Jo, Jong-Mun;Lee, Sang-Yun;Kim, Ji-Yeon;Kim, Dong-Il
한국생물공학회:학술대회논문집
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2002.04a
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pp.313-316
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2002
Effect of Pluronic F-68, a nonionic surfactant, on the extracellular production of hGM-CSF in transgenic Nicotiαna tabacum cell suspension culture was investigated. The addition of 5 g/L Pluronic F-68 did not affect the cell growth but increased the extracellular production of hGM-CSF by two-fold. This may be due to the enhanced permeability of the cell membrane by the interaction between the Pluronic F-68 and the cell membrane.
To enhance the growth of cryopreserved cells of transgenic Nicotiana tabacum, Pluronic F-68 was supplemented in a recovery medium during post-thaw period. As cryoprotective agents, 1 M sucrose, 0.5 M glycerol and 0.5 M dimethyl sulfoxide (DMSO) were added before freezing steps. The post-thaw growth of the cells was improved with Pluronic F-68, ranged from 0.1 to 10 g/L. The interactions of Pluronic F-68 with the cells were confirmed by the changes of hydrophobicity or permeability of the cells. Pluronic F-68 did not show any effect on the activity of $\beta$-glucuronidase (GUS) in all treatments. Therefore, the addition of Pluronic F-68 in a recovery medium was found to be beneficial to enhance the post-thaw growth of cryopreserved transgenic tobacco cells without affecting the production of recombinant protein.
The effects of Pluronic F-68, a non-ionic surfactant, on the growth and physical characteristics of Digitalis lanata suspension cultures were investigated in aqueous two-phase systems (ATPSs) composed of $4.5\%$ polyethylene glycol (PEG) 20,000 and $2.8\%$ crude dextran. In the range of 0.1-10.0 g $1^{-1}$, Pluronic F-68 enhanced the maximum cell density in a medium with ATPSs, even though Pluronic F-68 did not affect cell growth in a normal growth medium. In terms of physical properties of ATPSs with cell suspension cultures, 0.2 g $1^{-1}$ of Pluronic F-68 reduced viscosity by up to $40\%$, while 0.1 g $1^{-1}$ of Pluronic F-68 significantly enhanced the oxygen transfer rate. In addition, we successfully performed aqueous two-phase cultivation in a 5-1 stirred tank bioreactor with 0.5 g $1^{-1}$ of Pluronic F-68, and discovered that cell growth in ATPSs was similar to that in normal growth medium.
Pluronic F-68 and oxygen vectors were applied to increase the cell growth of Angelica gigas Nakai in aqueous two-phase system (ATPS). ATPS was composed of 3.6% (w/v) polyethylene glycol (PEG) 20,000 and 2.8% (w/v) crude dextran. n-Hexadecane, n-dodecane and FC-40 were used as oxygen vectors to enhance the oxygen transfer in ATPS. With 2$\sim$10 g/L of Pluronic F-68, addition of of n-hexadecane and FC-40 significantly enhanced the oxygen transfer rate as well as the maximum cell mass in a medium with ATPS. However, n-dodecane reduced the cell growth in all treatments. Maximum cell densities were increased up to 27.5% with 10 g/L of Pluronic F-68 and up to 40.2% with 8% (v/v) n-hexadecane compared to those of the controls without Pluronic F-68 and oxygen vectors. It was confirmed that the cell growth could be increased in ATPS using n-hexadecane.
The effect of fungal elicitor, Pluronic F-68 and methylcellulose on suspension culture of M piperita cells was investigated in shake flasks. About a two-fold increase in oil production was observed in response to the treatment of the fungal elicitor prepared from Rhodotorula rubra. Low concentration of Pluronic F-68 or methylcellulose enhanced Peppermint cell growth at 100 rpm of agitation.
It has been commonly known that cell growth is inhibited by the lack of dissolved oxygen and mass transfer inhibition of nutrients at stationary phase in fed-batch culture. In this study, Pluronic F-68 and oxygen vectors were added in Angelica gigas Nakai suspension culture in order to enhance cell growth in fed-batch culture. It was observed that the addition of 6%(w/v) Pluronic F-68 promoted cell growth up to 6.1% compared to control and that the use of 4%(v/v) n-hexadecane markedly enhanced cell growth up to 11.4%.
Regular and highly interconnected macroporous poly(L-lactic acid) (PLLA) scaffolds with pore size of 10∼300 ㎛ were fabricated through thermally induced phase separation of a PLLA-dioxane-water ternary system in the presence of a small amount of Pluronics. Addition of Pluronics to the ternary system raised the cloud-point temperature curve in the order of P-123< F-68< F-127. The Pluronics act as nuclei for the phase separation. This assistance is enhanced with increasing length of the hydrophilic PEO blocks in the Pluronics molecules. Liquid-liquid spinodal phase separation was induced at higher temperatures in the systems containing Pluronics because the spinodal region is raised to higher temperature. The absorption of Pluronics onto the interface stabilizes a macro scale structure and increases the interconnection of pores.
BSA/acids component in serum free medium (SFM) developed for the culture of hybridoma cell line, KA112, was replaced by acids/Pluronic F-68 emulsion. Protein content of SFM was minimized, and increased maximum cell density was obtained in serum-free lipids supplemented medium (SFLSM). Cell growth promotion effect of the emulsion was not affected by filtration with 0.2$\mu$m filter.
High-density perfusion cultivation was performed to produce extracellular polysaccharide(ECP) as immunostimulating agents in suspension cell cultures of Angelica gigas Nakai. In batch culture, the maximum cell density was 16.8 gDCW/L at day 6 and 0.9 g/L of ECP was obtained at day 8. When the medium exchange was started at the fifth day after inoculation for the perfusion culture, high concentration of the cells at 23.8 gDCW/L could be achieved with continuous production of ECP. Treatments of ultrasound and Pluronic F-68 were found to be helpful for the secretion of intracellular ECP into the culture medium.
The magnetized water is known to have a unique pattern of hydrogen bond between water molecules, thereby producing different physicochemical properties from the ordinary water. We have examined the effect of magnetized water on the change of critical micelle concentrations (CMC) of some surfactants. The CMC changes of SDS (sodium dodecyl sulfate) and CTAB (cetyltrimethylammonium bromide) dissolved in the magnetized water have been determined by the conductivity measurement at $25\;{^{\circ}C}$ and that of SDS, CTAB and Pluronic F-68 have also been examined by the surface tension method at $25\;{^{\circ}C}$. The CMC variation of SDS was examined by ITC (Isothermal Titration Calorimeter) at $25\;{^{\circ}C}$. The CMC of SDS, CTAB, and Pluronic F-68 are more decreased in the magnetized water, SDS is about $2.7{\sim}6.5$25 %, CTAB is about $2.3{\sim}3.0$%, and Pluronic F-68 is about 24.2 %, than in the control water.
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