• 생태와환경
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• 제53권1호
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• pp.63-72
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• 2020

본 연구에서는 멸종위기종이 서식하는 4개 하천(금강, 지천, 황지천, 섬진강)에서 환경유전자(environmental DNA, eDNA)와 보편적 어구를 이용한 조사 방법을 적용하여 지점별 종 다양성을 확인하고, 이를 통해 eDNA의 활용을 고찰하였다. eDNA 조사를 통해서 확인된 종 수는 지점 평균(±표준편차) 19종(±4.4)이며, 이는 어구를 이용한 정량 조사의 10종(±4.8)과 비교하여 높게 나타났다. 대부분의 지점에서 eDNA 조사가 어구를 이용한 조사보다 효율이 높게 나타났다. 반면 eDNA 조사 결과 고유종 및 근연종에 대해서 동정의 오류가 확인되어, universal primer (MiFish primer set)에 대한 국내 적용의 한계를 확인하였다. 또한 멸종위기종의 서식 여부도 일부 종에 대해서 eDNA 조사 결과가 현장 조사 및 문헌과의 차이를 보였다. 현재 개발된 universal primer는 국내에서 서식하는 모든 담수종의 서식을 확인하는 데 있어서 결과의 신뢰성을 담보할 수 없기 때문에 universal primer의 보완 및 개발이 필요하며, 멸종위기종과 같은 특정종의 서식 확인을 위해서는 종특이적 마커 개발을 통한 적용이 고려되어야 한다. 마지막으로 eDNA의 현장 조사 방법에 대한 매뉴얼이 개발될 경우, 수생태계 조사에 대한 활용성이 증대될 수 있을 것이다.

• 한국어병학회지
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• 제22권1호
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• pp.85-90
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• 2009

본 연구에 사용한 Nseri-F와 Nseri-R primer는 N. seriolae의 16S-23S rRNA 부위에 위치한 영역으로 여러 종의 Nocardia spp.와 비교할 때 PCR 검출 특이성이 매우 높을 것으로 예상되었다. 실제로 이 primer를 이용하여 동물 (N. asteroides 와 N. farcinica), 어류 (N. asteroides, N. salmoniciada 및 N. seriolae) 뿐만 아니라 무척추동물 (N. crassostreae) 등에 감염되는 원인체들에 대하여 실험한 결과 N. seriolae의 특이적 검출이 가능 하였다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제8권3호
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• pp.122-127
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• 2005

A DNA chip that rapidly and accurately detects the viral genes in rhabdovirus-infected fish was developed. The N, Ml, and G proteins of three rhabdovirus strains, infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV), viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV), and flounder rhabdovirus (HIRRV), were selected for use as probes. The sequences of the corresponding genes were obtained, and probes were prepared by PCR using specific primer sets. The specificity of the probes was confirmed by cross PCR. The prepared probes were spotted on poly-L-lysine- or aminosilane-coated glass slides and hybridized with target DNA under several different conditions in order to determine the optimal hybridization temperature, glass-slide coating, and target cDNA concentration.

• 환경영향평가
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• 제30권1호
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• pp.1-12
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• 2021

본 연구는 환경DNA 기술을 이용한 국내 담수어류종 탐지방법 도입 및 적용가능성을 확인하기 위해 수행되었다. 환경DNA를 이용한 모니터링 기술은 기존의 현장조사 모니터링 방식에 비하여 교란이 적고 편의성이 높으며 조사에 대한 감도가 높아 급변하는 하천 생태계 모니터링을 위한 효율적인 방법으로 주목받고 있다. 본 연구의 대상지는 경기도 민물고기 생태학습관으로 수족관 내 수조, 생태연못, 양식장에 서식하는 국내 대표적 담수어류종에 대해 7월부터 10월까지 3차례의 물 환경시료를 수집하여 환경DNA 분석을 실시하였다. 국내 담수생태계의 다양한 서식환경을 고려하여 선정된 종에 대해 기 구축된 유전자생물종 DNA 염기서열 특성을 검토하고, 종 검출 여부 확인을 위해 채수된 16개의 환경시료를 Miya et al(2015)에서 제시된 환경DNA 분석 프로토콜에 준하여 분석하였다. 그 결과 대상 어종 총 7목 11과 50종 중 7목 11과 45종(90%)이 검출되었다. 이는 환경DNA 기술과 기 구축된 어류종 DNA DB를 활용하여 다양한 환경조건에서도 단순한 채수 샘플링으로부터 국내 서식하고 있는 주요 민물고기 어종이 검출되었다는 점에서 의의가 있다. 나아가 실험 중 발생된 수족관 내 시료 오염, 불균질한 DNA 채집, 생물종 유전자정보 누락 등의 오차요인들을 분석하여 자연환경에서 적용 시 앞으로의 보완 방향에 대하여 제시하였다.

• Animal cells and systems
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• 제14권1호
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• pp.25-30
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• 2010

We employed a new and improved differential display reverse transcription-polymerase chain reaction (DDRT-PCR) method, which involves annealing control primers (ACPs), to identify the genes that are specifically or prominently expressed in olive flounder (Paralichthys olivaceus) juveniles (35 days post-hatch; dph) compared to larval-stage (dph 21) flounder. Using 60 ACPs, we identified eight differentially expressed genes (DEGs) and basic local alignment search tool (BLAST) searches revealed eight known genes. Gene expression levels were confirmed by RT-PCR. Phosphoglucose isomerase (PGI) was highly expressed at 21 dph, while nephrosin, myosin light chain (MLC), myosin heavy chain (MHC), carboxypeptidase A, chymotrypsin B, fish-egg protein, and matrix protein were expressed at 35 dph. PGI, MLC, and MHC expression was further analyzed by RT-PCR. The differentially expressed genes identified in this study may provide insights into the molecular basis of development in olive flounder.

• 생명과학회지
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• 제28권9호
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• pp.1062-1067
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• 2018

국제 무역 및 전세계 수산물 소비의 증가로 인해 다양한 수산물이 국내로 수입되어 유통되고 있다. 최근 수입 수산물의 종명 및 원산지 표시사항을 허위로 기재하는 경우가 급증하여 식품안전성에 심각한 문제가 야기되고 있다. 불법적으로 유통되는 수산물의 안전관리를 위해 DNA 기반 기술을 이용한 종 판별법 마련이 시급하다. 본 연구에서는 전세계적으로 중요한 대형선망어업 어종 중 하나인 전갱이속 어류의 종을 판별하기 위해 duplex-PCR을 사용한 검출 방법을 개발하였다. 국내에 유통되는 T. japonicus과 T. novaezelandiae의 시료를 확보하여 COI 영역의 염기서열 분석을 통하여 종간 특이성을 나타내는 단일염기다형성 유전자를 탐색하였으며, PCR 증폭 산물의 크기를 고려하여 2개의 종 특이적인 정방향 primer를 설계하였다. Duplex-PCR 분석 결과, T. japonicus (103 bp), T. novaezelandiae (214 bp)와 같은 단일 밴드를 전기영동상에서 확인 할 수 있었으며 상호간의 비 특이적 밴드는 형성되지 않았다. 또한 duplex-PCR 방법을 통한 T. japonicus과 T. novaezelandiae에서 최저 $0.01ng/{\mu}l$까지 검출됨을 확인 할 수 있었다. 따라서 본 연구에서 개발된 duplex-PCR 분석법을 이용한 전갱이속 어류의 종 판별법은 정확도와 민감도가 우수하여 수산물의 수출입 및 시중에 불법적으로 유통 가능성이 있는 제품을 신속하고 과학적으로 판별할 수 있어 수산물안전관리에 활용도가 매우 클 것으로 기대된다.

• 한국어병학회지
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• 제18권2호
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• pp.157-165
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• 2005

2005년 여름에 국내에서 사육되는 가물치에서 대량폐사를 수반하는 새로운 질병이 발견되었다. 감염 어류는 복부팽만과 항문 주위 출혈 이외의 특이한 외부 증상을 나타내지 않았으나 복부를 절개하면 많은 수의 백색 결절이 간, 비장 및 신장을 포함한 내부 장기에서 관찰되었다. 특히 내부 장기의 조직병리학적 관찰에서 granuloma가 관찰되었다. 이들 감염 어류에서 Gram 양성의 사상균이 분리되었다. 분리균은 Nocardia spp.와 non-Nocardia 균의 16S rRNA 염기 분석에 기초한 Nocardia 특이 primer를 사용한 PCR 방법으로 확인하였다. 이것은 어류에서 발생한 Nocardia 감염증의 국내 첫 사례이다.

• 생명과학회지
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• 제24권4호
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• pp.428-436
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• 2014

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP)법은 등온에서 DNA 주형을 변성시키지 않고 실시하기 때문에, autocycling 가닥 변위 DNA 합성에 의존한다. 그래서 고가의 PCR 장비를 필요로 하지 않고 등온 유지가 가능한 저가의 장비인 항온 수조, 오븐, 온장고 등에서 증폭이 가능하다. 본 연구진은 Streptococcus parauberis의 random primer중에서 5개를 선정하여, 신장도가 높은 2개의 primer를 이용하여 최적 반응온도 및 최적 반응시간, 최적 반응 조건들을 확립하였다. 그리고 기존의 PCR과 LAMP의 민감도의 비교 분석을 측정한 결과, LAMP의 높은 검출 한계를 확인할 수 있었다. 본 논문에서는 non-target DNA의 영향을 받지 않고 등온 조건 하에서 DNA를 증폭시킬 수 있는 LAMP법과 SYBR-green I를 이용하여 시각화시켰으며, 기존의 PCR과 비교 분석함으로써, S. parauberis에 대한 신속하고 정확한 진단법을 확립하였다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제26권11호
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• pp.678-688
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• 2023

Flatfish are one of the largest families in the order Pleuronectiformes and are economically important edible marine fish species. However, they have similar morphological characteristics leading to challenges in classifying correctly, which may result in mislabeling and illegal sales, such as fraudulent labeling of processed food. Therefore, accurate identification is important to ensure the quality and safety of domestic markets in Korea. Species-specific primers were prepared from the mainly consumed eleven species of the order Pleuronectiformes. To rapidly identify the 11 flatfish species, a highly efficient, rapid, multiplex polymerase chain reaction (PCR) with species-specific primers was developed. Species-specific primer sets were designed for the mitochondrial DNA cytochrome c oxidase subunit I gene. Species-specific multiplex PCR (MSS-PCR) either specifically amplified a PCR product of a unique size or failed. This MSS-PCR analysis is easy to perform and yields reliable results in less time than the previous Sanger sequencing methods. This technique could be a powerful tool for the identification of the 11 species b the family Pleuronectidae and can contribute to the prevention of falsified labeling and protection of consumer rights.

• 한국어병학회지
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• 제11권1호
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• pp.61-67
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• 1998

PCR을 사용하여 양식 해산어에 iridovirus 감염 여부를 신속히 진단하고자 하였다. 먼저 폐사를 유발하는 iridovirus의 genomic DNA를 pUC19 vector에 cloning한 후 이 clone들의 염기 서열을 GenBank의 염기 서열과 비교 분석하였다. 이들의 염기 서열을 기초로 하여 PCR primer를 제조한 후 PCR을 수행하였다. 정상적인 어류 세포에서는 DNA의 증폭이 일어나지 않았으나 iridovirus에 감염된 세포와 순수 분리된 iridovirus에서는 DNA의 증폭이 일어났다. 이로부터 짧은 시간 내에 폐사를 유발하는 iridovirus를 신속히 진단할 수 있음이 확인되었으며 이러한 PCR을 이용한 진단은 iridovirus의 감염을 확인할 수 있는 간단하고도 정확한 방법을 제공해준다.