RP-HPLC에서 주요 변수인 이동상의 조성과 컬럼의 종류를 변화시켜 난백 단백질을 실험하였다. C4, C8 C18 컬럼을 비교 실험하여 C18 컬럼에서 가장 많은 피크를 보여 C18 컬럼을 선택하였다. 등용매 용리에서 ACN : water의 조성이 50 : 50에서 가장 많은 피크를 보여 이 결과를 토대로 기울기 용리를 하여 실험하였다. 기울기 용리에서 얻어진 4가지 피크를 확인하기 위하여 단일성분인 lysozyme와 ovalbumin의 체류시간을 측정하여 확인하였고 논문을 통해 2가지 피크를 예측할 수 있었다.
The possibilities for HPLC analysis of lipids have been revolutionised by the availability of evaporative light-scattering detectors, with which the response is independent of the nature of the mobile phase and does not depend On the presence of specific chromophores in the lipids. It was thus possible to develop an HPLC procedure, involving ternary gradient elution, for separating all the lipid classes in animal tissues in a single step. Although reversed-phase HPLC has been widely used for the analysis of molecular species of lipids, sliver ion chromatography can be a valuable alternative. For example, a stable silver ion column for HPLC was developed which permitted resolution of molecular species of triacylglycerols, even from such complex samples as fish oils, again With light-scattering detection and gradient elution. The capacity for HPLC resolution of diastereomeric diacyl-sn-glycerol derivatives, prepared from triacylglycerols. has lead to a new simple method for stereospecific analysis of the latter.
난백에 함유된 lysozyme은 용균작용을 하며 ovalbumin은 면역계에서 항원으로써 역할을 한다. 난백분석에는 일반적으로 전기영동, 겔 투과 크로마토그래피, reversed-phase HPLC(RP-HPLC)를 사용하는데 신속한 분석을 위해 RPHPLC가 사용된다. HPLC 컬럼으로 C18 컬럼(Agilent, USA)을 사용하였다. 최적의 분리조건을 찾기 위해 이동상의 조성과 온도를 변화하였고 용량인자, 분리도를 계산하여 그 값을 비교하였다. 등용매 용리에서 acetonitrile(ACN), distilled ater(DW), trifluoroacetic acid(TFA)의 이동상 부피비를 30/70/0.1~60/40/0.1로 ACN 부피비를 10%씩 증가시키며 실험하였고 이 때 온도는 $20^{\circ}C$이었다. 기울기 용리에서는 ACN과 증류수의 비율을 20분 동안 10/90~60/40으로 증가시켰고 20, 30, $40^{\circ}C$의 온도변화를 주었다. 등용매 용리에서 이동상 조성이 50/50/0.1일 때 세 개의 피크로 분리되었고 개의 피크 중 첫 번째 피크가 lysozyme, 세 번째 피크가 ovalbumin임을 확인하였다. 기울기 용리에서는 온도가 $30^{\circ}C$일 때 네 개의 피크가 나왔으며 네 개의 피크 중 첫 번째 피크가 lysozyme, 세 번째 피크가 ovalbumin임을 확인하였다.
본 연구에서는 조제분유 중에 영양강화를 위해 첨가하는 비타민 A와 E의 함량측정을 위해 각기 다른 실험방법을 사용하지 않고 2가지 비타민을 동시에 분석하는 신속분석법을 위와 같이 수행하였다. 비타민 A와 E를 유기용매로 동시에 신속하게 추출하고 역상컬럼과 PDA-HPLC를 이용하여 각각의 성분으로 모두 분리한 후 동시에 검출하는 방법을 사용하였다. 국제표준인증물질 및 조제분유를 시료로 사용하여 본 연구의 실험방법에 의해 측정된 값을 식품공전방법 및 AOAC방법에 의한 측정값과 비교한 결과 유사한 측정결과를 얻을 수 있었다. 또한 본 연구의 실험방법에 의하여 수행한 국제인증표준물질중의 비타민 A와 E의 함량측정 결과는 인증된 표준값내의 결과를 보여주었다. 따라서, 비타민 A또는 E를 강화한 분유, 이유식 등의 분말 유제품 중에서 비타민 A와 E의 함량을 측정 하고자 할 때 한정된 장비와 인력으로 각각의 2가지 실험방법을 수행하기가 어렵거나 시간단축이 필요한 경우, 본 연구에서 수행한 실험방법과 같이 시료 전처리를 간단하고 신속하게 수행할 뿐만 아니라 역상컬럼과 PDA-HPLC에 의해 비타민 A와 E를 동시에 분석함으로써 보다 효율적인 분석을 진행 할 수 있을 것으로 사료된다.
Kim, Hyung-Soo;Jang, Duck-Kyu;Woo, Dong-Kyun;Woo, Kang-Lyung
Preventive Nutrition and Food Science
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제7권1호
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pp.12-17
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2002
Simultaneous determination of nine water-soluble vitamins contained in multi-nutrient tablets was carried out by reversed phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) equipped with analytical $C_{18}$ column and UV (270 nm) detector. Those standard vitamins were successfully separated within 23 minutes by gradient elution with solvent A (0.5 M potassium phosphate monobasic) and solvent B (0.25 M potassium phosphate monobasic-methanol, 1:1). Calibration curves showed good linealities with correlation coefficients (> 0.92) in tested ranged respectively. The detection limits were considered to be 2.1 ng for ascorbic acids 60 ng for Vit B$_{6}$ 3 ng for p-aminobenzoic acid, 9 ng for niacinamide, 9 ng for thiamin, 5.0 ng for folic acid and 1.5 ng for riboflavin at 0.05 a.u.f.s. Solid phase extraction through Sep-Pak (C$_{18}$ ) cartridge was successfully applied for purification of water soluble vitamins in commercial multi-nutrient tablets.ts.
본 연구에서는 ion-pair reversed-phase high performance liquid chromatography (IP-RP-HPLC)방식을 이용한 denaturing high performance liquid chromatography (DHPLC)방법을 사용하여 기관지 천식을 조절하는 ${\beta}_2$-교감신경수용체 유전자의 돌연변이를 검출하였다. 50명의 천식 환자의 혈액에서 genomic DNA를 추출하여 중합효소연쇄반응 (polymerase chain reaction, PCR)을 이용해 증폭하고, 그 산물을 DHPLC로 분석한 결과, 50개의 시료 가운데 15개 (30%)의 돌연변이를 검출하였다. 최종적으로 유전자 염기서열결정법을 통해 DHPLC의 돌연변이 검출률이 정확함을 확인하였다.
A reversed phase HPLC analysis of atorvastatin (AS) standard solution was performed using diclofenac (DF) as internal standard. Column oven temperature, flow rate and the composition of the mobile phase were varied in order to determine a practical system setup using a C18 column and UV detector. Two C18 columns of different length were compared regarding their influence on the AS peak shape. Based on these preliminary experiments a validation study was performed utilizing a C18 column at $62^{\circ}C$ with a mobile phase consisting of sodium phosphate buffer (0.05 M, pH 4.0), methanol and acetonitrile (40:50:10, v/v/v). The detection limit for AS was $0.1{\mu}g/ml$ and inter- and intra-day calibration curves were linear over a concentration range of $0.2-50{\mu}g/ml$. Accuracy and precision were satisfactory in the AS concentration range of $0.5-50{\mu}g/ml$.
A reversed phase HPLC method was established for quantitative determination of lignans including schizandrin (1), gomisin A (2), deoxyschizandrin (3), gomisin N (4), and wuweizisu C (5) from Schizandra chinensis using a binary gradient of acetonitrile and water as a mobile phase with UV detection at 254nm. In result, contents of schizandrin (1), gomisin A (2), deoxyschizandrin (3), gomisin N (4), and wuweizisu C (5) in Schizandra chinensis from Moonkyung were 8.41${\pm}$0.30, 3.01${\pm}$0.13, 1.06${\pm}$0.05, 7.69${\pm}$0.30, and 1.68${\pm}$0.06 mg/g, respectively.
To determine the concentrations of microcystins present in lake water or in tap water using high performance liquid chromatography, it is necessary to concentrate a large volume of water samples (about 20 L) into very small volume (0.1-0.3 mL). Concentration can be conveniently done when disc type solid phase extraction (SPE) apparatus is used. Using this apparatus we have investigated the recovery rates of three kinds of microcystins, RR, YR, LR. The recovery rates were relatively low and the reproducibilities were not good either. It is expected, however, that the appropriate selection of the disc conditioning and eluting solvents and reproducible reconcentration process after SPE will improve both the recovery rates and the reproducibilities.
코발트와 니켈 이온을 4-(2-피리딜아조)레조루신올(PAR) 리간드와 킬레이트를 만들고 이 금속-PAR 킬레이트들을 역상 모세관 고성능 액체 크로마토그래피(RP-CpHPLC)로 분리와 정량을 하였다. 컬럼은 주로 Vydac C4 모세관 컬럼을, 이동상은 아세토니트릴(MeCN) 수용액을 사용하였다. 머무름 인자, k와 봉우리 높이에 대한 이동상의 pH와 MeCN 농도의 영향을 검토하여 분리와 정량의 최적 조건을 얻었다. 결과, 분리의 최적 이동상은 22.5% MeCN, pH 5.6이었고, Co(II) 이온의 정량은 이 조건에서 할 수 있었다. 그러나 Ni(II) 이온의 정량은 분리와 봉우리의 높이로부타 22.5% MeCN, pH 7.20이 보다 적합함을 확인하였다. 각각의 조건에서 Co(II)와 Ni(II) 이온의 검출한계(D.L., S/N=3)는 각각 $2.0{\times}10{-7}$ M(14.9 ppb)와 $1.0{\times}10{-6}$ M(59.2 ppb)였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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