고구마 현탁배양세포의 EST library에 높은 빈도로 존재하는 metallothionein (MT) 유전자를 선별하였다(IbMT3). MT 유전자는 세포와 조직의 스트레스 조절과 연관되어 있다고 알려져 있다. 본 연구에서 IbMT3 cDNA의 전장을 확보하여 염기서열 분석을 한 결과, IbMT3 유전자는 구조적으로 유형 3에 속하는 MT 단백질을 암호화하고 있었다. 식물에서 유형 3에 속하는 MT 단백질의 기능은 명확히 알려지지 않다. Northern blot 분석 결과, IbMT3 유전자는 고구마 식물체 잎보다 현탁배양 세포에서 매우 강하게 발현되었다. 일반적으로 세포배양은 세포에 산화 스트레스 상태를 부과하는 것으로 알려져 있다. 이에, 고구마 식물체에 산화 스트레스를 처리하여 IbMT3 유전자의 발현이 어떻게 조절되는지 조사하였다. 제초제인 methyl viologen (MV)을 6, 12, 24시간 동안 처리했을 때, IbMT3 유전자의 발현은 6시간 후에 아주 강하게 유도되었고 그 이후에는 감소함을 알 수 있었다. 저온 스트레스($15^{\circ}C$)를 24, 48시간 동안 처리했을 때, IbMT3 유전자는 처리시간이 경과함에 따라 발현이 더 많이 유도되었다. 이로써, IbMT3 유전자는 환경 및 산화 스트레스에 반응하여 발현이 조절되는 유전자임을 알 수 있었다. IbMT3 isoform은 고구마 식물체 내에서 항산화제로써 작용할 가능성이 있을 뿐 아니라, 스트레스 하에서의 세포 적응 메커니즘에 중요한 기능을 할 것으로 사료된다.
Oxidative stress and inflammation are common to many pathological conditions. Defense mechanisms protect cells from oxidative stress, but can become over-activated following injury and inflammation. NF-${\kappa}B$ and Nrf2 transcription factors regulate proinflammatory and antioxidant gene expression, respectively. Studies have shown that many natural dietary compounds regulate NF-${\kappa}B$ and Nrf2, preventing inflammation and oxidative stress. Here, we report major compounds of Prunella vulgaris var. lilacina such as rosmarinic acid, oleanolic acid, ursolic acid and caffeic acid as a potential therapeutic for oxidative stress and inflammation. The major compounds exhibited high anti-inflammatory activity, inhibiting NO, PGE2 production, NF-${\kappa}B$ expression and activating Nrf2 expression. In addition, we examined the effect of major compounds on MafK expression. Among the compounds, oleanolic acid significantly decreased MafK expression and MafK-mediated p65 acetylation. These findings suggest that oleanolic acid as NF-${\kappa}B$ inhibitors can potentially be used in therapeutic applications for the treatment of oxidative stress-induced diseases.
An opportunistic human pathogen, Pseudomonas aeruginosa, contains the major catalase KatA, which is required to cope with oxidative and osmotic stresses. As an attempt to uncover the $H_2O_2$-dependent regulatory mechanism delineating katA gene expression, four prototrophic $H_2O_2$-sensitive mutants were isolated from about 1,500 TnphoA mutant clones of P. aeruginosa strain PA14. Arbitrary PCR and direct cloning of the transposon insertion sites revealed that one insertion is located within the katA coding region and two are within the coding region of oxyR, which is responsible for transcriptional activation of several antioxidant enzyme genes in response to oxidative challenges. The fourth insertion was within PA3815 (IscR), which encodes a homolog of the Escherichia coli iron-sulfur assembly regulator, IscR. The levels of catalase and SOD activities were significantly reduced in the iscR mutant, but not in the oxyR mutant, during the normal planktonic culture conditions. These results suggest that both IscR and OxyR are required for the optimal resistance to $H_2O_2$, which involves the expression of multiple antioxidant enzymes including KatA.
The involvement of antifreeze proteins (AFPs; type I and III) in the germination of low temperature-treated petunia seeds (cv. 'Mirage Rose') was investigated. The addition of AFPs (300 or 500 ㎍/l) in low-temperature treatment significantly promoted the germination of seeds compared with that in which AFPs were not added. Among all treatments, treatment with AFP I added at 300 ㎍/l showed the highest germination percentage and improved plant growth. The expression levels of antioxidant-related genes such as superoxide dismutase, peroxidase, and proline synthesis were associated with the germination of low temperature-treated seeds. Overall, this study demonstrated that AFP I may potentially function as a cold-protective agent for the germination of low temperature-treated seeds.
Objective: Cells have increased susceptibility to activation of apoptosis when suffering heat stress (HS). An effective supplementation strategy to mimic heat-induced apoptosis of bovine mammary epithelial cells (MECs) is necessary to maintain optimal milk production. This study aimed to investigate possible protective effects of the anti-apoptotic activity of 5-aminolevulinic acid (5-ALA) against HS-induced damage of bovine MECs. Methods: Bovine MECs were pretreated with or without 5-ALA at concentrations of 10, 100, and 500 µM for 24 h followed by HS (42.5℃ for 24 h and 48 h). Cell viability was measured with 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assays. Real-time quantitative polymerase chain reaction and Western blotting were used to explore the regulation of genes associated with apoptosis, oxidative stress, and endoplasmic reticulum (ER) stress genes. Results: We found that 5-ALA induces cytoprotection via inhibition of apoptosis markers after HS-induced damage. Pretreatment of bovine MECs with 5-ALA resulted in dramatic upregulation of mRNA for nuclear factor erythroid-derived 2-like factor 2, heme oxygenase-1, and NAD(P)H quinone oxidoreductase 1, all of which are antioxidant stress genes. Moreover, 5-ALA pretreatment significantly suppressed HS-induced ER stress-associated markers, glucose-regulated protein 78, and C/EBP homologous protein expression levels. Conclusion: 5-ALA can ameliorate the ER stress in heat stressed bovine MEC via enhancing the expression of antioxidant gene.
Disulfiram (DSF) and diethyldithiocarbamate (DDC), a reduced form of DSF, protect the liver against toxicant-induced injury through inhibition of cytochrome P450 2E1. The effect of DSF and DDC on the levels of major hepatic microsomal epoxide hydrolase (mEH) and glutathione S-transferase (GST) expression was comparatively studied, given the view that these enzymes are involved in terminal detoxification events for high energy intermediates of xenobiotics. Treatment of rats with a single dose of DSF (20-200 mg/kg, po) resulted in 2- to 15-fold increases in the mEH mRNA level at 24 hr with the ED$_{50}$ value being noted as 60 mg/kg. The mEH mRNA level was elevated ~15-fold at 24 hr after treatment at the dose of 100 mg/kg, whereas the hepatic mRNA level was rather decreased from the maximum at the dose of 200 mg/kg, indicating that DSF might cause cytotoxicity at the dose. In contrast to the effect of DSF, DDC only minimally elevated the mEH mRNA level at the doses employed. DSF moderately increased the major GST mRNA levels in the liver as a function of dose, resulting in rGSTA2, rGSTA3/5 or rGSTM1 mRNA levels being elevated 3- to 4-fold at 24 hr post-treatment, whereas the rGSTM2 mRNA level was not altered. DDC, however, failed to stimulate the mRNA levels for major GST subunits, indicating that the reduced form of DSF was ineffective in stimulating the GST the expression. The effect of other organosulfides including aldrithiol, 2, 2'-dithiobis(benzothiazole) (DTB), tetramethylthiouram disulfide (TMTD) and allyl disulfide (ADS) on the hepatic mEH and GST mRNA expression was assessed in rats in order to further confirm the increase in the gene expression by other disulfides. Treatment of rats with aldrithiol (100 mg/kg, po) resulted in a 16-fold increase in the mEH mRNA level at 24 hr post-treatment. DTB, TMTD and ADS also caused 5-, 9- and 12-fold increases in the rnRNA level, respectively, as compared to control. Thus, all of the disulfides examined were active in stimulating the mEH gene in the liver. The organosulfides significantly increased the rGSTA2, rGSTA3, rGSTA5 and rGSTM1 mRNA levels at 24 hr after administration. In particular, aldrithiol was very efficient in stimulating the rGSTA and rGSTM genes among the disulfides examined. These results provide evidence that DSF and other sulfides effectively stimulate the mEH and major GST gene expression at early times in the liver and that DDC, a reduced form of DSF, was ineffective in stimulating the expression of the genes, supporting the conclusion that reduced form(s) of organosulfur compound(s) might be less effective in inducing the mEH and GST genes through the antioxidant responsive element(s).
Correa, Mariana Goncalves;Couto, Jessica Soldani;Teodoro, Anderson Junger
Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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제17권9호
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pp.4199-4204
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2016
Cancer is a complex disease caused by a progressive accumulation of multiple genetic mutations. Consumption of fruits is associated with lower risk of several cancers, which is mainly associated to their phytochemical content. The use of functional foods and chemopreventive compounds seems to contribute in this process, acting by mechanisms of antioxidant, anti-inflammatory, anti-angiogenic and hormonal. The Psidium Guajava has high potential functional related to pigments who are involved in the process of cancer prevention by having antioxidant activity. The aim of the present review is to expose some chemical compounds from P. Guajava fractions and their association with anti-carcinogenic function. The evidences supports the theory of anticancer properties of P. Guajava, although the mechanisms are still not fully elucidated, but may include scavenging free radicals, regulation of gene expression, modulation of cellular signalling pathways including those involved in DNA damage repair, cell proliferation and apoptosis.
Piper nigrum L. (Piperaceae), which is a well-known food seasoning, has been used as a traditional medicine for the treatment of vomiting, abdominal pain, diarrhea and anorexia in Korea, China and Japan. Methanol extract from the fruit of P. nigrum was successively partitioned as n-hexane, methylene chloride, ethyl acetate, n-butanol and $H_2O$ soluble fractions. Among those fractions the ethyl acetate soluble fraction showed the most potent DPPH radical scavenging activity, and piperine was isolated from the ethyl acetate fraction. To know the antioxidant activity of piperine, we tested the activities of superoxide dismutase (SOD) and catalase together with oxidative stress tolerance and intracellular ROS level in Caenorhabditis elegans. To investigate whether piperine-mediated increased stress tolerance was due to regulation of stress-response gene, we quantified SOD-3 expression using transgenic strain including CF1553. Consequently, piperine enhanced SOD and catalase activities of C. elegans, and reduced intracellular ROS accumulation in a dose-dependent manner. Moreover, piperine-treated CF1553 worms exhibited significantly higher SOD-3::GFP intensity.
Ethyl acetate (EA) soluble fraction of the Berberis amurensis (Berberidaceae) methanol extract showed the potent DPPH radical scavenging activity through Caenorhabditis elegans model system. The EA fraction was measured for the activity of superoxide dismutase (SOD), catalase, and oxidative stress tolerance by using C. elegans along with reactive oxygen species (ROS) level. In addition, SOD-3 expression was conducted using a transgenic strain (CF1553) to confirm that the regulation of the stress response gene is responsible for the increased stress tolerance of C. elegans treated by the EA fraction. As a result, the EA soluble fraction of B. amurensis increased SOD and catalase activity, and decreased ROS accumulation in a dose-dependent manner. Furthermore, the EA fraction-treated CF1553 worm showed higher SOD-3::GFP intensity than the control worm.
Inflammatory lung diseases are characterized by chronic inflammation and oxidant/antioxidant imbalance. The sources of the increased oxidative stress in patients with chronic inflammatory lung diseases such as asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) derive from the increased burden of inhaled oxidants, and from the increased amounts of reactive oxygen species (ROS) generated by several inflammatory, immune and various structural cells of the airways. Increased levels of ROS produced in the airways is reflected by increased markers of oxidative stress in the airspaces, sputum, breath, lungs and blood in patients with lung diseases. ROS, either directly or via the formation of lipid peroxidation products such as 4-hydroxy-2-nonenal may play a role in enhancing the inflammation through the activation of stress kinases (JNK, MAPK, p38) and redox sensitive transcription factors such as NF-${\kappa}B$ and AP-1. Recent evidences have indicated that oxidative stress and pro-inflammatory mediators can alter nuclear histone acetylation/deacetylation allowing access for transcription factor DNA binding leading to enhanced pro-inflammatory gene expression in various lung cells. Understanding of the mechanisms of redox signaling, NF-${\kappa}B$/AP-1 regulation, the balance between histone acetylation and deacetylation and the release and expression of pro- and anti-inflammatory mediators may lead to the development of novel therapies based on the pharmacological manipulation of antioxidants in lung inflammation and injury. Antioxidants that have effective wide spectrum activity and good bioavailability, thiols or molecules which have dual antioxidant and anti-inflammatory activity, may be potential therapeutic agents which not only protect against the direct injurious effects of oxidants, but may fundamentally alter the underlying inflammatory processes which play an important role in the pathogenesis of chronic inflammatory lung diseases.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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