This study was performed both to explore the host of nervous necrosis virus (NNV) between mariculturing fish species and to examine the phylogenic position of the NNV in Korea. NNV was confirmed on the basis of histopathological and molecular biological examination, then VNN infection was Preyed from either moribund or dead fishes including red drum, Sciaenops ocellatus; oblong rock fish, Sebastes oblongus and flounder, Paralichthys olivaceus. As a result of sequencing for a part of ms, virus from red drum was showed $98\%, $97\%, $86\% and $74\% homology with oblong rock fish, grouper, Japanese flounder and striped jack, respectively. On the other hand, NNV from oblong rock fish was demonstrated $96\%, $85\% and $72\% homology with grouper, Japanese flounder and striped jack, respectively. NNV from red drum and oblong rock fish was exhibited phylogenically distant from the representative NNV, SJNNV originated from striped jack. On the contrary, the viruses appeared to be similar species with Taiwan NNV isolated from culturing grouper.
Recent studies revealed that histone proteins are involved in innate immune responses during pathogen invasion as well as DNA packing. This study characterized the histone genes (H2A.V) of sevenband groupers and analyzed gene expression in NNV-infected sevenband groupers. The open reading frame (ORF) of H2A.V is 387 bp which encoded 128 amino acid residues. The deduced amino acid sequence of H2A.V harbor a highly conserved domain for H2A/H2B/H3 and H2A_C binding domain. Quantitative real-time PCR analysis showed that H2A.V had a high gene expression level in the brain and blood after being NNV-infected. An increase in extracellular histone protein in the blood has been identified as a biomarker for vascular function in humans. More research is required to understand histone's immune response at the protein level or in aquatic animals.
8-10 week old ICR mice were infected intracerebrally and intraperitoneally with different encephalomyocarditis virus(K$_3$, $K_{11}$, ATT-VR 129) to observe histopathological and immunohistochemical change. Results obtained throuh the experiments were summarized as follows : 1. No differences in clinical signs by the virus strains and the inoculation routes were found. Mice infected with EMCV showed clinical signs after 3 days of inoculation. Main clinical signs were tremors, convulsions, circling movement, and uni or bilateral hindleg paralysis followed by death on the 3-8 days. In general, most of the infected animals died or recovered closely on the 8th day of postinoculation. 2. At necropsy, petechial and ecchymotic hemorrhages in lung were observed and no specific findings in other were observed. 3. In histopathological observation, neuroal cell degeneration perivascular mononucear cell in-filtration gliosis were appeared in central nervous system. Myocarditis with myocardial degeneration and necrosis, calcification were observed along with acinar cell necrosis of exocrine glands in pancreas, severe glomerulonephritis in kidney. Also, focal necrosis of hepatocytes and interstitial pneymonia hyperemia, hemorrhages in lungs were observed. 4. By immunohistochemical staining using ABCIT method, the positive cells were recognized in intracytoplasm of acinar cell in pancreas and intracytoplasm of neuronal cells in cerebrum.
1999년 10월에서 11월 사이에 남해안 일대의 홍민어 종묘 생산장에서 20~30열령의 치어가 척추만곡 및 이상유영을 하며 대량 폐사하였다. 병어는 특이 외부 증상이 없었고, 높은 누적폐사량이 바이러스 질병으로 의심되어, 조직학적 및 분자생물학적인 검사를 행하여 폐사원인을 확인하였다. 폐사개체의 조직을 H-E 염색하여 관찰한 결과 뇌와 안구의 신경세포에서 공포와 괴사가 관찰되었고, 전자현미경 관찰에서는 안구와 뇌에서 바이러스 입자가 관찰되었다. RT-PCR 결과에서는 ${\fallingdotseq}426$ bp의 DNA 단편을 확인할 수 있었다. 이러한 결과로 홍민어에서 발생한 대량폐사는 바이러스성 신경괴사증(VNN)으로 진단되었다.
Thirty-day-old piglets were intranasally or subcutaneously inoculated with 2ml of Aujeszky's disease virus, NYJ-1 strain, at the titer of $10^{6.75}$$TCID_{50}/0.1ml$, that was isolated from the diseased piglets in Korea, and histopathological studies were performed to elucidate the pathognomonic characters of the isolate. Results obtained through the experiments were as follows: 1. Major clinical signs on the 2nd and 3rd days post inoculation (p.i.) were fever, anorexia and dyspnea. On the 6th and 7th days p.i., nervous signs, severe dyspnea and salivation were observed in the group of intranasal inoculation, and one out of 3 piglets in this group died on the 7th day p.i.. General signs were more severe in the group of intranasal inoculation than the group of subcntaneous injection. Between the 8th and l0th days p.i., the signs subsided and the piglets were completely recovered from the illness. 2. Hematologically, most of the inoculated pigs showed a mild lymphocytopenia on the 5th and 6th days p.i.. 3. By necropsy, swelling and hemorrhagic lesions were observed in tonsil, central nervous system and lung. No specific changes were grossly found in other parenchymatous organs. 4. In histopathological study, degeneration and necrosis of nervous cells, non-suppurative meningoencephalitis, diffuse or focal gliosis, perivascular cutting and degeneration of ganglion cells were observed in central nervous system, and swelling and hemorrhagic changes were shown in the tissues of liver, lung and lymph nodes. 5. By indirect immunofluorescence antibody assay using ADV-monoclonal antibody, specific ADV antigens were detected in the tissues of tonsil, brain and spleen of the succumbed piglet. However, in the experimentally slaughtered piglets, the specific reactions were noted only in the tonsils.
To elucidate pathogenicity to hamster of encephalomyocarditis virus $K_3$ strain that was isolated in Korea from the swine with reproductive failures, adult male syrian hamsters were experimentally infected intraperitoneally with the virus at $10^{7.0}\;TCID_{50}/0.1ml$ and pathological and immunohistochemical studies were performed. The results obtained through the experiment were as follows. 1. Clinical signs such as depression, unkempt hair and bilateral parlysis of hind limbs were observed. 2. At necropsy, mild congestion was observed in the cerebrum, liver, kidney and lung, and atrophy was evident in testis. 3. In microscopic observation, degeneration and necrosis of the nervous cells and perivascular mononuclear cell infiltration were manifested in central nerve system, and various degrees of degeneration and necrosis of parenchymal cells were detected in pancreas, lacrimal gland, liver, kidney and testis. 4. In immunohistochemical observation, strong positive reactions were observed in degenerated parenchymal cell of testis, and weak positive reactions, in hepatocytes.
2015년 겨울, 우리나라 남해안 소재 육상 양식장에서 사육 중이던 능성어의 약 30%가 폐사하였다. 수온 $9{\sim}12^{\circ}C$의 겨울철에 발생한 능성어 폐사는 신경괴사성바이러스 (NNV) 감염에 의한 바이러스성뇌망망증 (VER)으로 밝혀졌다. 시험어는 비정상적인 유영, 배를 위로한 채 수면을 떠 다니는 현상, 체색흑화, 안구백탁 및 부레의 과도한 팽창 소견을 보였다. 원인 바이러스는 일반적으로 고수온기 능성어에 감염되는 RGNNV genotype이 아닌, 냉수성 어류에서 분리되는 BFNNV genotype으로 밝혀졌으며, NNV 가장 근연관계가 높은 Pacific cod betanodavirus (PCNNV)와 99.7~100% 상동성을 보였다. 병리조직학적 관찰 결과, 바이러스성뇌망망증 (VER)의 특징적인 병변인 뇌조직의 공포화 및 괴사를 수반하였다. 이 연구는 수온 $12^{\circ}C$ 이하의 겨울철에 능성어에 감염된 BFNNV genotype에 대한 첫 보고이다.
1989년부터 남해안 일원 해상 가두리 양식장에서 사육중이던 능성어가 고수온기에 대량폐사하여 폐사율이 80%이었다. 발병한 병어는 채색흑화, 안구돌출, 평행감각 상실,회전운동과 몸통이 휘어지는 증상을 나타냈고, 조직학적으로는 뇌조직 및 안구망막의 신경세포가 공포 또는 괴사되었다. 병어로 부터 어류주화세포를 이용한 세포배양법으로 원인 바이러스는 분리되지 않았지만, 뇌 신경세포의 세포질에서 크기가 약 30 nm이며 외막(envelop)이 없는 다면체 모양의 바이러스 입자가 전가현미경적으로 관찰 되었다. 능성어로 부터 분리된 바이러스는 에테르나 열($50^{\circ}C$, 30분)처리에 의해 병원성이 실활되지 않았으나, 강산(pH 3)이나 강알카리(pH 11)에는 부분적으로 병원성이 실활되었다. 그리고 fish nodavirus인 Striped Jack Nervous Necrosis Virus(SJNNV)의 primer를 이용하여 인위감염 및 자연감염된 능성어를 대상으로 PCR을 한 결과 감염된 능성어의 뇌 및 안구조직에서 악 430 bp정도의 PCR 증폭산물이 검출되므로서 능성어를 폐사시키는 원인 바이러스는 SJNNV와 아주 유사한 nodavirus 였다.
In this study, we investigated safety and efficacy of a low temperature immunization protocol with NNV in red spotted grouper, Epinephelus akaara and long tooth grouper, Epinephelus bruneus and seven band grouper, Hyporthodus septemfasciatus. Further, growth rate between immunized and naïve fish was evaluated during the experiment to check side effect of immunization. Three grouper species were immunized by immersion method with live NNV at 105.0 TCID50/mL at 16.5℃ for 30 min and reared for 120 days at natural sea water temperature. To evaluate growth rate, total length and wet weight was measured 7 times after immunization. Immunized three grouper species were challenged by intramuscular inoculation with NNV at 104.2 TCID50/100 µL/fish. Immunization at low temperature with live NNV did not show any clinical symptoms of infection, mortality and inhibition of growth. After challenge, cumulative mortality of naïve seven band grouper, red spotted grouper, long tooth grouper were 45, 10, 20 %, respectively. However no mortality was observed at immunized groupers. Thus, it was demonstrated that immunization at low temperature with live NNV are able to protect three different species of groupers without inhibition of growth.
본 연구에서는 넙치(Paralichthys olivaceus)로부터 분리한 바이러스성출혈성패혈증바이러스(viral hemorrhagic septicemia virus, VHSV, genotype IVa)에 대한 단클론 항체(monoclonal antibody, MAb)를 개발하였다. VHSV에 대한 항체를 생산하는 총 5개의 hybridoma clone을 생산하였다. 4개의 MAbs (2C10, 18H4, 23H6, 30B7)는 glycoprotein을 인식하였고, MAb 15E10은 nucleocapsid protein을 인식하였다. 5개의 MAbs는 western blot 상에서 VHSV에 감염된 세포와 넙치시료에 반응하였으나, 정상 세포와 넙치시료에는 반응하지 않았다. 또한 ELISA상에서 VHSV에만 반응하였고 6종의 어류바이러스(IHNV, HIRRV, SVCV, IPNV, MABV, NNV)에는 반응하지 않았다. 이상의 결과, 본 연구에서 제작된 MAbs는 VHSV에만 특이적으로 반응하는 것이 확인되어 VHSV를 검사하는데 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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