본 연구에서는 우리나라에서 분리된 E. tarda KFE와 일본에서 분리된 E. tarda Edk-2 두 균주의 항혈청을 만들어 생산된 항체의 특성과 방어효과를 분석하고자 하였다. 우리나라에서 많이 양식되어지고 있는 담수어인 미꾸라지를 사용하여 위의 두 가지 분리균주의 항원성에 있어서의 차이점을 조사하고자 하였다. 미꾸라지를 E. tarda 두 균주의 FKC로 각각 면역시킨 후의 혈청내 특이 항체량은 E. tarda KFE 균주로 면역시켰을 때에 비해 E. tarda Edk-2 균주로 면역시켰을 때 훨씬 높은 수치를 나타내었다. 그리고 교차반응 분석에서는 두 균주 간에 공통 항원이 미약하게 존재하는 것을 확인하였으며 미꾸라지 항혈청의 살균효과를 보았을 때에는 두 종류의 항혈청 모두에서 항체의 살균 능력이 있음을 확인하였다. 감염 예방 효과를 가지고 있는 polysaccharide-bound protein (PS-K)을 미꾸라지에 주사한 후 1주째에 E. tarda KFE 분리균주로 공격 실험을 실시하여 본 결과 누적 폐사율이 감소하였으므로, PS-K의 투여는 E. tarda를 포함한 세균성 감염에 대한 효과적인 감염 대책 방안의 하나가 될 수 있음을 확인하였다.
단백질 결합 다당류인 PS-K가 Edwardsiella tarda의 감염에 대한 나일 틸라피아(Oreochromis niloticus)의 저항력 증강 효과에 대한 능력분석을 실시하였다. PS-K를 0.1 mg/g 어체중의 농도로 처리한 나일 틸라피아에 대하여 여러 농도외 E. tarda로 공격 실험을 하였다. 저농도($1.2{\times}10^7$ 그리고 $1.2{\times}10^8$ cfu/틸라피아)의 공격에 대하여 PS-K 처리구는 100% 생존율을 나타내었고 대조구는 각각 50%와 100%의 폐사율을 보여 주었다. 그러나 고농도의 E. tarda($1.2{\times}10^9$ 그리고 $1.2{\times}10^{10}$ cfu/틸라피아) 공격에 대해서는 약간의 수명 연장효과만 있었을뿐 대조구와 같이 100%의 폐사율을 보여 주었다. E. tarda($1.2{\times}10^7$ cfu/틸라피아) 공격 1주일 후 PS-K를 복강 투여한 나일 틸라피아는 100%의 생존율을 나타내었으나 대조구는 50% 생존율을 나타내어 PS-K가 가지고 있는 치료제로서의 잠재력을 보여 주었다. 그리고 PS-K 투여 1주일 후 주사된 E. tarda FKC에 대하여 보여준 나일 틸라피아의 높은 항체 반응은 PS-K가 어류의 특이 액성 면역반응에 관여하여 어류가 세균 감염시 높은 저항성을 갖게 하여 주는 것으로 나타났다.
아가리쿠스버섯에 함유된 생리활성 물질인 조단백다당류의 효율적인 추출공정을 확립하기 위하여 다양한 추출조건에서의 화학적 특성을 조사하였으며, 추출 분리된 조단백다당류의 열분해 특성 및 SRB assay에 의한 인체 암세포 증식억제 효과를 조사하였다. 조단백다당류의 추출수율은 초음파추출이 13.0%로 가장 높았으며, 열수추출이 7.8%로 가장 낮았다. 추출된 조단백다당류의 당 조성은 약 80%의 glucose와 fucose, galactose 및 mannose로 구성되어 있었으며 가압조건에서 2시간과 3시간의 추출은 ${\beta}-glucan$ 함량이 각각 32.28%와 32.34%로 뚜렷한 차이가 발견되지 않아 가압추출 2시간이 생리활성물질의 추출조건으로 효과적이었다. 또한 침전조건에 따른 조단백다당류의 침전수율 및 ${\beta}-glucan$ 함량은 4배 첨가 시 각각 10.89%와 35.97%로 가장 많이 함유되어 있었다. 열분해 특성은 네 단계로 이루어져 있었으며, $240-365^{\circ}C$에서 67.8%의 무게 감소를 보여주어 높은 온도에서도 열적 안정성이 있었다. SRB assay에 의한 인체 암세포 증식억제 효과를 검토한 결과, A549의 경우 $1,000{\mu}g/mL$ 농도에서 72시간 처리 시에는 43.9%의 암세포 손상을 보여주어 MCF-7과 AGS에 비해 암세포 증식억제 효과가 높음을 확인할 수 있었다.
담자균류인 영지 Ganoderma lucidum의 자실체를 열수추출한 후 얻은 단백 다당체를 DEAE cellulose 이온교환수지와 Sepharose CL-4B 젤 여과법을 이용하여 분리 정제하였다. 정제한 분획들을 각각 CR, IN, IA, GL과 GH로 명명하였다. 각각의 성분을 20mg/kg/day 용량으로 투여하였을 때 sarcoma 180 고형암에 대하여 Fr. GL이 81%의 가장 높은 종양 억제을을 나타냈으며 그 분자량은 47,000 dalton이었다. 그 구성성분은 82% 다당류, 8% 단백질 및 0.9% hexosamine 이었다. 그 다당류를 구성하는 단당류를 분석한 결과 glucose, galactose, mannose, fucose순으로 함유되어 있었다. 항암작용의 기전을 밝히기 위하여 마우스의 면역에 미치는 항암 성분의 영향을 연구한 결과 활성화된 마크로파지에서 분비되는 superoxide anion 양을 1.6배로, 그리고 hemolytic plaque assay에서의 용혈반 형성 세포수를 6배로 각각 증가시켰다. 이 결과로 항암작용은 고형암에 직접적으로 세포독성을 나타내는 것이 아니라, 면역세포를 활성화 혹은 강화시키는 작용임을 알 수 있다.
국내 울릉도 연안에서 자생하는 대황에서 라미나란을 분리, 정제 분획하여 구조적 특성을 비교하였다. 분쇄한 대황을 0.09 N HCl로 추출한 조 라미나란과 이를 CPC로 정제한 부분 정제 라미나란의 수율은 각각 $14.5\%,\;6.5\%$였으며, 그 화학적 조성을 비교해 보면, 총당의 함량이 $68.2\%$에서 $74.7\%$로 증가하였고, 단백질의 함량$(8.4\%\rightarrow3.8\%)$및 황산기의 함량$(7.6\%\rightarrow3.2\%)$로 감소하였으며, 주요 구성당인 glucose의 함량이 $55.0\%$에서 $83.3\%$로 증가하여 CPC를 사용하여 라미나란을 간단히 정제할 수 있었다. 라미나란의 분자량 및 당구조 분석을 위하여 부분정제 라미나란을 Sephacryl S-300 HR 칼럼으로 정제하였으며, 이 정제물의 평균 분자량은 12,500 dalton이었다. 그리고 총당의 함량이 $89.9\%$, 단백질 함량은 $1.1\%$, 그리고 황산기 함량 $0.8\%$ 이었으며, 주요 구성당인 glucose의 함량이 $98.3\%$였다. 그리고 FT-IR 분석 결과 glucose는 대부분 $\beta$-결합$(888\;cm^{-1})$의 형태로 존재하는 것을 확인하였다. 그리고 $^{13}C$ NMR 분석 및 methylation 분석을 해본 결과 라미나란은 주로 $\beta-1,3$ 결합에 $\beta-1,6$ 분지를 갖는 glucan임 을 확인하였다.
BACKGROUND/OBJECTIVES: Sargassum horneri is an edible brown alga that grows in the subtidal zone as an annual species along the coasts of South Korea, China, and Japan. Recently, an extreme amount of S. horneri moved into the coasts of Jeju Island from the east coast of China, which made huge economic and environmental loss to the Jeju Island. Thus, utilization of this biomass becomes a big issue with the local authorities. Therefore, the present study was performed to evaluate the anti-inflammatory potential of crude polysaccharides (CPs) extracted from S. horneri China strain in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW 264.7 cells. MATERIALS/METHODS: CPs were precipitated from S. horneri digests prepared by enzyme assistant extraction using four food-grade enzymes (AMG, Celluclast, Viscozyme, and Alcalase). The production levels of nitric oxide (NO) and pro-inflammatory cytokines, including tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$ and interleukin (IL)-$1{\beta}$ were measured by Griess assay and enzyme-linked immunosorbent assay, respectively. The levels of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and cyclooxygenase-2 (COX-2), nuclear factor (NF)-${\kappa}B$, and mitogen-activated protein kinases (MAPKs) were measured by using western blot. The IR spectrums of the CPs were recorded using a fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR) spectrometer. RESULTS: The polysaccharides from the Celluclast enzyme digest (CCP) showed the highest inhibition of NO production in LPS-stimulated RAW 264.7 cells ($IC_{50}$ value: $95.7{\mu}g/mL$). Also, CCP dose-dependently down-regulated the protein expression levels of iNOS and COX-2 as well as the production of inflammatory cytokines, including TNF-${\alpha}$ and IL-$1{\beta}$, compared to the only LPS-treated cells. In addition, CCP inhibited the activation of NF-${\kappa}B$ p50 and p65 and the phosphorylation of MAPKs, including p38 and extracellular signal-regulated kinase, in LPS-stimulated RAW 264.7 cells. Furthermore, FT-IR analysis showed that the FT-IR spectrum of CCP is similar to that of commercial fucoidan. CONCLUSIONS: Our results suggest that CCP has anti-inflammatory activities and is a potential candidate for the formulation of a functional food ingredient or/and drug to treat inflammatory diseases.
Sujin Kim;Yunkwon Nam;Min-jeong Kim;Seung-hyun Kwon;Junhyeok Jeon;Soo Jung Shin;Soyoon Park;Sungjae Chang;Hyun Uk Kim;Yong Yook Lee;Hak Su Kim;Minho Moon
Journal of Ginseng Research
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제47권2호
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pp.302-310
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2023
Background: The most common type of dementia, Alzheimer's disease (AD), is marked by the formation of extracellular amyloid beta (Aβ) plaques. The impairments of axons and synapses appear in the process of Aβ plaques formation, and this damage could cause neurodegeneration. We previously reported that non-saponin fraction with rich polysaccharide (NFP) from Korean Red Ginseng (KRG) showed neuroprotective effects in AD. However, precise molecular mechanism of the therapeutic effects of NFP from KRG in AD still remains elusive. Methods: To investigate the therapeutic mechanisms of NFP from KRG on AD, we conducted proteomic analysis for frontal cortex from vehicle-treated wild-type, vehicle-treated 5XFAD mice, and NFP-treated 5XFAD mice by using nano-LC-ESI-MS/MS. Metabolic network analysis was additionally performed as the effects of NFP appeared to be associated with metabolism according to the proteome analysis. Results: Starting from 5,470 proteins, 2,636 proteins were selected for hierarchical clustering analysis, and finally 111 proteins were further selected for protein-protein interaction network analysis. A series of these analyses revealed that proteins associated with synapse and mitochondria might be linked to the therapeutic mechanism of NFP. Subsequent metabolic network analysis via genome-scale metabolic models that represent the three mouse groups showed that there were significant changes in metabolic fluxes of mitochondrial carnitine shuttle pathway and mitochondrial beta-oxidation of polyunsaturated fatty acids. Conclusion: Our results suggested that the therapeutic effects of NFP on AD were associated with synaptic- and mitochondrial-related pathways, and they provided targets for further rigorous studies on precise understanding of the molecular mechanism of NFP.
Park, Yoon-Kyung;Kim, Mi-Hyun;Park, Seong-Cheol;Cheong, Hyeon-Sook;Jang, Mi-Kyeong;Nah, Jae-Woon;Hahm, Kyung-Soo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제18권10호
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pp.1729-1734
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2008
Chitosan, a cationic polysaccharide, has been widely used as a dietary supplement and in a variety of pharmacological and biomedical applications. The antifungal activity and mechanism of action of low molecular weight water-soluble chitosan (LMWS-chitosan) were studied in fungal cells and vesicles containing various compositions of fungal lipids. LMWS-chitosan showed strong antifungal activity against various pathogenic yeasts and hyphae-forming fungi but no hemolytic activity or cytotoxicity against mammalian cells. The degree of calcein leakage was assessed on the basis of lipid composition (PC/CH; 10:1, w/w). Our result showing that LMWS-chitosan interacts with liposomes demonstrated that chitosan induces leakage from zwitterionic lipid vesicles. Confocal microscopy revealed that LMWS-chitosan was located in the plasma membrane. Finally, scanning electron microscopy revealed that LMWS-chitosan causes significant morphological changes on fungal surfaces. Its potent antibiotic activity suggests that LMWS-chitosan is an excellent candidate as a lead compound for the development of novel anti-infective agents.
Polymer multilayered hydrogels were prepared on a titanium alloy (Ti) substrate using a layer-by-layer (LBL) process to load a cell growth factor. Two water-soluble polymers were used to fabricate the multilayered hydrogels, a phospholipid polymer with both N, N-dimethylaminoethyl methacrylate (DMAEMA) units and 4-vinylphenylboronic acid (VPBA) units [poly(MPC-co-DMAEMA-co-VPBA) (PMDV)], and the polysaccharide alginate (ALG). PMDV interacted with ALG through a selective reaction between the VPBA units in PMDV and the hydroxyl groups in ALG and through electrostatic interactions between the DMAEMA units in PMDA and the anionic carboxyl groups in ALG. First, the Ti substrate was covered with photoreactive poly vinyl alcohol, and then the Ti alloy was alternately immersed in the respective polymer solutions to form the PMDV/ALG multilayered hydrogels. In this multilayered hydrogel, vascular endothelial growth factor (VEGF) was introduced in different layers during the LbL process under mild conditions. Release of VEGF from the multilayered hydrogels was dependent on the location; however, release continued for 2 weeks. Endothelial cells adhered to the hydrogel and proliferated, and these corresponded to the VEGF release profile from the hydrogel. We concluded that multilayered hydrogels composed of PMDV and ALG could be loaded with cell growth factors that have high activity and can control cell functions. Therefore, this system provides a cell function controllable substrate based on the controlled release of biologically active proteins.
To evaluate the antiatopic effect of Korea red ginseng (RG, steamed root of Panax ginseng CA Meyer, Family Araliaceae) fermented by Bifidobacterium longum H-1 (FRG), its inhibitory effect on passive cutaneous anaphylaxis (PCA) reaction and itching in mice was measured. FRG and its ingredient saponin fraction (FSF) potently inhibited PCA reaction and scratching behaviors. FRG at a dose of 200 mg/kg and FSF at a dose of 50 mg/kg significantly inhibited the scratching frequency by 45% and 47%, respectively. FRG and FSF also inhibited the degranulation and protein expression of tumor-necrosis $factor-{\alpha}$ and interleukin-4 of RBL-2H3 cells induced by IgE-complex. However, polysaccharide fraction of FRG (FPF) weakly inhibited it, compared with FSF. The inhibitory effect of FRG against PCA reaction and scratching behaviors more potently inhibited than that of RG. Based on these findings, FRG can improve allergic skin disorders atopic dermatitis by the regulation of $TNF-{\alpha}$, and IL-4 produced by mast cells and basophils and its degranulation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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