국내 토양으로부터 MRSA에 대해 항균활성을 보이는 세균들을 분리하였다. 이들 가운데 가장 높은 항MRSA 균 활성을 보인 YK5 균주는 호기성 간균으로 운동성이 있고, 내생포자를 형성하였으며, 인돌을 형성하지 않았고, mannitol을 분해하여 산을 생성시키지 않았다. 이 균주의 16S rRNA 유전자 염기서열은 Paenibacillus 속 세균들의 유전자와 $95{\sim}98%$의 상동성을 나타냈는데 특히 P. elgii와 가장 높은 상동성을 보였으나, 기타 생리 생화학적 특성에서 다른 점들이 관찰되어 P. incheonensis YK5로 명명되었다. P. incheonensis YK5 를 SST 배지에 접종하여 $37^{\circ}C$에서 96 시간 배양한 다음 그 상등액으로 부터 부탄올로 추출된 항균물질은 그람 양성균인 MRSA 20 균주들과 Streptococcus pneumoniae, 그람 음성균인 Pseudomonas aeruginosa 10균주들, Salmonella spp., Shigella spp., Escherichia coli와 Klebsiella pneumoniae 및 인체병원성 진균인 Cryptococcus neoformans와 Trichophyton spp.에 대하여 광범위한 항균효과를 나타냈다. 또한 이 항균물질은 $20{\sim}100^{\circ}C$ 사이의 온도구간에서 안정한 활성을 유지하였을 뿐만 아니라, pH $3.0{\sim}7.0$의 넓은 pH범위에서 활성을 나타내 MRSA를 비롯한 다양한 병원균에 대한 항생물질로서의 가능성을 보였다.
Due to wide abuse of antibiotics both in human and livestock use, the advent and spread of multidrug resistant (MDR) pathogens becomes a serious health problem all over the world. Since the development of new antibiotics is at a standstill in pharmaceutical industry, the choice of therapeutic antibiotics is getting narrower. In this study, in an effort to search new antibiotics, the antimicrobial activity of Paenibacillus DY1 isolated from Korean soil was characterized on its growth inhibition spectrum against various health threatening MDR strains, with its stability and chemical structure. Extracellular culture filtrate of Paenibacillus DY1 effectively inhibits the growth of all the tested MDR enteropathogenic Eshcherichia coli, enterohemolytic E. coli, and enterotoxigenic E. coli strains, at a similar level to that on the nonresistant control E. coli strains. It showed significant growth inhibition effect against the causative agents of class one legal communicable disease, MDR Salmonella typhi, MDR Salmonella paratyphi A, food poisoning bacteria, MDR Salmonella typhimurium, and other MDR Salmonella spp. The growth of all of 10 different MDR Shigella spp. strains and 6 different Vibrio spp. strains tested was also inhibited. The antimicrobial activity of Paenibacillus DY1 was well preserved after heat treatment, and was also stable in both alkaline and acidic environment. The antimicrobial activity was partially purified with Diaion HP20 column and TLC. By NMR study, the putative structure of the activity was postulated as an alkane having hydroxyl groups.
녹차를 천일염과 혼합하여 발효시킨 후 항균활성을 가지고 있고 셀룰라제가 없는 균종을 첨가하여 발효시킨 실험에서 녹차만을 발효시켰을 경우보다 천일염을 첨가하여 발효시킨 모든 시료에서 카테킨류인 EGC, EC, EGCG, ECG의 추출량이 증가하였고, 발효 일에 따른 분석에서는 EGC(epigallocatechin), ECG(epicatechin gallate), EC(epicatechin), EGCG(epigallocatechin gallate)모두에서 2일째와 3일째 높은 추출량이 검출되었다. 또한 발효균을 첨가하여 발효시켰을 경우 Paenibacillus spp에서는 모든 카테킨류(EGC, EC, EGCG, ECG)의 추출량이 증가하였고, Bacillus amyloliquefaciens에서는 EGC와 EC는 감소하고 EGCG와 ECG는 증가하였으며, Bacillus pumilus, Bacillus subtilis는 모든 카테킨류(EGC, EC, EGCG, ECG)에서 감소하였다. 위와 같은 실험의 결과에서 녹차에 천일염과 Paenibacillus spp를 함께 3일 동안 발효시킨 결과에서 가장 많은 카테킨류가 추출되었다.
The genus Paenibacillus is a new group of bacilli separated from the genus Bacillus, and most of species have been isolated from soil. In the present study, we collected 450 spore-forming bacilli from the roots of winter crops, such as barley, wheat, onion, green onion, and Chinese cabbage, which were cultivated in the southern part of Korea. Among these 450 isolates, 104 Paenibacillus-like isolates were selected, based on their colony shape, odor, color, and endospore morphology, and 41 isolates were then finally identified as Paenibacillus spp. by 16S rDNA sequencing. Among the 41 Paenibacillus isolates, 23 were classified as P. polymyxa, a type species of the genus Paenibacillus, based on comparison of the 16S rDNA sequences with those of 32 type strains of the genus Paenibacillus from the GenBank database. Thirty-five isolates among the 41 Paenibacillus isolates exhibited antagonistic activity towards plant fungal and bacterial pathogens, whereas 24 isolates had a significant growth-enhancing effect on cucumber seedlings, when applied to the seeds. An assessment of the root-colonization capacity under gnotobiotic conditions revealed that all 41 isolates were able to colonize cucumber roots without any significant difference. Twenty-one of the Paenibacillus isolates were shown to contain the nifH gene, which is an indicator of $N_{2}$ fixation. However, the other 20 isolates, including the reference strain E681, did not incorporate the nifH gene. To investigate the diversity of the isolates, a BOX-PCR was performed, and the resulting electrophoresis patterns allowed the 41 Paenibacillus isolates to be divided into three groups (Groups A, B, and C). One group included Paenibacillus strains isolated mainly from barley or wheat, whereas the other two groups contained strains isolated from diverse plant samples. Accordingly, the present results showed that the Paenibacillus isolates collected from the rhizosphere of winter crops were diverse in their biological and genetic characteristics, and they are good candidates for further application studies.
Aphids are a large group of hemipteran pests that affect the physiology, growth, and development of plants by using piercing mouthparts to consume fluids from the host. Based an recent data, aphids modulate the microbiomes of plants and thereby affect the overall outcome of the biological interaction. However, in a few reports, aboveground aphids manipulate the metabolism of the host and facilitate infestations by rhizosphere bacteria (rhizobacteria). In this study, we evaluated whether aphids alter the plant resistance that is mediated by the bacterial community of the root system. The rhizobacteria were affected by aphid infestation of pepper, and a large population of gram-positive bacteria was detected. Notably, Paenibacillus spp. were the unique gram-positive bacteria to respond to changes induced by the aphids. Paenibacillus polymyxa E681 was used as a rhizobacterium model to assess the recruitment of bacteria to the rhizosphere by the phloem-sucking of aphids and to test the effect of P. polymyxa on the susceptibility of plants to aphids. The root exudates secreted from peppers infested with aphids increased the growth rate of P. polymyxa E681. The application of P. polymyxa E681 to pepper roots promoted the colonization of aphids within 2 days of inoculation. Collectively, our results suggest that aphid infestation modulated the root exudation, which led to the recruitment of rhizobacteria that manipulated the resistance of peppers to aphids. In this study, new information is provided on how the infestation of insects is facilitated through insect-derived modulation of plant resistance with the attraction of gram-positive rhizobacteria.
In this study, bacterial strains were isolated from soils from 30 locations of Samcheok, Gangwon province. Of the isolated strains, seven showed potential plant growth promoting and antagonistic activities. Based on cultural and morphological characterization, and 16S rRNA gene sequencing, these strains were identified as Paenibacillus species. All seven strains produced ammonia, cellulase, hydrocyanic acid, indole-3-acetic acid, protease, phosphatase, and siderophores. They also inhibited the mycelial growth of Fusarium oxysporum f. sp. radicis-lycopersici in vitro. The seven Paenibacillus strains enhanced a range of growth parameters in tomato plants under greenhouse conditions, in comparison with non-inoculated control plants. Notably, treatment of tomato plants with one identified strain, P. polymyxa SC09-21, resulted in 80.0% suppression of fusarium crown and root rot under greenhouse conditions. The plant growth promoting and antifungal activity of P. polymyxa SC09-21 identified in this study highlight its potential suitability as a bioinoculant.
강원도 춘천시 신북읍의 토마토 풋마름병이 다발생한 포장으로부터 건전한 토마토 뿌리를 채취하여 약 200개의 미생물을 선발하였다. 선발된 미생물들에 대한 저지원 테스트를 실시한 결과, 풋마름병원균 (Ralstonia solanacearum)에 항균 효과를 나타냈으며 그 중 가장 우수한 항균 효과를 나타낸 KPB3 균주를 선발하여 생리 생화학적 특성조사 와 16S rRNA 유전자 분석을 실시하여 Paenibacillus spp. 균으로 동정하였다. KPB3균주의 활성적 우수성을 확인하기 위하여, 먼저 포트 실험에서 KPB3 균주를 토양 관주처리 결과 무처리구에 비하여 처리구의 방제효과가 66.7% 뛰어난 것을 확인하였다. 또한 토마토 포장에서의 방제효과 시험은 2006년 봄과 가을에 2회 실시하였으며, 전반적으로 풋마름병 발생은 가을보다 봄에 높은 발병율을 나타내었다. 그 결과, KPB3 균주 처리구에서 봄과 가을 각각 50%와 60% 이상 방제 효과를 나타내어 KPB3 균주는 토마토 풋마름병 억제용 생물 제제로서의 개발 가능성이 있음을 확인하였다.
바이칼호에 서식하는 2종의 스폰지 체내 및 주변 물로부터 92개의 저온성 균주를 분리하고 각 균주들의 기질 분해능을 조사하였다. 그 결과 섬유소와 지방에 대한 분해 활성도를 갖는 균주는 38.0, 34.8%로 비교적 적었으나 전분과 단백질 분해 활성도를 갖는 균주는 78.3, 57.6%로 높은 비율로 나타났다. 분리한 세균을 염기서열의 유사도에 따라 분류하기 위하여 Genomic Fingerprinting을 실시한 후 31개 균주를 선별하여 동정한 결과, Baikalospongia sp.에서 분리한 13균주는 모두 Pseudomonas속으로 확인된 반면, Lubomirskia sp.에서 분리한 14균주는 Pseudomonas ssp., Buttiauxella agrestis, Pseudomonas fluorescens, Yersinia ruckeri, Bacillus ssp., Paenibacillus ssp., Bacillus thuringiensis, Bacillus simplex, Brevibacterium ssp., Acinetobacter lwoffii로 다양하게 동정되었다. 그러나 총 31개 균주 중 18개가 Pseudomonas속으로 동정된 것은 타감작용에 의한 다른 세균 성장의 방해 때문으로 평가되며, 이러한 일반적인 배양 방법의 한계점을 극복하기 위해서는 스폰지의 서식처와 세균의 검출 방법에 대하여 보다 다양한 심층적인 연구가 이루어져야 할 것으로 생각된다.
The diversity of Paenibacillus species was assessed in the rhizospheres of four cultivars of sorghum sown in Cerrado soil amended with two levels of nitrogen fertilizer(12 and 120 kg/ha). Two cultivars(IS 5322-C and IS 6320) demanded the higher amount of nitrogen to grow, whereas the other two(FBS 8701-9 and IPA 1011) did not. Using the DNA extracted from the rhizospheres, a Paenibacillus-specific PCR system based on the RNA polymerase gene(rpoB) was chosen for the molecular analyses. The resulting PCR products were separated into community fingerprints by DGGE and the results showed a clear distinction between cultivars. In addition, clone libraries were generated from the rpoB fragments of two cultivars(IPA 1011 and IS 5322-C) using both fertilization conditions, and 318 selected clones were sequenced. Analyzed sequences were grouped into 14 Paenibacillus species. A greater diversity of Paenibacillus species was observed in cultivar IPA 1011 compared with cultivar IS 5322-C. Moreover, statistical analyses of the sequences showed that the bacterial diversity was more influenced by cultivar type than nitrogen fertilization, corroborating the DGGE results. Thus, the sorghum cultivar type was the overriding determinative factor that influenced the community structures of the Paenibacillus communities in the habitats investigated.
토양에서 인산가용화 미생물의 역할을 탐색하기 위해, 밭과 시설재배 토양에 서식하는 인산가용화 미생물의 특성을 조사하였다. 노지 밭 토양에 비해 시설재배지 토양에서 EC가 높았으며, 토양 pH, 유기물, 유효인산, 치환성 양이온 및 총 인도 시설재배지에서 비교적 높은 경향이었다. 인산가용화 세균의 수는 시설재배지 토양이 밭 토양보다 높았으나, 인산가용화 세균의 종류는 밭 토양에 많았다. 인산가용화 세균의 밀도와 인산가용화능 간에 정의 상관이 있었다. 밭 토양에서는 Bacillus, Cedecea, Brevibacillus, Paenibacillus Pseudomonas, Serratia속 등이 시설재배지 토양에서는 Bacillus, Cellulomonas 속 등의 인산가용화 세균이 분리되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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