To obtain protoplasts of Colletotrichum acutatum JC24, conidia were inoculated onto cellophane membrane placed on PDA and incubated at $25^{\circ}C$ for 20 hrs under the dark condition. Cellophane membranes, where mycelia were incubated, were soaked into 2% lysing enzyme solution prepared with 0.02 M phosphate buffer (pH 7.0) including 1.2 M sorbitiol. After treatment in 2% enzyme solution for 2 - 3 hrs, it could be possible to harvest $2-3\;{\times}\;10^6$ protoplasts/mL. The effect of several fungicides on reversion ratio was determined by using the protoplasts obtained from C. acutatum JC24. Any protoplasts could not be reversed to mycelia on reversion PDA amended with $10\;{\mu}\;g\;mL^{-1}$ of propineb. With tebuconazole, inhibition ratio of protoplast reversion was 100 and 0.9% at 0.5 and $0.1\;{\mu}\;g\;mL^{-1}$, respectively, while inhibitory effect on mycelial growth was 85.1 and 75.7%. The inhibitory tendency of carbendazim on protoplast reversion was as same as mycelial growth. In the case of strobilurins, trifloxystrobin and kresoxim-methyl, they only could inhibit protoplast reversion of C. acutatum JC24, when salicylhydroxamic acid (SHAM) was amended into reversion PDA with strobilurins.
Elsinoe fawcettii causing citrus scab was suppressed by rhizobacterial strains such as Burkholderia gladioli MRL408-3, TRH423-3 and Pseudomonas fluorescens THJ609-3, TRH415-2 having antifungal activity. The leaf surface of Satsuma mandarin, which was pre-treated with the rhizobacterial strains, was observed by a scanning electron microscope (SEM) after inoculation with E. fawcettii. The number of lesions was reduced on the leaves pre-treated with the rhizobacterial strains compared to those of untreated leaves. Especially, the lesions numbers was apparently reduced on the leaves pre-treated with B. gladioli MRL408-3. The observation by SEM revealed that not only the germination rate but also the length of germ tube of the pathogen were decreased on the rhizobacterial strains pre-treated leaves. These inhibition of the fungal growth was more strongly expressed on the leaves pre-treated with commercial fungicide imibenconazole, by which the lesions was rarely found on the leaves. Based on these results, it was suggested that rhizobacterial strains may inhibit the germination and growth of the E. fawcettii on the surface of citrus leaves, resulting in decrease of disease severity.
In order to develop a environmentally friendly control protocol for managing tomato leaf mold disease in the field, we employed bacteria- and fungi-based commercially available microbial preparations. The field experiment was conducted from April to July in 2010. Average incidence rates tomato leaf mold caused by Fulvia fulva were 13.1% at the two plastic houses located in Jangsung, Jeonnam area. Initially 11 microbial preparations were tested for antifungal activity against F. fulva in vitro. Among them, 7 selected preparations showed to be inhibited the mycelial growth of the fungal pathogen over 50%. Four microbes suppressed disease incidence as much 50% under greenhouse condition. Eventually in the field two microbial products including Bacillus subtilis GB-0365 and B. subtilis KB-401 respectively were showed control value up to 71.8% for four times sprays from 20 days to 70 days after transplanting. Furthermore, the control value of three times spray program demonstrated 79.3%. Efficacy of the three and four spray programs was more effective than that of non-spray control treatment. Our results indicated that adjustment of application method of commercially available microbial preparation could be used to control a target plant disease as an effective and efficient crop protection system for organic farming.
Jo, Youn Sook;Park, Hye Bin;Kim, Ji Yun;Choi, Seong Min;Lee, Da Sol;Kim, Do Hoon;Lee, Young Hee;Park, Chang-Jin;Jeun, Yong-Chull;Hong, Jeum Kyu
The Plant Pathology Journal
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v.36
no.4
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pp.335-345
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2020
Tomato grey mould has been one of the destructive fungal diseases during tomato production. Ten mM of menadione sodium bisulfite (MSB) was applied to tomato plants for eco-friendly control of the grey mould. MSB-reduced tomato grey mould in the 3rd true leaves was prolonged at least 7 days prior to the fungal inoculation of two inoculum densities (2 × 104 and 2 × 105 conidia/ml) of Botrytis cinerea. Protection efficacy was significantly higher in the leaves inoculated with the lower disease pressure of conidial suspension compared to the higher one. MSB-pretreatment was not effective to arrest oxalic acid-triggered necrosis on tomato leaves. Plant cell death and hydrogen peroxide accumulation were restricted in necrotic lesions of the B. cinereainoculated leaves by the MSB-pretreatment. Decreased conidia number and germ-tube elongation of B. cinerea were found at 10 h, and mycelial growth was also impeded at 24 h on the MSB-pretreated leaves. MSB-mediated disease suppressions were found in cotyledons and different positions (1st to 5th) of true leaves inoculated with the lower conidial suspension, but only 1st to 3rd true leaves showed decreases in lesion sizes by the higher inoculum density. Increasing MSB-pretreatment times more efficiently decreased the lesion size by the higher disease pressure. MSB led to inducible expressions of defence-related genes SlPR1a, SlPR1b, SlPIN2, SlACO1, SlChi3, and SlChi9 in tomato leaves prior to B. cinerea infection. These results suggest that MSB pretreatment can be a promising alternative to chemical fungicides for environment-friendly management of tomato grey mould.
Bacillus polyfermenticus SCD (B. polyfermenticus SCD) has been appropriately used for the therapy of long-term intestinal disorders, because live strains in the form of active endospores can successfully reach the target intestine in humans. B. polyfermenticus SCD produces the most antibiotic-related materials. In the present study, B. polyfermenticus SCD was fermented with soybeans (BPFS) and its probiotic properties were investigated. B. polyfermenticus SCD and BPFS showed a broad spectrum of antimicrobial activity against pathogenic Gram-positive (Streptococcus parauberis, Streptococcus iniae, Lactococcus garviae) and Gram-negative (Flexibacter tractuosus, Vibrio harveyi, Vibrio vulnificus, Vibrio ordalii) bacteria and moulds (Aspergillus niger, Aspergillus oryzae). Sebastes schlegeli were used to examine survival rate and cleanup action by BPFS. Bacterial infection resulted in a mortality of up to 99% in the commercial fodder fed groups. BPFS both enhanced the growth rate of fry by improving their appetite and had cleaned by decreased eutrophication. Therefore, it seems appropriate that BPFS should be developed as an antibiotic replacement, favorable fodder additive, and antifungal material in fish farming systems.
Kwon, Song;Choi, Gyung Ja;Kim, Ki Sun;Kwon, Hye Jin
Horticultural Science & Technology
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v.32
no.4
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pp.507-516
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2014
The present study was conducted to determine the effect of electron beam irradiation on control of Botrytis cinerea and postharvest quality of cut roses. Electron beam doses of 0.1, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1, 2, 10, and 20 kGy were applied with a 10-MeV linear electron beam accelerator (EB Tech, Korea). Electron beams inhibited spore germination and mycelial growth of B. cinerea with increasing irradiation doses. Conidia of B. cinerea were more tolerant to irradiation than were mycelia: the effective irradiation doses for 50% inhibition ($ED_{50}$) of spore germination and mycelial growth were 2.02 kGy and 0.89 kGy, respectively. In addition, electron beam irradiation was more effective in reducing mycelial growth of B. cinerea at $10^{\circ}C$ than at $20^{\circ}C$. Analysis of in vivo antifungal activity revealed that elevated irradiation doses exhibited increased control efficacy for tomato gray mold. Flower longevity and fresh weight of cut roses decreased when the irradiation dose was increased. In addition, flower bud opening tended to be inhibited in a dose-dependent manner. Although 'Decoration', 'Il se Bronze', 'Queen Bee', and 'Revue' roses tolerated and maintained overall postharvest quality up to 0.4 kGy, 'Vivian' did not, demonstrating that the irradiation sensitivity of cut roses varies according to cultivar.
Bacillus spp. isolated from mushroom medium wastes were evaluated for their biocontrol potentials on control of Sclerotinia rot of lettuce. The Bacillus isolates were more effectively obtained from waste suspension when directly added into nutrient agar(NA) medium than plating on the agar medium. Totally 42 isolates obtained from the wastes B23 and B42 showed highest antifungal activity against eight fungal pathogens such as Sclerotinia sclerotiorum, Rhizoctonia solani, Pythium ultimum, Phytophthora capsici, Fusarium oxysporum, Colletotrichum gloeosporioides, Cladosporium cucumerinum, and Botrytis cinerea and B23 and B42 were finally selected for further studies. Optimal concentration of the isolates was $10ml(10^7cfu/ml)$ to suppress the Sclerotinia rot of lettuce. Supplements such as starch, glycerol, and egg-yolk successfully maintained the bacterial population for 30 days in vitro and increased bio-control potentials against the disease. The bacterial isolate B23 alone showed 72% control value, furthermore it presented 95% control value when supplemented with 0.2% of starch, glycerol, and egg-yolk. The promising Bacillus isolates B23 and B42 were identified as Brevibacillus brevis and Bacillus stearothermophillus, respectively, based on morphological and physiological characteristics according to API database.
Shin, Teak Soo;Yu, Nan Hee;Lee, Jaeho;Choi, Gyung Ja;Kim, Jin-Cheol;Shin, Chul Soo
The Plant Pathology Journal
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v.33
no.3
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pp.337-344
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2017
To develop a commercial product using the mycoparasitic fungus Simplicillium lamellicola BCP, the scale-up of conidia production from a 5-l jar to a 5,000-l pilot bioreactor, optimization of the freeze-drying of the fermentation broth, and preparation of a wettable powder-type formulation were performed. Then, its disease control efficacy was evaluated against gray mold diseases of tomato and ginseng plants in field conditions. The final conidial yields of S. lamellicola BCP were $3.3{\times}10^9conidia/ml$ for a 5-l jar, $3.5{\times}10^9conidia/ml$ for a 500-l pilot vessel, and $3.1{\times}10^9conidia/ml$ for a 5,000-l pilot bioreactor. The conidial yield in the 5,000-l pilot bioreactor was comparable to that in the 5-l jar and 500-l pilot vessel. On the other hand, the highest conidial viability of 86% was obtained by the freeze-drying method using an additive combination of lactose, trehalose, soybean meal, and glycerin. Using the freeze-dried sample, a wettable powder-type formulation (active ingredient 10%; BCP-WP10) was prepared. A conidial viability of more than 50% was maintained in BCP-WP10 until 22 weeks for storage at $40^{\circ}C$. BCP-WP10 effectively suppressed the development of gray mold disease on tomato with control efficacies of 64.7% and 82.6% at 500- and 250-fold dilutions, respectively. It also reduced the incidence of gray mold on ginseng by 65.6% and 81.3% at 500- and 250-fold dilutions, respectively. The results indicated that the new microbial fungicide BCP-WP10 can be used widely to control gray mold diseases of various crops including tomato and ginseng.
Lee, Yong Yoon;Lee, Younmi;Kim, Young Soo;Kim, Hyun Sup;Jeon, Yongho
Research in Plant Disease
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v.26
no.1
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pp.8-18
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2020
Red pepper, one of the major economic crops in Korea, is being affected by anthracnose disease caused by Colletotrichum acutatum. To control this disease, an antagonistic bacterial strain, Bacillus subtilis YGB36 identified by 16S rDNA sequencing, physiological and biochemical analyses is used as a biological control agent. In vitro screening revealed that the strain YGB36 possess strong antifungal activity against the pathogen Cylindrocarpon destructans. The strain exhibited cellulase, protease, amylase, siderophore production and phosphate solubility. In vitro conidial germination of C. acutatum was most drastically inhibited by YGB36 cell suspensions (106 cfu/ml) or culture filtrate. Development of anthracnose symptoms was reduced on detached immature green pepper fruits by treatment with cell suspensions, and its control value was recorded as 65.7%. The YGB36 bacterial suspension treatment enhanced the germination rate of red pepper seeds and promoted root development and growth under greenhouse conditions. The in vitro screening of fungicide and insecticide sensitivity test against YGB36 revealed that the bacterial growth was not affected by any of the insecticides, and 11 fungicides out of 21 used. Collectively, our results clearly suggest that the strain YGB36 is considered as one of the potential biocontrol agents against anthracnose disease in red pepper.
Keum, Soo Yeon;Park, Sang Mi;Jegal, Kyung Hwan;Hwangbo, Min;Cho, Il Je;Park, Chung A;Kim, Sang Chan;Jee, Seon Young
Herbal Formula Science
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v.24
no.4
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pp.243-257
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2016
Objectives : Illicium verum Hook. f. has been known to possess antimicrobial, antioxidant, antifungal, anti-inflammatory, insecticidal, analgesic, sedative, convulsive activities, it has been rarely conducted to evaluate the immuno-biological activity. The present study was examined to evaluate the anti-inflammatory effects of the Illicium verum Hook. f. water extracts (IVE) in vivo and in vitro. Methods : Cell viability was measured by MTT assay. The relative levels of NO were measured with Griess reagent. iNOS, COX-2, $NF-{\kappa}B$ and target proteins were detected by immunoblot analysis, and levels of cytokines were analyzed by ELISA kit. Anti-edema effect was determined in the carrageenan (CA)-induced paw edema model in rats. Results : All dosages of IVE used in MTT assay had no significant cytotoxicity. The increases of NO production and iNOS expression were detected in LPS-treated cells compared with control. However, these increases were attenuated by treatment with IVE. Also, IVE reduced the elevated production of $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\beta}$ and IL-6 by LPS. IVE inhibited the $p-I{\kappa}B$ and translocation of $NF-{\kappa}B$ to nuclear. Furthermore, IVE significantly inhibited the increases of hind paw swelling, skin thicknesses and inflammatory cell infiltrations induced by CA injection. Therefore, IVE will be favorably inhibited the acute edematous inflammations. Conclusion : These results provide evidences that anti-inflammatory effect of IVE is partly due to the reduction of some inflammatory mediators by suppression of $NF-{\kappa}B$ pathway.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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