Photobacterium damselae subsp. damselae and 4 Vibrio spp.(V. anguillarum, V. splendidus, V. harveyi and V. ordalii) were isolated from the diseased olive flounders, Paralichthys olivaceus. The isolates were tested on the pathogenicity in vitro. The properties of extracellular products(ECPs) were investigated with enzymatic activities, hemolytic activities toward the sheep and olive flounder erythrocytes, and cytotoxicity activities on the cell-line. And potential signal transduction pathways of the bacterial internalization were detected by using signal transduction inhibitors. P. damselae was high in phospholipase activity, hemolytic activity to olive flounder erythrocytes and cytotoxicity activity. And P. damselae had diversified internalizing pathways as compared to isolated vibrios. Therefore, these activities may be related with pathogenicity of P. damselae.
Photobacterium damselae subsp. damselae and 4 Vibrio spp, V. anguillarum, V. splendidus, V. harveyi and V. ordalii, were isolated from the diseased olive flounders, Paralichthys olivaceus. The pathogenicity of the isolates were compared to mortality, blood biochemical contents, such as alanineaminotransferase(ALT), aspatate aminotransferase(AST), and cortisol level, and non-specific immune responses, nitroblue tetrazolium (NBT) reduction of macrophages and lysozyme activities of serum. The mortalities and levels of ALT, AST and cortisol of fishes infected with P. damselae were higher than those of others but significantly low in non-specific immune responses, NBT and lysozyme activities. These results suggest that P. damsela might produce damselysin having high hemolytic and phospholipase activities, correlated with the pathogenicity. P. damsela could also make an obstruction of internal organs, following increasing in the level of ALT and AST, and depression in host immunity caused by induced high levels of cortisol.
Cho, Young Ah;Han, Hyun-Ja;Mun, Hee Eun;Jung, Sung Hee;Park, Myoung Ae;Kim, Jin Woo
Journal of fish pathology
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v.26
no.2
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pp.77-88
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2013
Starry flounder, Platichthys stellatus (body length $4.4{\pm}0.51cm$) that became sick during an outbreak of disease at mariculture facilities at Ulsan, Korea in August of 2012, were examined to identify the cause of the disease. Diseased fish didn't show a unique sign, but the oxidase-positive and gram negative rod was isolated from moribund fish. The bacterium was revealed as Photobacterium damselae subsp. piscicida by biochemical analysis and sequence analysis of the 16S rRNA and capsular polysaccharide (CPS) genes. The isolates (AD5) was carrying susceptible to ofloxacin and gentamycin and showed high growth value at $18^{\circ}C$ and $25^{\circ}C$ compared to four other P. damsela strains.
Han, Jee Eun;Gomez, Dennis K.;Kim, Ji Hyung;Choresca, Casiano H. Jr.;Shin, Sang Phil;Baeck, Gun Wook;Park, Se Chang
Korean Journal of Veterinary Research
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v.49
no.1
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pp.35-38
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2009
The zebra shark Stegostoma fasciatum which had been reared in the commercial aquaria was found dead and submitted for postmortem examination. A pure bacterial culture was isolated from pale and enlarged liver. The analysis of ureC and 16S rRNA genes confirmed the isolate as Photobacterium (P.) damselae subsp. damselae and this pathogen was sensitive to gentamicin. Although, no mortality in mouse was observed in the experimental infection study, the isolation of this pathogen in aquarium fish is significant because it can act as a reservoir to other aquatic animals and can also be zoonotic potential to human during aquarium management. This paper describes the first isolation of P. damselae subsp. damselae from zebra shark.
A giant grouper (Epinephelus lanceolatus) that was reared for public exhibition in a private commercial aquarium in Seoul, Korea, was recently found dead. The fish had evidenced symptoms including anorexia, lethargy, and depression persisting for two weeks. A bacterial pathogen from fish organs (kidney, liver, spleen) was cultured, identified and confirmed as Photobacterium damselae subsp. damselae, using a Vitek System 2, API 20E test, multiplex PCR, and 16S rRNA gene sequencing. In this paper, we have described the isolation and identification of Photobacterium damselae subsp. damselae from a giant grouper reared in a private aquarium in Korea.
The effects of microbiological properties and pathogenicity of Photobacterium damselae subsp. damselae were investigated under different culture conditions, temperature, pH, NaCl and iron concentration on culture media. Favorable conditions for bacterial growth were between 15-30${^{\circ}C}$, pH 5-9, 0-4% NaCl concentration and iron contents of over 10 mM, whereas the bacterial growth was inhibited under iron chelator existence. When P. damselae was cultured in iron-limited tryptic soy broth, total protein concentration of extracellular products, cytotoxic ability of ECPs on cell line, bacterial viability in flounder serum, phospholipase and siderophore activities of ECPs were significantly increased. On the other hand, the activities of P. damselae cultured under iron-added conditions were decreased. In this study, the iron-limited conditions were similar to the host in which iron concentration is low. During infection caused by P. damselae, the conditions could be related to the pathogenesis of the pathogen.
The isolates, which has caused considerable damage to the olive flounder farm located in the eastern coast of Korea showed 99% sequence homology in the comparison of 16s rRNA gene of P. damselae subsp. damselae ATCC 33539. The present P. damselae was identical to the biotype No.8 in Pedersen et al. (1997) and the same LPS protein pattern as P. damselac subsp. damselae ATCC 33539. The comparison of infection rates among present P. damselae and Vibrio spp. showed that isolated P. damselae was the highest, followed by V. anguillarium, V. harveyi. and V. ordalii.
Photobacterium sp. YW2207 was isolated from rainbow trout raised in a fish farm located in Yeongwol-gun, Gangwon Province, South Korea. Based on 16S rRNA sequence analysis and phylogenetic analysis, it was confirmed that Photobacterium sp. YW2207 showed 100% similarity with Photobacterium piscicola and Photobacterium phosphoreum, and 94.6% similarity with P. damselae subsp. damselae. Biochemical analysis revealed that Photobacterium sp. YW2207 is a Gram-negative, motile bacterium with a cell size of 1.5~3×3~5 ㎛. The bacteria were cultured on nutrient agar, brain heart infusion agar, Muller-Hinton agar, tryptic soy agar, and thiosulfate citrate bile sucrose agar with NaCl concentrations ranging from 0 to 2.5%. The API50CHE and API20E tests indicated lower utilization capabilities compared to the P. damselae strains provided in the API database. Furthermore, unlike most Photobacterium species, Photobacterium sp. YW2207 presented negative for catalase test. Results from the flow cytometric measurement indicated that Photobacterium sp. YW2207 exhibited a more diverse distribution of cell sizes and had larger cell sizes compared with P. damselae subsp. damselae. Minimum inhibitory concentration tests showed that Photobacterium sp. YW2207 had low susceptibility to β-Lactam and aminoglycoside antibiotics, while having high susceptibility to tetracycline, doxycycline, and quinolone antibiotics. Pathogenicity on rainbow trout revealed that an immersion of 1×105 CFU/ml did not cause mortality or clinical symptoms.
In this study, epidemiological cut-off values were estimated for 44 Photobacterium damselae isolates, since clinical breakpoints have not been established for this pathogenic bacterium. The susceptibility of the isolates to 10 antibiotics was evaluated using internationally standardized disc diffusion protocols. Normalized resistance interpretation was used to generate statistically valid epidemiological cut-off values for the susceptibility data. There were not enough strains exhibiting full sensitivity to ampicillin and amoxicillin to allow analysis of these antibiotics. Because there were only a marginally sufficient number of strains exhibiting full sensitivity to oxytetracycline, the cut-off value generated provided only a provisional estimate. The valid wild-type cut-off values were <13, 13, 9, 22, 25, 27, and 28 mm for gentamicin, cephalexin, erythromycin, oxolinic acid, flumequine, florfenicol, and sulfamethoxazole/trimethoprim, respectively. The application of these cut-off values should greatly facilitate the rational selection of antibiotics for use in commercial fish farms.
Andreoni, Francesca;Mastrogiacomo, Anna Rita;Serafini, Giordano;Carancini, Gionmattia;Magnani, Mauro
Microbiology and Biotechnology Letters
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v.47
no.1
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pp.139-147
/
2019
Glutamate decarboxylase catalyzes the conversion of glutamate to gamma-aminobutyric acid (GABA), contributing to pH homeostasis through proton consumption. The reaction is the first step toward the GABA shunt. To date, the enzymes involved in the glutamate metabolism of Photobacterium damselae subsp. piscicida have not been elucidated. In this study, an open reading frame of P. damselae subsp. piscicida, showing homology to the glutamate decarboxylase or putative pyridoxal-dependent aspartate 1-decarboxylase genes, was isolated and cloned into an expression vector to produce the recombinant enzyme. Preliminary gas chromatography-mass spectrometry characterization of the purified recombinant enzyme revealed that it catalyzed not only the decarboxylation of glutamate but also the transamination of GABA. This enzyme of P. damselae subsp. piscicida could be bifunctional, combining decarboxylase and transaminase activities in a single polypeptide chain.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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