패혈증은 병원성 감염에 의해 여러 장기에 나타나는 전신성 염증 반응으로, 현재로서는 유망한 치료제가 없다. Signal transducer and activator of transcription 3 (STAT3)은 세포 신호전달 전사 인자로서 항염증 및 염증 반응과 관련된 다양한 세포의 생물학적 과정에서 중요한 역할을 한다. Niclosamide는 FDA에서 승인된 구충제로 STAT3 조절에 관여한다고 알려져 있다. C57BL/6 마우스에 복강 주사로 지질 다당체 (lipopolysaccharide, LPS)를 투여해 패혈증을 유발하였고, Niclosamide를 LPS 주사 2시간 후에 경구 투여하였다. 본 연구에서 Niclosamide가 LPS로 유발된 패혈증 모델의 생존률과 폐 손상을 완화시켰고, 혈청 내 interleukin (IL)-6, 종양괴사인자(tumor necrosis factor-α, TNF-α), IL-1β, AST, ALT, LDH 수치를 유의하게 감소시켰다. 또한 폐 조직 면역 블롯을 통해 PI3K, AKT, NF-κB, STAT3 신호 전달 경로가 Niclosamide에 의해 조절되는 것을 확인하였다. Niclosamide는 LPS를 자극한 RAW 264.7 세포주에서 IL-6, TNF-α, IL-1β와 같은 염증성 사이토카인의 발현을 감소시켰으며, 또한 STAT3의 인산화를 감소시켰다. 본 연구를 통해 Niclosamide에 의한 STAT3 조절이 염증 반응을 억제함으로써 패혈증 모델에 대한 새로운 치료 전략을 제시하였다.
본 연구는 해조류 중에서도 홍조류인 주름까막살 에탄올 추출물(GCEE)의 항염증 효과를 확인하기 위한 실험으로 proinflammatory cytokines의 분비량 및 iNOS, COX-2, $NF-{\kappa}B$와 MAPKs의 발현량을 관찰하고 마우스모델에서 항염증 효과를 확인하였다. GCEE가 세포 생존율에 있어 독성을 나타내지 않음을 MTT assay를 통해 확인한 후 같은 농도로 추후실험을 진행하였다. NO 분비량이 GCEE에 의해 농도 의존적으로 감소하였으며 전염증성 매개물질인 사이토카인(IL-6, $TNF-{\alpha}$ 및 $IL-1{\beta}$)의 분비량 또한 유의적으로 감소하였다. 이러한 결과가 전염증성 매개인자의 전사인자인 $NF-{\kappa}B$와 MAPKs 경로에 의한 것인지 확인하기 위하여 발현량을 관찰한 결과, GCEE가 LPS 처리로 현저히 증가한 염증 관련 효소인 iNOS와 COX-2의 단백질 발현을 농도 의존적으로 유의성 있게 억제하였고 전사인자인 $NF-{\kappa}B$ 및 MAPKs의 발현을 억제하였다. 또한, GCEE는 croton oil로 부종을 유발한 마우스모델에서 귀 부종 억제 효과를 나타내었고 250 mg/kg 농도에서 조직의 경피 및 진피 두께의 발달을 prednisolone 50 mg/kg 처리구와 유사한 정도까지 현저히 억제하고 염증성 세포인 mast cell의 침윤 억제 효과도 확인하였다. 이를 통해 주름까막살 에탄올 추출물은 염증반응의 전사인자인 $NF-{\kappa}B$와 MAPKs의 발현을 조절함으로써 iNOS와 COX-2의 발현을 억제하고 그에 따라 전염증성 매 개인자인 NO, IL-6, $TNF-{\alpha}$ 및 $IL-1{\beta}$의 분비를 억제하여 항염증 활성을 가지는 것을 확인하였으며, 이 결과를 종합해 볼 때 주름까막살 에탄올 추출물이 염증 치료제의 소재로 이용될 가치가 충분할 것으로 생각한다.
본 연구는 예로부터 식용 및 약용으로 널리 이용되어지는 버섯의 기능성 소재로서의 타당성을 검증하기 위하여 버섯 추출물의 유효성분 함량(polyphenol, $\beta$-glucan)과 저분자 및 고분자 분획물의 항산화 활성, 혈전용해 활성, 면역증강 및 항염증 활성 등을 측정하였다. 그 결과 전체 수율은 식용버섯이 약용버섯보다 높게 나타났으며, $\beta$-glucan의 함량은 표고버섯(33.5%)이 가장 높게 나타났다. Polyphenol 함량은 약용버섯인 상황버섯(LMW)이 233.23 mg/g로 가장 높게 나타났으며, 애느타리버섯(LMW) 12.18 mg/g, 송이버섯(LMW) 11.72 mg/g 순으로 확인되었다. 버섯 추출물의 항산화 능력을 측정하기 위한 전자공여능 측정 결과는 ascorbic acid 0.5 mg/mL에서 95.91%의 저해율을 나타낸 것에 비하여 상황버섯(LMW, 10 mg/mL)이 80.74%의 억제활성을 나타내었다. SOD 유사활성 측정에서는 대부분의 버섯 추출물에서 큰 차이를 나타내지 않았으며, 아질산염 소거능 측정에서는 pH의 감소에 따라 소거능이 증가하였고, 상황버섯(LMW)이 가장 높은 소거능을 나타내었다. 이처럼 버섯 추출물의 항산화능력 측정에서 phenol성 물질을 많이 함유하고 약용버섯으로 사용되는 상황버섯이 식용버섯(송이버섯, 새송이버섯, 양송이버섯, 느타리버섯, 애느타리버섯, 표고버섯, 팽이버섯) 보다 LMW 분획에서 우수한 항산화 능력을 갖는 것을 알 수 있었다. 그러나 혈전용해 활성을 측정한 결과에서 대부분의 LMW 분획물들은 혈전용해 활성을 갖지 않았으며, 송이 버섯(HMW, 50 mg/mL)이 60.4%의 가장 높은 혈전용해 활성을 나타내었다. 또한 RAW 264.7 cell을 이용한 대식세포 활성능(NO 생성)을 측정한 결과 LMW 분획에서는 대식세포 활성능력이 거의 없는 것으로 조사되었으며, 대조군인 LPS 500 ng/mL를 첨가한 상태에서 $32.9\;{\mu}M$의 NO를 생성하는 것과 비교하여, 표고버섯(HMW, $500\;{\mu}g/mL$) $39.86\;{\mu}M$, 송이버섯 $35.17\;{\mu}M$의 NO 생성능을 나타내었다. 또한 약용버섯인 상황버섯(HMW)은 NO 생성능력이 거의 나타나지 않았다. 반면에 RAW 264.7 cell로부터 LPS에 의해 유도된 NO 생성 저해활성을 측정한 결과 상황버섯(LMW) $500\;{\mu}g/mL$의 농도에서 NO의 생성을 100% 저해하였고, 새송이버섯(LMW)은 $50\;{\mu}g/mL$에서 58.14%, $500\;{\mu}g/mL$에서 67.79%의 저해활성을 나타내었다. 이상의 결과로부터 phenol 성분을 다량 함유하고 있는 상황버섯(LMW)은 일반적인 식용버섯에 비해 항산화능이 우수함을 알 수 있었으며, 혈전용해능력(송이버섯, I)과 면역증강(표고버섯, VII) 그리고 항염증(새송이버섯, II)에서는 식용버섯의 HMW 분획물이 우수한 활성을 나타내는 것을 확인하였다.
본 연구는 프랑킨센스를 이용하여 전염증성 사이토카인의 분비 억제 효과를 입증하고자한다. 이에 LPS를 처리한 마우스의 대식세포를 이용하여 $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\beta}$와 같은 전염증성 사이토카인의 분비 변화를 살펴보기 위해 다자인하였다. 세포에 대한 독성 실험은 MTS인 CellTiter 96 AQueous One solution cell proliferation 시약을 이용하여 실시하였으며 전염증성 사이토카인의 분비는 ELISA kit을 사용하여 측정하였다. 그 결과 프랑킨센스는 10ug/ml-1000ug/ml에서 세포독성이 없었으며 전염증성 사이토카인인 $TNF-{\alpha}$, $IL-1{\beta}$생성을 유의성있게 억제시켰다. 전염증성 사이토카인의 분비 억제효과는 프랑킨센스의 항 염성을 입증하기 위한 기초적인 생리 활성 자료와 기능성 소재로 다양한 융합적인 활용이 가능하다고 사료된다.
In this study, we attempted to isolate novel mast cell-stimulating molecules from Staphylococcus aureus. Water-soluble extract of S. aureus cell lysate strongly induced human interleukin-8 in human mast cell line-1 and mouse interleukin-6 in mouse bone marrow-derived mast cells. The active molecule was purified to homogeneity through a $C_{18}$ reverse phase HPLC column. By determination of its structure by MALDITOF and $^1H$- and $^{13}C$-NMR, adenosine was revealed to be responsible for the observed cytokine induction activities. Further studies using 8-sulfophenyl theophylline, a selective adenosine receptor blocker, verified that purified adenosine can induce interleukin-8 production via adenosine receptors on mast cells. Moreover, adenosine was purified from S. aureus-engulfed RAW264.7 cells, a murine macrophage cell line, used to induce phagocytosis of S. aureus. These results show a novel view of the source of exogenous adenosine in vivo and provide a mechanistic link between inflammatory disease and bacterial infection.
Lee, Young Ji;Han, Jeong Yoon;Lee, Chang Geun;Heo, Kyu;Park, Se Il;Park, Yoo Soo;Kim, Joong Sun;Yang, Kwang Mo;Lee, Ki-Ja;Kim, Tae-Hwan;Rhee, Man Hee;Kim, Sung Dae
Journal of Ginseng Research
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제38권3호
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pp.208-214
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2014
Background: In previous work, we reported that Korean Red Ginseng saponin fraction (RGSF) showed anti-inflammatory activities in vitro and in vivo. Methods: The present study investigated the radioprotective properties of RGSF by examining its effects on ionizing radiation (IR)-enhanced and lipopolysaccharide (LPS)-mediated inflammatory responses in murine macrophage cells. Results: RGSF induced strong downregulation of IR-enhanced and LPS-induced proinflammatory responses such as nitric oxide (NO) production (Inhibitory Concentration $50(IC_{50})=5.1{\pm}0.8{\mu}M$) and interleukin-$1{\beta}$ levels. RGSF was found to exert its radioprotective effects by inhibition of a signaling cascade that activated checkpoint kinase 2enuclear factor-${\kappa}B$. In addition, RGSF strongly inhibited IR-enhanced LPS-induced expression of hemoxyganase-1, implying that the latter may be a potential target of RGSF. Conclusion: Taken together, our data suggest that RGSF can be considered and developed for use as an effective radioprotective agent with minimal adverse effects.
Jung, Hyun Ah;Karki, Subash;Ehom, Na-Yeon;Yoon, Mi-Hee;Kim, Eon Ji;Choi, Jae Sue
Preventive Nutrition and Food Science
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제19권4호
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pp.281-290
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2014
The aim of the present study was to evaluate the anti-diabetic, anti-inflammatory, antioxidant potential, and total phenolic content (TPC) of green and red kohlrabi cultivars. Anti-diabetic and anti-inflammatory activities were evaluated via protein tyrosine phosphatase (PTP1B) and rat lens aldose reductase inhibitory assays and cell-based lipopolysaccharide (LPS)-induced nitric oxide (NO) inhibitory assays in RAW 264.7 murine macrophages. In addition, scavenging assays using 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical, 2,2'-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) diammonium salt (ABTS) radical, and peroxynitrite ($ONOO^-$) were used to evaluate antioxidant potential and TPC was selected to assess phytochemical characteristics. Between the two kohlrabi cultivars, red kohlrabi (RK) had two times more TPC than green kohlrabi (GK) and showed significant antioxidant effects in DPPH, ABTS, and $ONOO^-$ scavenging assays. Likewise, methanol (MeOH) extracts of RK and GK inhibited LPS-induced NO production in a dose dependent manner that was further clarified by suppression of iNOS and COX-2 protein production. The MeOH extracts of RK and GK exhibited potent inhibitory activities against PTP1B with the corresponding $IC_{50}$ values of $207{\pm}3.48$ and $287{\pm}3.22{\mu}g/mL$, respectively. Interestingly, the RK MeOH extract exhibited significantly stronger anti-inflammatory, anti-diabetic, and antioxidant effects than that of GK MeOH extract. As a result, our study establishes that RK extract with a higher TPC might be useful as a potent anti-diabetic, antioxidant, and anti-inflammatory agent.
Water Fermented and Ethanol Fermented Extracts from Rhei Radix et Rhizoma exhibit potent anti-inflammatory activity with an unknown mechanism. To elucidate the molecular mechanisms of W-FR and E-FR on pharmacological and biochemical actions in inflammation, we examined the effect of W-FR and E-FR on pro-inflammatory mediators in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated macrophages. The investigation focused on whether FR inhibited nitric oxide (NO), tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$), interleukin-6 (IL-6) and the expressions of iNOS, COX-2 in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. We found that FR inhibited LPS-induced NO, TNF-${\alpha}$ and IL-6 productions as well as the expressions of iNOS and COX-2. These results suggest that W-FR and E-FR have inhibitory effects on LPS-induced TNF-${\alpha}$, NO, and IL-6 production, as well as the expressions of iNOS and COX-2 in the murine macrophage.
In the present studies, we examined effect of chamomile flowers extract (CH-Ex), which has traditionally been used as antiphlogistics in Europe for many centuries, against Candida albicans-caused septic arthritis. Candida albicans is a major etiological agent among fungal septic arthritis. This effect was investigated in a murine model of the septic arthritis. That is, mice that were given an emulsion form of C. albicans cell wall (CACW) via footpad route were treated intraperitoneally with the CH-Ex for 3 times every 3 days. Degrees of the footpad-swellings were measured with dial gauger. Data showed that the CH-Ex resulted in the reduction of swelling. For instance, at Day 9 when swelling reached the highest peak, there was up to app. 60% reduction of edema in mice injected with the CH-Ex, compared to that of the control mice that received no treatment (P<0.05). This therapeutic anti-arthritic activity appeared to be mediated by inhibitions of NO (nitric oxide) production from activated RAW264.7 macrophages and proliferation of Con A-treated T lymphocytes. Analysis by HPLC revealed that the CH-Ex contained eight polyphenolic compounds including chlorogenic acid (CRA) and rutin. We have reported the CRA and rutin respectively have the anti-arthritic activity. This correlation implicates that CRA and rutin in the CH-Ex may be responsible for the activity. Combined all together, the CH-Ex has anti-arthritic activity against C. albicans-caused septic arthritis, possibly by inhibiting NO production and proliferation of T cells. This activity seems to be contributed by, at least, CRA and rutin among the compounds in the CH-Ex.
본 연구에서는 아직 까지 연구되지 않은 말굽버섯의 면역증강 효과를 설치류 대식세포에서 검증하였다. 연구결과에 따르면 말굽버섯 메탄올 추출물(FFE)의 처리에 의해 대식세포의 산화질소의 생성이 농도 의존적으로 증가되었다. 산화질소의 생성이 증가된 이유는 산호질소의 생성을 유도하는 효소인 iNOS의 발현이 FFE에 의해 증가되었기 때문이었다. FFE는 면역반응에 중요한 cytokine인 TNF-${\alpha}$, IL-$1{\beta}$, IL-6의 생성도 농도 의존적으로 증가 시켰다. 이 같은 FFE의 면역증강 활성은 면역활성을 중계하는 세포 신호전달분자 중 NF-${\kappa}B$와 MAP Kinases의 활성증가에 의한 것임을 확인 할 수 있었다. 본 연구 결과는 말굽버섯의 임상적 적용에 중요한 자료로 활용될 것이며, 만일 말굽버섯으로부터 분리한 단일성분에서 면역증강활성을 검증 하게 된다면 새로운 식 의약소재로서의 가치를 인정 받을 수 있을 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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