Eukaryotic cells consist of a complex network of thousands of proteins present in different organelles where organelle-specific cellular processes occur. Identification of the subcellular localization of a protein is important for understanding its potential biochemical functions. In the post-genomic era, localization of unknown proteins is achieved using multiple tools including a fluorescent-tagged protein approach. Several fluorescent-tagged protein organelle markers have been introduced into dicot plants, but its use is still limited in monocot plants. Here, we generated a set of multicolored organelle markers (fluorescent-tagged proteins) based on well-established targeting sequences. We used a series of pGWBs binary vectors to ameliorate localization and co-localization experiments using monocot plants. We constructed different fluorescent-tagged markers to visualize rice cell organelles, i.e., nucleus, plastids, mitochondria, peroxisomes, golgi body, endoplasmic reticulum, plasma membrane, and tonoplast, with four different fluorescent proteins (FPs) (G3GFP, mRFP, YFP, and CFP). Visualization of FP-tagged markers in their respective compartments has been reported for dicot and monocot plants. The comparative localization of the nucleus marker with a nucleus localizing sequence, and the similar, characteristic morphology of mCherry-tagged Arabidopsis organelle markers and our generated organelle markers in onion cells, provide further evidence for the correct subcellular localization of the Oryza sativa (rice) organelle marker. The set of eight different rice organelle markers with four different FPs provides a valuable resource for determining the subcellular localization of newly identified proteins, conducting co-localization assays, and generating stable transgenic localization in monocot plants.
Lysosomes, as a cell organelle type, are safe biological control agents that may be possible replacements for chemical antimicrobial agents because they are simply isolated from egg white. In this study, it was found that the lysosomes isolated from egg white exhibited pH-dependent antimicrobial activity, with the optimal activity found at pH 6.0. The efficiency of lysosomes in inhibiting bacterial growth and activity was evaluated over a 12-h treatment period. Seven different microorganisms were used as bacterial strains, and the lysosomes showed a significant antimicrobial effect against all strains. In addition, the antimicrobial activity was maintained for 100 days, and there did not appear to be any resistance of E. coli to the lysosomal activity up to the eighth culture. However, the lysosomes did not affect the viability of mammalian cells, suggesting the biocompatibility of lysosomes. These highly effective lysosomes have a bright future in the application of novel antimicrobial sources as a cell organelle type.
Microbeam is a new avenue of radiation research especially in radiation biology and radiation protection. Selective irradiation of an ionizing particle to a targeted cell organelle may disclose such mechanisms as signal transaction among cell organelles and cell-to-cell communication in the processes toward an endpoint observed. Bystander effect, existence of which is clearly evidenced by application of the particle microbeam to biological experiments, suggests potential underestimation in the conventional risk estimation at low particle fluence rates, such as environment of space radiations in ISS (International Space Station). To promote these studies we started the construction of our microbeam facility (named as SPICE) to our HVEE Tandem accelerator (3.4 MeV proton and 5.1 MeV $^4$He$\^$2+/). For our primary goal, "irradiation of single particle to cell organelle within a position resolution of 2 micrometer in a reasonable irradiation time", special features are considered. Usage of a triplet Q magnet for focussing the beam to submicron of size is an outstanding feature compared to facilities of other institutes. Followings are other features: precise position control of cell dish holder, design of the cell dish, data acquisition of microscopic image of a cell organelle (cell nucleus) and data processing, a reliable particle detection, soft and hard wares to integrate all these related data, to control and irradiate exactly determined number of particles to a targeted spot.
세포들은 변색기까지는 아주 조밀하게 결합하고 있었으나 완숙기에서는 세포벽 중층이 다소 분해되어 둥근 형태의 세포를 관찰할 수 있었다. 세포벽 변화는 녹숙기에서는 중층을 구별할 수 없을 정도로 세포벽이 발달되지 않았으며 변색기에서는 중층을 관찰할 수 있었고 완숙기에서는 분해되어 완전히 분리되는 것을 관찰할 수 있었다. 세포의 조직은 녹숙기에서는 mitochondria, endoplasmic reticulum 둥의 조직과 소액포를 관찰할 수 있었으나 변색기 이후에는 액포가 발달하면서 cytoplasm과 organelle이 세포벽에 흡착되었다. 세포간극은 녹숙기에서는 형성되지 않았고 변색기에서는 세포간극과 간극 주위에 세포벽 분해현상을 관찰할 수 있었으며, 완숙기에는 중층의 분리와 분해산물이 간극에 분산되어 있는 것을 관찰할 수 있었다.
Leaf tissue of Glycine max Merr. was fixed in para-formaldehyde-glutarldehyde and postfixed in osmium tetroxide or postassium permanganate for electron microscopy. The origin of cytolysome-like organelles of mesophyll cell was studied and changes of fine structure of the organelles according to treating solutions such as gibberellin (GA), kinethin (KI), 2,4-dichlorophenoxy acetic acid(2, 4-D) or 2, 4-D+GA(1mg/l, respectively) were observed. The cylolysome-like organelles differentiate in endoplasmic reticulum and plasmalemma, and they drop into vacuoles being isolated from the formers. They seem to change into myelin-like structure and to be degenerated by autodigestion. Cytolysome-like organelles involved in cell walls and vacuoles showed activity of acid phosphatase. In the group of GA and KI treatment, cytolysome-like organelles were similar to that of the control group. But in the treatmental groups of 2,4-D and 2,4-D+GA, myelin-like structures increased in size and autodigestion of this organelles were similar to that of the control group. But in the treatmental groups of 2,4-D and 2,4-D+GA, myelin-like structures increased in size and autodigestion of this organelle seemed to be accelerated. In the treatmental group of 2,4-D+GA, myelin-like structures shown high electron density were observed in cytoplasm and vacuoles together.
많은 생물체의 완전한 genome sequence가 속속 밝혀지면서 세포의 기능을 종합적으로 평가하려는 노력들이 이어져 왔다. DNA microarray는 세포 전체의 유전자 전사, 즉 mRNA 레벨을 측정해주므로 세포가 처해있는 서로 다른 환경 속에서 유전자 발현의 차이를 측정할 수 있다. 그러나 유전자 발현의 최종 산물은 mRNA를 통해 번역된 단백질에 해당되고, 많은 단백질이 번역후 수식(post-translational modification) 과정을 거쳐 세포 내에서 기능을 발휘하므로 진정한 세포의 생리학적 상태를 평가하기 위해선 단백질 레벨의 분석이 필수적이다. Proteomics란 유전자 산물 즉 단백질의 기능을 large-scale로 분석하는 것으로 정의된다. 이것은 genome에 의해 만들어지는 모든 단백질(proteome)을 의미하기도 하고 좁은 의미에서는 세포내의 어떤 organelle(예: Golgi Complex)에 존재하는 단백질 혹은 어떤 protein complex를 지칭하기도 한다. Proteomics는 어떤 주어진 조건에서 특별한 세포 또는 organelle에서 발현되는 단백질들을 연구하고 이해하는데 강력한 수단이 되고 있다. 이런 proteomics는 genomics, bioinformatics 등과 유기적으로 연결되어 세포의 기능을 입체적으로 이해하는데 도움을 준다. 본고에서는 proteomic analysis 과정을 간단히 살피고 최근 세포 생물학에서 이루어지는 proteomics의 응용을 살펴본다.
The centrosome is a subcellular organelle from which a cilium assembles. Since centrosomes function as spindle poles during mitosis, they have to be present as a pair in a cell. How the correct number of centrosomes is maintained in a cell has been a major issue in the fields of cell cycle and cancer biology. Centrioles, the core of centrosomes, assemble and segregate in close connection to the cell cycle. Abnormalities in centriole numbers are attributed to decoupling from cell cycle regulation. Interestingly, supernumerary centrioles are commonly observed in cancer cells. In this review, we discuss how supernumerary centrioles are generated in diverse cellular conditions. We also discuss how the cells cope with supernumerary centrioles during the cell cycle.
리소좀(lysosome)은 진핵세포에서 에너지 대사 및 세포 내 소화 작용에 관여하는 세포 소기관으로 protease, nuclease, glycosidase, lipase, phosphatase 들이 다수 존재한다. 우리는 선행 연구결과들을 통해 난백 리소좀의 멜라닌 색소 탈색능을 보고하였다[8]. 그러나 B16F10 melanocyte 세포주에서 난백 리소좀에 의한 멜라닌 함량 변화 및 피부장벽 조절 연구는 거의 보고되지 않았다. 따라서 우리는 계란 난백(egg white)으로부터 추출한 lysosome-related organelle extract (LOE)에 의한 세포 내 멜라닌 함량 변화 및 피부장벽 강화 효과를 규명하고자 하였다. 먼저 LOE의 미백 효능을 확인하기 위해 B16F10 세포주를 이용하여 세포독성 평가를 진행하였다. B16F10 세포주에서 LOE에 의한 세포독성은 0에서 20 mg/mL 농도에서 관찰되지 않았으나, 40 mg/mL 부터 세포독성이 관찰되어 이후 모든 실험에서 최대 농도값을 20 mg/mL로 설정하였다. 먼저 LOE를 이용한 melanin contents assay 결과, 음성 대조군인 α-MSH 처리군 대비 LOE 처리군 5, 10, 20 mg/mL 농도에서 61.5 ± 4.0%, 61.4 ± 7.3%, 58.3 ± 8.3%로 세포 내 멜라닌 함량이 감소되는 것을 확인하였고, 20 mg/mL 농도 조건에서 MITF 발현 억제도 관찰하였다. LOE의 피부 장벽에 미치는 영향을 관찰하기 위해 각질형성세포주(HaCaT)를 이용하여 TEER (trans-epithelial electrical resistance) assay를 수행한 결과, LOE에 의해 농도 의존적으로 TEER 저항값이 증가하여 LOE가 피부장벽 강화에도 효과가 있음을 알 수 있었다. 또한 피부 염증 유발을 위한 TNF-α 처리조건에서도 LOE는 TEER 저항값을 증가시켜 염증 유발 조건에서도 LOE에 의해 피부장벽이 정상적으로 회복되었음을 알 수 있었다. 마지막으로 cell migration assay를 통해 LOE에 의한 세포이동 촉진 효과를 관찰한 결과, LOE는 세포분열 및 세포이동을 촉진시켰다. 위 결과들을 통해 LOE는 미백 기능 뿐 아니라 피부재생 및 피부장벽 강화에도 효과를 나타내는 소재이며, 효소안정화 및 제형화 기술이 접목된다면 향후 새로운 미백 기능성 화장품 소재로도 개발될 수 있을 것이다.
The water extract of Dohongsamul-tang(DHSMT) has been traditionally used in treatment of ischemic heart and brain diseases in Oriental Medicine. However, little is known about the mechanism by which DHSMT protects C6 glial cells from glucose deprevation induced damages. Therefore, this study was designed to evaluate the protective effects of DHSMT on 2-deoxy-D-glucose induced autophagy of C6 glial cells. Autophagic phenotype is evaluated by fluorescence microscopy and flow cytometry with specific biological staining dyes, including monodansylcadaverine and acridine orange, as well as Western blot analysis with microtubule-associated protein 1 light chain 3(LC3) and Beclin-1. Treatment with 2-deoxy-D-glucose significantly resulted in a decrease of the viability of C6 glial cells and increase of the extracellular LDH release in a dose and time-dependent manner. However, pretreatment with DHSMT protected C6 glial cells from glucose deprivation with 2-deoxy-D-glucose. The author also observed the fact that autophagy phenotype occurred by 2-deoxy-D-glucose in C6 glial cells. Pretreatment with 3-MA, a pharmacological inhibitior of autophagy, abolished the formation of acidic vesicle organelle in C6 glial cells treated with 2-deoxy-D-glucose. However, pretreatment with DHSMT inhibited the formation of autophagic phenotypes, including formation of acidic vesicle organelle, and increase of the expression of LC-3 II Beclin-1 proteins in C6 glial cells treated with 2-deoxy-D-glucose. Taken together, these data suggest that DHSMT is able to protect C6 glial cells from glucose deprivation with marked inhibition of autophagy formation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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