We established an in vitro experimental system using the following procedure. We first introduced tritium-labeled norepinephrine ([$^3$H]-NE) into PC12 cells, The [$^3$H]-NE incorporated into PC12 cells were then stimulated by a high concentration (60 mM) of $K^+$ buffer during 12 minutes. Then, we collected $100{\mu}l$ supernatant and counted the amount of [$^3$H]-NE release from PC12 cells with a scintillation counter. After screening fungal, Streptomyces spp. or bacterial product using this experimental sytem, we obtained FS11052 from Streptomyces spp. which inhibited [$^3$H]-NE release from PC12 cells. FS11052 also inhibits the release of ATP as a neurotransmitter of PC12 cells and rat cortical neurons, The inhibitory effect was seen even when the PC12 cells were treated with low $K^-$ buffer containing ionomycin ($1{\mu}M$) as an ionopore. This result suggests that the inhibitory action of FS11052 on neurotransmitter release appeared after the influx of $Ca^{2+}$.
포도나무 잎의 메탄올 추출물을 n-hexane, ethylacetate, n-butanol $H_2O$으로 순차적으로 용매분획 하였다. Ethylacetate 분획으로부터 silica gel chromatography와 재결정하여 활성물질을 분리 정제하였다. 이 화합물의 화학구조를 EI-MS의 조각 데이터를 근거로 분석한 결과 betulin으로 구조결정 되었다. 이 화합물이 고추 역병균(Phytophthora capsici), 고추 탄저병균(Colletotrichum acutatum)에 대한 항균활성(in vitro)을 측정한 결과, 100 ${\mu}g\;mL^{-1}$에서 각각 52.1%, 40.8%의 균사생육 억제효과를 보였으나, 잔디 마름병(Rhizoctonia solani) 균의 균사생육 억제 효과는 나타나지 않았다.
This study compared the contents of phenolic components depending on the extracting conditions of Acanthopanax koreanum stem to provide basic information for developing Acanthopanax koreanum-based functional foods. Our findings show that the content of total phenolic component peaked at 16 hours of extraction (WAK-16, 7.22%) and when water extracted at $100^{\circ}C$. However, 11-hours water extraction (WAK-11) showed highest eleutheroside B concentration of 1.32%, a main component of A. koreanum, and the level of chlorogenic acid concentration was the highest when 1-hour water extraction (WAK-1) was conducted, being 2.12%. Moreover, highest concentration of eleutheroside E was observed in 16-hours water extraction (WAK-16) as 1.49%. With 60-hours water extraction (WAK-60), the content of syringaresinol, an active phenolic aglycon substance, concentration was the highest with the value of 0.10%. Isofraxidin showed the highest concentration of water extract(0.09%) for 20 hours (WAK-20) and 0.42% for sinapyl alcohol[16 hours (WAK-16)].
Polygoni Radix (Polygonaceae) has been used as renal disoder hematopoietic, menstrual irregularity and antiaging in Korean folk medicine. Specially aerial parts has been used for insomnia and sedative agent. In order to investigate the efficacy of antioxidant activity on these aerial parts, the bio-activity guided fraction and isolation of physiologically active substance were performed. H$_2$O, 30%, 60%, 100% MeOH were examined antioxidant activity by DPPH method. It was revealed that 30%, 60% MeOH fractions have significantly antioxidant activity. From 60% MeOH fraction, six known flavonoid glycosides (quercetin, quercetin 3-O-${\beta}$-D-galactopyranosyl-4'-O-glucopyrano side-3'-methyl ether, quercetin 3-O-${\alpha}$-L-rhannopyranoside, quercetin 3-O- ${\alpha}$-L-rhamnopyranoside-4'-methylethor, quorcetin 3-O-${\beta}$-D-galactopyranoside, quercetin 3-O-${\beta}$-D-galactopyranoside) and 3,4-Oihydrocinnarnic acid were isolated. To investigate the antioxidant activities of each com-pounds, we measured radical scavening activity with DPPH method and anti-lipid peroxidative efficacy on low density lipo-protein (LDL) with TBARS assay and anti-acetylcholinestrase activity with Ellman's Test. Four compounds (ll, IV Vl, Vll) of quercetin glycosides showed significant activity.
참당귀의 유효성분인 nodakenin, decursinol, decursin, decursinol angerate 4종의 함량이 균주에 따라 어떤 물질의 변화를 일으키는지를 알아보기 위해 Bacillus EMD17, 9-3, HCD2, #8, 191 5종과 Lactobacillus KCTC 3320, WCP02, S65, P1201 4종 모두 9종류의 균주를 이용하여 발효 실험을 실시하였던 바 아래와 같은 결과를 얻었다. 1. 참당귀의 추출물에 Bacillus균을 접종하여 발효한지 2일 경과한 후부터 지표물질인 decursin과 decursinol angerate의 함량이 급격히 감소하였다. 이는 발효한지 4일이 경과한 후에도 decursin과 decursinol angerate의 함량이 2일째와 동일했다. 반면 발효한지 4일이 경과한 후에 nodakenin과 decursinol의 함량이 높아졌다. 또한 decursin의 함량은 발효한지 6일이 지난 후에는 크게 증가하였다. 2. 참당귀의 추출물에 Bacillus균을 접종 후 nodakenin과 decursinol의 물질변화는 균 종류에 관계없이 거의 나타나지 않았다. Decursin과 decursinol angerate의 유효함량 변화는 Bacillus EMD17, 9-3에서 큰 것으로 나타났다. Decursin과 decursinol angerate의 함량 변화는 Bacillus HCD2, #8, 191균주에서 거의 나타나지 않았다. 3. 참당귀의 추출물에 Lactobacillus KCTC 3320, WCP02, S65, P1201 4종류를 이용하여 발효한지 8일 후에 유효성분 변화를 알아본 결과균의 종류와 상관없이 nodakenin과 decursinol의 함량 변화는 거의 나타나지 않았다. 그러나 Lactobacillus S65, P1201로 발효를 한 경우에는 decursin과 decursinol angerate의 함량에서 변화가 나타났다.
소목은 전통적으로 타박상, 염증 등의 질병치료를 위해 민간의학에서 오래 동안 사용되어 온 한약재야다. 소목의 섬재로부터 항균효과를 조사하기 위하여 MeOH 추출에 의한 hexane, $CHCl_3$, EtOAc, n-BuOH, MeOH 및 $H_2O$ 분획을 얻었다. 분획 시료 중 3.94%의 가장 높은 수율의 EtOAc 분획이 조사된 인채 병원성 세균에 대해 가장 강한 항균활성 나타냈다. 또한 EtOAc 분획의 항균활성은 Gram (-) 균주 보다 Gram (+) 균주에 더 효과적이며, Gram (-) 균주에 대해서는 세균에 따른 항균활성의 차이를 보였다. EtOAc 분획은 silica gel adsorption column chromatography 및 Sephadex LH-20을 이용하여 분리하였으며 수득한 주요 성분은 채결정을 통하여 얻어진 단일물질을 HPLC를 이용하여 순도를 측정하였다. 300g의 C. sappan으로부터 3.94%의 EtOAc 분획을 얻었으며 EtOAc분획물은 분석한 결과 10 mg에는 1.67 mg의 brazilin을 포함하였다. 분리된 활성울질은 짧은 황색 결정의 단일 화합물로 MS에 의해 분자량이 285로 나타났으며, $^1H$-NMR, $^{13}C$-NMR에 의한 구조분석으로 brazilin($C_{16}H_{14}O_5$을 동정하였다. 이 같은 결과는 소목의 MeOH 추출에 의한 EtOAc 분획에 존재하는 brazilin이 S. aureus와 같은 인체 병원성 Gram (+) 균주에 대한 생약치료제로 활용이 가능할 것을 시사한다.
Propolis is a resinous substance that is collected by Apis mellifera from plant sources and is used in traditional medicine. To study the phytochemical constituents and apoptotic potential of Jordanian propolis extract against different cancer cell lines, propolis was extracted using methanol, hexane, and ethyl acetate and was fractionated using chromatographic methods. Cytotoxicity was assessed using MTT and LDH assays. The apoptotic potential was investigated using florescence microscopy, multicaspase assay, Annexin-V and dead cell assay, and cell cycle assay. The phytochemical constituents were analyzed using GC-MS. The methanol extract of propolis exhibited cytotoxic potential against all cell lines tested. The IC50 values of the methanol extract were 47.4, 77.8, 91.2, and 145.0 ㎍/ml for HepG2, LoVo, MDAMB231, and MCF7 cell lines, respectively. The IC50 values of the F1 fraction were 31.6 (MDAMB231), 38.9 (HepG2), 36.7 (LoVo) and 75.5 (MCF7) ㎍/ml. On further purification using thin-layer chromatography, the IC50 values of the F1-3 fraction were found to be 84.31(HepG2), 79.2 (MCF7), 70.4 (LoVo), and 68.9 (MDAMB231) ㎍/ml, respectively. The anticancer potential of the F1 fraction was confirmed through the induction of apoptosis and cell cycle arrest at the G0/G1 phase. The GC-MS analysis of the F1 fraction revealed the presence of 3-methyl-4-isopropylphenol (29.44%) as a major constituent. These findings indicate the potential of propolis extract as a cancer therapy. However, further investigation is required to assess the acute and subacute toxicity of the most active fraction.
The purpose of this study was to measure the antioxidant activity and bioactivity of black chokeberry (Aronia melanocarpa). The black chokeberry was known to contain many physiologically active substance, such as ascorbic acid, anthocyanin, quercetin. We extracted black chokeberry powder from four solvents such as chloroform:methanol(CM, 2:1, v/v), distilled water (DW), 70% ethanol, 70% methanol. After that, we determined anthocyanin, total phenol, flavonoid content, DPPH radical scavenging activity, ABTS radical scavenging activity, ferric reducing antioxidant power, reducing power and Nitrite scavenging activity of black chokeberry extracts and as results of comparing each extract. respectively. From the above results shows that antioxidant activity and bioactivity of black chokeberry extracts was the highest in 70% methanol (p<0.05). The results suggest that black chokeberry can be used as nutraceutical foods and natural antioxidant.
Cudrania tricuspidata Bereau (Moraceae) have been used for anti-inflammatory, anti-hepatotoxic, anti-hypertensive and anti-diabetic activities. In order to investigate the efficacy of antioxidant activity, the bio-activity guided fraction and isolation of Biologically active substance were performed. $H_{2}O,\;30\%,\;60\%,\;100%$ MeOH and acetone fractions were examined on the antioxidant activity by DPPH method. It was shown that $30\%,\;60\%,\;100\%$ MeOH fractions have significantly antioxidant activity. From $30\%$ MeOH fraction, two dihydroflavonoid glycosides dihydroquercetin 7-O-$\beta$-D-glucopyranoside (I), dihydrokaempferol 7-O-$\beta$-D-glucopyranoside (V) were isolated and $60\%$ MeOH fraction, six flavonoids including quercetin 3-O-$\alpha$-L-rhamnopyranosyl($1\rightarrow6$)-$\beta$-D-glucopyranoside (II), quercetin 3-O-$\beta$-D-glucopyranoside (III), quercetin 7-O-$\beta$-D-glucopyranoside (IV), kaempferol 3-O-$\alpha$-L-rhamnopyranosyl($1\rightarrow6$)-$\beta$-D-glucopyranoside (VI), kaempferol 3-O-$\beta$-D-glucopyranoside (VII), kaempferol 7-O-$\beta$-D-glucopyranoside (VIII) were isolated. To investigate the antioxidant activities of each compounds, we measured radical scavening activity with DPPH method and anti-lipid peroxidative efficacy on low density lipoprotein (LDL) with TBARS assay. Four compounds of quercetin glycosides (I, II, III, IV) showed significant antioxidant activity.
화학방부제는 항균활성은 좋지만 많은 부작용이 보고되고 있어 최근에는 인체에 해가 없으며 방부 기능과 자체 효능이 있는 천연방부제의 개발이 활발하다. 또한 천연물의 흡수율을 높이기 위한 방법으로 분자량이 커서 인체에 잘 흡수되지 않아 저분자화를 시키기 위한 방법으로 균주를 이용하여 발효하는 것도 늘어나고 있는 추세이다. 이에 천연방부제가 방부 효과는 지속되어야 하고 첨가했을 때 품질에 손상을 주지 않아야 하며, 향, 색과 성분에 영향을 끼치지 않아야 한다는 요건들을 충족시켜야 한다. 따라서 본 연구는 인체에 해가 없으며 항균활성이 좋은 황금, 단삼, 관중을 선정하였다. 식물은 모두 에탄올로 추출하였고, 발효균주로는 B. subtilis, L. casei, S. cerevisiae와 누룩에서 분리한 Asp. oryzae로 액체와 고체발효를 하여 발효 전과 발효 후의 유효성분의 함량을 비교하였다. 항균활성을 알아보기 위해 C. albicans, S. aureus, P. aeruginosa 세균 3종과 진균은 E. coli로 억제력을 탐색하였다. 천연방부제 개발로 사용하기 위해서는 항균활성이 있고 이러한 실험을 수행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 원산지, 굵기와 용매에 따른 수율은 황금은 중국산이며 굵기는 2,800㎛로 50% ethyl alcohol 추출물에서 21.88%, 단삼은 국내산으로 굵기는 2,800㎛이며 50% ethyl alcohol 추출물에서 25.62%, 관중은 중국산으로 굵기는 2,800㎛, 70% ethyl alcohol 추출물에서 6.50%의 수율을 얻었다. 2. L. casei로 1일 액체 발효했을 때 수율은 황금 66.8%, 단삼 84.8%, 관중 73.0%였다. B. subtilis로 고체발효한 황금과 단삼은 24.40%, 39.30%, 관중은 L. casei로 발효 했을 때 11.10%의 수율을 얻었다. 3. 액체발효 후 황금에서 S. aureus 균주에 대하여 9mm 정도의 clear zone이 확인되었고, 단삼과 관중 발효에서는 항균력이 확인되지 않았다. 4. 황금을 L. casei로 고체발효 했을 때 C. albicans와 S. aureus에서 높은 항균활성을 보였다. 단삼은 S. cerevisiae로 고체발효 했을 때 S. aureus에서 항균활성을 보였다. 관중은 L. casei, S. cerevisiae로 고체발효 했을 때 E. coli와 S. aureus에서 항균활성이 높게 나타났다. 발효하지 않았을 때보다 발효 후의 항균활성이 매우 높았다. 5. 유효성분의 변화는 고체발효하지 않은 황금에서는 baicalin 101.57, baicalein 28.26, wogonin 5.33mg/g이었고, S. cerevisiae로 고체발효 했을 때는 baicalin 94.31, baicalein 30.41, wogonin 3.57mg/g로 baicalein의 함량은 증가된 것으로 확인되었다. 발효하지 않은 단삼에서는 salvianolic acid A가 1.82mg/g 이었으며, S. cerevisiae로 고체발효했을 때는 5.70mg/g으로 증가하였다. 관중의 유효성분은 flavaspidic acid AP, flavaspidic acid PB, flavaspidic acid AB, flavaspidic acid BB로 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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