짙은 연색의 모자익병징을 나타내는 이병 시금치를 채집하여 Broad bean wilt virus(BBWV)를 분리동정 하였다. 분리된 Broad bean wilt virus (BBWV)를 지표식물에 즙액접종한 결과, 명아주(Chenopodium amaranticolor), 명아주(Chenopodium quinoa) ,잠두(Vicia faba)에서는 접종엽에 국부병반이 나타났고 접종상엽에서는 모자익(전신감염)병징이 나타났으며 꽈리(Physalis floridana), 시금치, 담배 (W.B), 담배 (Nicotiana glutinosa)에는 모자익 병징이 나타났다. 이병시금치로부터 분리한 병원바이러스와 BBWV의 항혈청을 한천내확산법(Agar gel-diffusion test)으로 반응시킨 결과 양성 반응이 나타났다. 이병엽을 Dip법으로 시료를 제작하여 전자현미경에서 검경한 결과 구형의 입자가 관찰되었으며 직경은 25nm이었다. 시금치 재배포장에서 BBWV의 발생분포는 수원, 안양, 대구 진주 등 거의 전국적으로 발생하였다.
Gentian plants (Gentiana spp.) showing yellow ringspot, mosaic, necrotic fleck and malformation were collected from their growing areas in Taegu, Kyungpook province and Alpine Agricultural Experiment Station, Korea. Three viruses isolated from the naturally infected gentian were identified as broad bean wilt virus (BBWV), cucumber mosaic virus (CMV) and clover yellow vein virus identified as broad bean wilt virus (CIYVV) by their host range, immunosorbent electron microscopy (ISEM) and electron microscopy. Electron microscopic examination of negatively stained preparations showed that BBWV and CMV are spherical particles of 28 nm and 30 nm in diameter, and CIYVV is filamentous particles of ca. 780 nm in length. By ISEM, BBWV was detected mainly in gentian showing yellow ringspot and mottle, CIYVV in necrotic fleck leaf of gentian and CMV in narrow and distorted mosaic leaf of gentian. BBWV and CMV are the most prevalent in the cultivated gentian. In ultrathin sections of BBWV infected tissues, large aggregates of crystalline array of virus particles and vesicular body were found in the cytoplasm and vacuole of mesophyll cells. In case of CIYVV, pinwheel- and laminated aggregate-type inclusions as well as filamentous virus particles were observed in the cytoplasm of mesophyll cells.
Gladioli (Gladiolus hybridus) showing flower colour breaking leaf mosaics, notched leaf, and dwarfing or lack of visible symptoms were collected from gladioli growing areas in Taegu and Kyungpook province, Korea. The three viruses isolated from the naturally infected gladioli were identified as broad bean wilt virus (BBWV), cucumber mosaic virus (CMV), and tobacco rattle virus (TRV) by their host range, immunosorbent electron microscopy (ISEM), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), direct tissue blotting immunoassay (DTBIA), and intracellural symptoms. By DTBIA and ISEM, TRV was detected in gladiolus showing notched leaf, while CMV was frequently detected in gladioli with dwarfing, color breaking and malformation of flowers. BBWV was also often detected in many symptomless gladiolus plants, but TRV was detected in notched-leaf of gladiolus. Electron microcopic examination of negatively stained preparations showed that BBWV and CMV are spherical particles of 28 nm and 30 nm in diameter, and TRV is rigid rod-shaped particles of 40∼200 nm in length. The rigid rodshaped virus particles reacted positively with TRV antiserum in ISEM and DTBIA, respectively.
황색 모자이크 괴저조반, 위축, 기형, colour breaking의 병미을 나타내고 있는 나리류를 한국의 남부지역에서 채집하였다. 전자현미경에 의해 2종의 바이러스 입자가 분리되어, 이들의 기주범위, 혈청반응, 조즙액중의 부활화 한계, 진딧물의 전반성, 감염엽세포에 있어서 바이러스 입자의 소재양식에 의하여 2종의 바이러스를 동정하였다. Broad bean wilt virus(BBWV) : 이 바이러스는 즙액접종에 의해 8과 23종의 검정식물에 감염이 확인되었다. 복숭아혹진딧물에 의해 쉽게 전반되었다. 내열성은 $70\%$, 내희석성은 1,000배, 내보존성은 6일이였다. 바이러스 입자의 형태는 직경 약 28nm의 소구형이다. 혈청시험에서 본 바이러스는 BBWV의 항혈청과 특이적인 반응대를 형성했다. 병엽절편의 전자현미경적관찰에서는 엽육세포의 세포질, 액포, 핵내에서 바이러스 입자의 응집괴 및 결정배열상이 확인되엇고, 특히 세포질내에서는 vesicular body의 발달이 확인되었다. Cncumber mosaic virus(CMV) : 이 바이러스 입자의 형태는 직경 약30nm의 소구형이다. 본 바이러스 CMV-Y의 항혈청과 특이적인 반응대를 형성했다. 감염엽조직의 전자현미경적관찰에서는 엽육세포의 세포질 및 액포내에서 바이러스 입자의 응집괴 도는 결정배열상이 확인되었다. BBWV와 CMV를 건전한 나리류(Lilium tigrium, L. concolor, L. auratum)에 재접종한 결과 BBWV의 접종주에서는 가벼운 병징 또는 colour breaking를 나타내었고, CMV의 접종수에서는 황색 모자이크 또는 괴저조반을 나타냈다.
Yoon, Ju-Yeon;Ryu, Ki Hyun;Choi, Seung-Kook;Choi, Gug Sun;Kwon, Soon Bae;Park, Jin Woo;Palukaitis, Peter
식물병연구
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제18권4호
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pp.268-276
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2012
Broad bean wilt virus 2 (BBWV2), genus Fabavirus, subfamily Comovirinae, family Secoviridae, causes damage in many economically important horticultural and ornamental crops. Sequence alignments showed several conserved sequences in 5' non-coding regions (5' NCRs) of RNA 1 and RNA 2 in all BBWV2 strains characterized so far. Based on this observation, we generated a hpRNA construct (pIR-BBWV2) harboring an inverted repeat containing a 210 bp cDNA fragment homologous to 5' NCR portion of BBWV2 RNA 1 to investigate the silencing potential for its ability to interfere with a rapidly replicating BBWV2. Agrobacterium-mediated transient expression of the IR-BBWV2 had a detrimental effect on BBWV2 infection, showing no distinct symptoms in non-inoculated leaves of the agroinfiltrated Nicotiana benthamiana plants. BBWV2 genomic RNAs were not detected by RT-PCR from tissues of both the inoculated leaves and upper leaves of the agroinfiltrated plants. Accumulation of virus-derived small interfering RNAs was detected in the inoculated leaf tissues of N. benthamiana plants elicited by transient expression of IR-BBWV2 indicating that RNA silencing is responsible for the resistance to BBWV2.
잠두위조바이러스2 (BBWV2)는 경제적으로 중요한 원예, 관상작물에 심각한 피해를 주는 바이러스 중의 하나다. BBWV2의 넓은 기주 범위, 매개충 방제의 어려움 등 효과적인 치료제가 없기 때문에, 병을 예방하거나 저항성 품종의 개발 등을 위해서는 BBWV2의 새로운 분리주들의 특성 조사와 연구가 필요하다. 본 연구에서는 2019년 금산지역의 잎들깨 재배농가에서 분리된 BBWV2 분리주(BBWV2-GS-PF)의 유전학적·생물학적 특성을 구명하고 기존에 보고된 분리주들과의 특성을 비교하였다. 순수 분리된 BBWV2-GS-PF는 기존 분리주와 달리 들깨에서 심한 모자이크 증상과 고추에서 원형 반점 증상을 보였다. BBWV2-GS-PF의 유전자 계통분석 결과, 기존에 알려진 2개의 그룹과 약 76~80%의 비교적 낮은 유전자 상동성을 보이며 계통이 분화된 것을 확인할 수 있었다.
전국 52개 지역에서 2002년, 2004년에서 2006년, 4년 간 고추 바이러스 이병물을 채집하여 바이러스 감염양상을 조사하였다. 감염된 바이러스 종류는 Cucumber mosaic virus(CMV), Pepper mottle virus(PepMoV), Pepper mild mottle virus(PMMoV), Broad bean wilt virus 2(BBWV2), Tobacco mild green mosaic virus(TMGMV), Tomato spotted wilt virus(TSWV) 6종이었다. CMV, PepMoV PMMoV와 BBWV2의 발생률은 각각 29.4%, 13.6%, 14.3%, 25.6%이었다. TMGMV와 TSWV의 발생률은 1.0%로 매우 낮았다. 2002년과 2004년의 CMV 발생률은 53.3%와 34.2%로 가장 높았으나 2005년과 2006년에는 18.2%와 11.9%로 감소하였다. BBWV2의 발생률은 2002년에 1.3%, 2004년에 1.8%로 낮았으나, 2005년에 41.3%, 2006년에 58.2%로 크게 증가하였다. CMV+BBWV2의 발생률은 2002년에 0.0%, 2004년에 2.1%이었으나 2005년과 2006년에 각각 33.3%와 83.2% 증가하여 BBWV2의 단독감염과 함께 복합감염에서도 급격히 증가하였고 CMV+BBWV2+PepMoV의 삼중 복합감염률은 평균 6.4%이었다. CMV는 고추 잎에 심한 모자이크병징, BBWV2는 원형반점 병징을 일으키며, CMV와 BBWV2의 복합감염 경우에는 퇴록병징을 일으켰다. TSWV는 고추 잎과 과일에 전형적인 다중 원형반점을 일으켰다.
The incidence of Broad bean wilt virus 2 (BBWV2) on red pepper was investigated using the samples obtained from 24 areas of 8 provinces in Korea. Two hundred and five samples (79%) out of 260 collected samples were found to be infected with BBWV2. While the single infection rate of BBWV2 was 21.5%, the co-infection rate of BBWV2 with Cucumber mosaic virus, Pepper mottle virus, Pepper mild mottle virus and/or Potato virus Y was 78.5%. To characterize the genetic diversity of BBWV2 Korean isolates, 7 isolates were fully sequenced and analyzed. Phylogenetic analyses revealed that BBWV2 isolates could be divided largely into two groups as Group I and Group II. Based on the partial sequence analyses, 153 selected BBWV2 isolates were subgrouped into GS-I (21.6%), GS-II (3.9%) and GS-III (56.9%). BBWV2 GS-III, which was predominant in Korea, appears to be a new combination between Group I RNA-1 and Group II RNA-2. Viral disease incidence of BBWV2 on red pepper was under 2% before 2004. However, the incidence was increased abruptly to 41.3% in 2005, 58.2% in 2006 and 79% in 2007. These rapid increases might be related with the emergence of new combinations between BBWV2 groups.
용담에서 전형적인 모자이크 증상을 나타낸 바이러스 이병주 및 황화증상을 보이는 식물체를 채집하였다. 이들 중, 모자이크 증상의 잎을 접종하여 전신감염된 Nicotiana benthamiana로부터의 접종원을 동부의 초생엽에 접종하였을 때, 2가지 형태의 괴사 국부병반이 형성되었다. 즉 하나는 작은 크기 pinpoint 형태의 국부 괴사병반(SNS)이며, 다른 하나는 SNS보다 약간 큰 halo 형의 국부 괴사 병반(LNS)으로 뚜렷하게 구분되었다. 한편 황화 병징의 용담으로부터 증식된 접종원은 동부의 초생엽에 LNS만 형성하였다. 동부에 형성된 SNS 및 LNS형 병반을 각각 단일병반 분리하여 N. bentamiana에 접종하였다. 그 결과 SNS를 접종한 N. bentamiana에서는 접종엽에 무병징, 상위엽에는 전형적인 모자이크 증상이 발현되었다. 반면 LNS를 접종한 식물체에서는 접종엽에 퇴록 윤문이 형성되었으며, 상위엽에는 괴저를 동반한 모자이크 증상이 발현되었다. 이들 SNS 및 LNS 병반으로부터 분리한 바이러스를 dsRNA, RT-PCR 및 혈청학적 유연관계 분석을 통하여 SNS 병반은 CMV에 의해서, LNS는 BBWV2에 의해서 유도된다는 것을 확인하였다. 이 연구의 결과로부터 자연계에서 CMV와 BBWV2가 복합감염되어 병징의 구분이 어려운 경우, 동부에 접종하여 유도된 병반을 이용하여 두 바이러스의 감염을 쉽게 구분할 수 있는 방법으로 활용할 수 있을 것으로 생각되었다.
The full-genome sequences of fourteen isolates of Broad bean wilt virus 2 (BBWV2), collected from broad bean, pea, spinach, bell pepper and paprika plants in Korea during the years 2006-2012, were determined and analyzed comparatively along with fifteen previously reported BBWV2 genome sequences. Sequence analyses showed that RNA-1 and RNA-2 sequences of BBWV2 Korean isolates consisted of 5950-5956 and 3568-3604 nucleotides, respectively. Full-length genome sequence-based phylogenetic analyses revealed that the BBWV2 Korean isolates could be divided into three major groups comprising GS-I (isolates BB2 and RP7) along with isolate IP, GS-II (isolates BB5, P2, P3 and RP3) along with isolate B935, and GS-III including 16 BBWV2 Korean isolates. Interestingly, GS-III appears to be newly emerged and predominant in Korea. Recombination analyses identified two recombination events in the analyzed BBWV2 population: one in the RNA-1 of isolate K and another one in the RNA-2 of isolate XJ14-3. However, no recombination events were detected in the other 21 Korean isolates. On the other hand, out of 29 BBWV2 isolates, 16 isolates were found to be re-assortants, of which each RNA segment (i.e. RNA1 and RNA2) was originated from different parental isolates. Our findings suggested that reassortment rather than recombination is a major evolutionary force in the genetic diversification of BBWV population in Korea.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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