IC) strip for the rapid detection of Salmonella spp. in the enriched sample was developed. Affinity purified Salmonella polyclonal antibody was conjugated with 40 nm colloidal gold particles which were prepared by citrate method in our laboratory. The antigen-antibody-gold complex was captured by Salmonella antibody attached to test line of nitrocellulose membrane during the capillary migration of sample. Specificity of the IC strip was calculated to be 100% (12/12) and sensitivity was 97.6% (41/42) in the test with pure cultured bacteria. Salmonella was artificially inoculated into raw pork macerated with enrichment broth. And then it was 10-fold diluted from $5.2{\times}10^{8}CFU/ml$ to 5.2 CFU/ml. The IC strip could detect $5.2{\times}10^{6}CFU/ml$ before enrichment. However, the lowest limit of detection was 5.2 CFU/ml after overnight incubation. The results indicated that the IC assay was a rapid, economical and simple method with high specificity and sensitivity for the detection of Salmonella spp. without using any equipment.
곤충 혈구의 이물질에 대해 면릉고청을 확인하기 위하여 평균지름 10 nm의 gold입자를 함유한 colloidal gold solution을 등 검은 메뚜기 (Euprepocnemis shirakii Bolivar) 성충의 복강에 주입한 후, 혈구의 반응양상을 전자현미경으로 관찰하였다. Gold 입자에 대한 혈구의 면역반응은 전체 혈구의 약 28%를 차지하고 있는 Plasmatocytes에서 식세포작용(phagocytosis)의 형태로 확인되었고, 다른 종류의 혈구는 반응하지 않았다. Plasmatocytes에 의해 식세포작용의 초기반음은 많은 원형질 돌기를 형성하여 이물질을 포획하는 태면반응과 원형질악의 함입에 의한 식포의 형성과정으로서, 이 과정은 이물질 주입후 10분이내에 완료되는 것으로 관찰되었다. 혈구내에 형성된 식포는 초기에 전자밀도가 낮은, 천상 또는 섬잡상의 내부구조를 가지고 있었으나, 일차 Iysosome의 융합에 의해 전자밀도가 높은 과립상으로 된 후, 결정상의 내부구조로 변형되었으며, 그 이후의 단계에서 multivesicular body형태의 이차 Iysosome을 형성하였다.
본 연구에서는 L. monocytogenes를 신속하게 분석할 수 있는 면역크로마토그래피법을 개발하고자 하였다. 먼저 L. monocytogenes에 대한 단크론성 항체(FKLM-3B12-37)를 개발하여 직경 40nm로 제작된 colloidal gold와 합성한 후 conjugate pad에 처리하였고 nitrocellulose membrane 상의 test line과 control line에 단크론성 항체와 anti-mouse IgG를 각각 처리하여 면역크로마토그래피법을 개발하였다. 개발된 면역크로마토그래피법의 검출한계는 $10^{5}$ cell/mL 수준까지 검출이 가능했으며 다른 식중독 세균과는 교차 반응이 없는 것으로 나타났다. 임으로 오염시킨 식품시료의 경우 증균과정 없이 $10^{4}$ cell/25g까지 바로 분석하는데 어려움이 있으며 24시간의 증균과정을 거친 후에는 $10^{4}$ cell/25g까지 검출할 수 있었다. 본 연구에서 개발된 면역크로마토그래피법은 24시간의 증균 만으로 식품에 오염되어있는 L. monocytogenes를 검출할 수 있는 것으로 사료되었고, 기존의 식중독균 진단방법에 비해 신속하고 간편하게 그 결과를 확인할 수 있었다.
Transactions on Electrical and Electronic Materials
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제10권3호
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pp.85-88
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2009
This report demonstrates the immobilization of uniformly sized gold nanoparticles (AuNPs) on UV cross-linked poly(4-vinylpyridine) (P4VP) polymer thin films and the preparation of micropatterned structures of AuNPs on these films. The polymer thin films were prepared by a spin-coating of P4VP onto a cleaned silicon wafer surface. Upon UV irradiation, these films were then photo cross-linked. Gold nanoparticles were immobilized by immersing the polymer surface in a colloidal solution of gold nanoparticles stabilized by citric acid. The morphology of the films and the immobilization of AuNPs were studied by atomic force microscopy (AFM) and UV-visible spectroscopic techniques. The micropatterned gold structures that were produced on the polymer surface are delineated by combining with the photolithographic method. While untreated and simply spin coated films were physisorbed and unstable that could be easily removed by rinsing with a solvent, the cross-linked and AuNPs immobilized P4VP films were found to be highly stable even after repeated solvent extractions.
We developed the one-step strip based on an immunochromatographic (IC) assay for the rapid detection of Listeria spp. Genus-specific monoclonal antibody to flagella of L. monocytogenes was conjugated with 40 nm colloidal gold particles which were prepared in our laboratory. The specificity of the IC strip was tested with pure cultured bacteria. All strains of the genus of Listeria spp. yielded positive reactions and 12 strains of non-Listeria were negative, resulting in a specificity of 100%. L. monocytogenes was artificially inoculated in raw pork macerated with listeria enrichment broth. And then it was 10-fold diluted from $8.7{\times}10^6$ to 8.7 CFU/ml. L. monocytogenes could be detected at a minimum of $8.7{\times}10^5CFU/ml$ before enrichment, $8.7{\times}10^2CFU/ml$ after primary enrichment and 8.7 CFU/ml after secondary enrichment, respectively. These results indicated that the IC strip exhibited high specificity and sensitivity in the detection of Listeria spp.
Staphylococcal enterotoxin is a very common cause of food poisoning. Conventional detection methods for the toxin including enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs), chemiluminescence (ECL), and polymerase chain reaction (PCR) assays require a lot of time, efforts, and expert technicians. Lateral flow strip kits have shown great potential for the rapid detection of foodborne pathogens. The lateral flow strip kit is widely used in clinical settings because it is easy to use, fast, and cost effective. A typical lateral flow strip kit uses colloidal gold to generate a visual signal. However, the lateral flow strip kit based on colloidal gold has limited sensitivity to fulfill food safety regulation requirements. This study was performed to develop a rapid test kit for pathogenic staphylococcal enterotoxin B (SEB) in food samples. The rapid detection kit was fabricated based on a nitrocellulose lateral-flow strip. Cellulose nano beads and SEB antibodies were used as the tag and receptor, respectively, to improve the detection performance. Manually spotted SEB antibody and anti-rabbit antibody on the surface of the nitrocellulose membrane were used as test and control spots, respectively. The feasibility of the rapid test kit to detect SEB in samples was evaluated. The sensitivity of the kit was 10 ng/mL SEB spiked in PBS. Additionally, the rapid test kit could detect 1 ng/mL of SEB in chicken meat extract.
We introduced a promising patterned substrate by using a microcontact printing method that can be used for SERS immunoassays based on antigen-antibody binding. SERS spectrum of the Raman reporter with antibody, which is rhodamine 6G (R6G) adsorbed on colloidal gold nanoparticles, was observed only for the surfaces in which prostate-specific antigen (PSA) is present on the substrate that is attached to an immobilized layer of antibody on the gold nanoparticles layer of the patterned substrate. Raman mapping images clearly showed that the antibodies on the Raman reporter were successfully and selectively conjugated with the antigen on the patterned substrate. This method could be potentially extended to multi-protein detections and ultrasensitive biosensors.
연 x-선 현미경은 '물의 창' 영역 ($2.3{\sim}4.4nm$)의 파장을 이용하여, 수십 nm의 분해능으로 세포를 파괴하지 않고 살아있는 상태에서 세포의 내부구조를 관찰할 수 있어 가시광선현미경과 전자현미경을 단점을 보완하는 특징을 갖는 세포 생물학 연구에 적합한 현미경이다. 그러나 기존 연 x-선 현미경은 광원으로 방사선 가속기를 이용하기 때문에 사용이 제한적이었다. 이에, 본 연구에서는 2.88nm의 연 x-선을 광원으로 사용하는 소형 연 x-선 현미경을 이용하여, 내포작용에 의해 금 나노입자를 포획한 HT1080과 MDA-MB 231 세포의 영상을 약 60nm 분해능으로 획득하였다. 금 나노입자의 세포에 대한 독성을 제거하기 위하여 폴리에틸렌 글리콜을 캡핑하였고, 2.88nm 파장의 연 x-선에 대하여 충분한 조영효과로 인하여 세포영상에서 뚜렷한 대조도를 나타내었다. 내포작용에 의해 액포에 포함되어 있는 다양한 크기의 금 나노입자 군집을 확인하였으며, 세포내부의 액포의 분포상태도 관찰할 수 있었다. 따라서 고분해능을 가진 소형 연 x-선 현미경을 이용하여 금 나노입자를 세포내의 미세기관이나 특정 단백질에 표지하면 연 x-선에 대한 조영효과의 증가에 의하여 더욱 유용한 정보를 획득할 수 있을 것으로 생각한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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