• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제25권2호
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• pp.288-295
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• 2015

Salmonella enterica serovar Enteritidis is the predominant agent causing salmonellosis in chickens and other domestic animals. In an attempt to identify antigenic S. Enteritidis outer membrane proteins (OMPs) that may be useful for subunit vaccine development, we established a proteomic map and database of antigenic S. Enteritidis OMPs. In total, 351 and 301 spots respectively from S. Enteritidis strain 270 and strain 350 were detected by two-dimensional gel electrophoresis. Fifty-one antigen-reactive spots were detected by antisera on two-dimensional immunoblots and identified as 12 specific proteins by matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry. OmpA and DNA starvation/stationary phase protection protein (Dps) were the most abundant proteins among the identified OMPs, comprising 22 and 12 protein species, respectively. Interestingly, we found that the Dps of S. Enteritidis is also antigenic. OmpW was also verified to have high antigenicity. These results show that OmpA, Dps, and possibly OmpW are antigenic proteins. This study provides new insights into our understanding of the immunogenic characteristics of S. Enteritidis OMPs.

• 멤브레인
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• 제19권3호
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• pp.252-260
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• 2009

산성 용액의 수처리가 폴리아크릴로니트릴계 중공사형 한외여과막에 미치는 영향을 십자흐름 방식의 순환식 막 모듈 여과 장치를 이용하여 연구하였다. 막 모듈 여과장치를 이용하여 pH 2인 강산성 용액의 수처리를 시작한 지 약 80시간이 경과되었을 때 막 투과량(permeate flux)이 급격히 감소하는 것을 관측하였다. 또한, 수처리 시간 별로 막 모듈 여과장치의 공급조에서 채취한 샘플 용액의 자외선/가시광선 흡수 스펙트럼과 기체 크로마토그래피/질량분석(gas chromatography/mass spectrometry, GC/MS) 스펙트럼을 분석한 결과 수처리 시간이 경과함에 따라 막 모듈을 통과한 농축액 속에 새로운 유기 화합물이 생성된다는 사실을 알아내었다. 질량스펙트럼 분석을 통해 이 화합물을 1,6-dioxacyclododecane-7,12-dione이라고 예측하였으며, 각종 플라스틱 특히 폴리우레탄 제조 시 사용되는 첨가제 중 하나라는 사실도 알아내었다. 수처리에 사용된 막에 대한 전자주사 현미경 사진 및 고체 NMR 분석 등의 추가 실험을 통해 산성 용액 수처리 과정에서 발생한 막 투과량의 감소는 산성 용액 하에서 일어나는 UF막의 변형에 의한 것이 아니라 막 모듈 여과장치에 사용된 폴리우레탄 튜브에서 산과의 반응에 의해 용출된 저 분자량의 유기화합물이 막 오염 현상을 일으켰기 때문인 것으로 결론지었다. 이번 연구 결과는 산성 용액의 수처리 공정 시 UF막 자체의 산에 대한 반응성 뿐 아니라 막 모듈을 포함한 수처리 장치 자체의 산에 대한 반응성 역시 산 용액의 수처리 효율은 물론, 산을 이용한 막의 화학 세정 효율 및 수처리 막의 pH 사용 한계를 결정하는 데 매우 중요한 요소 중 하나라는 것을 보여준다.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제31권2호
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• pp.275-280
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• 2010

Actinobacillus actinomycetemcomitans is a gram-negative, nonmotile coccobacillus bacterium that is associated with several human diseases, including endocarditis, meningitis, osteomyelitis, subcutaneous abscesses and periodontal diseases. A full-length Omp1-like protein gene from A. actinomycetemcomitans was cloned into a pQE30 vector and overexpressed in Escherichia coli BL21(DE3) cells. The protein revealed sequence homologies to Seventeen kilodalton proteins (Skp) from Pasteurella multocida and E. coli that have been characterized as periplasmic chaperones. This soluble Omp1-like protein was successfully purified to homogeneity for further folding and functional studies. The purity, identity, and conformation of the protein were determined using sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, matrix-assisted laser desorption ionization mass spectrometry, circular dichroism, fluorescence spectroscopic, and differential scanning calorimetric studies. We showed that the protein formed an oligomer larger than a tetramer. We found, further, that it is comprised of mostly $\alpha$-helices and boasts high thermal stability.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제32권4호
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• pp.269-273
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• 2005

Methylotrophic 효모 Pichia pastoris 발현시스템을 사용하여 인간 TLR9 단백질의 세포내 TIR 도메인을 발현하였다. TIR 단백질이 P. pastoris에서 발현되어 배지 속으로 분비되는 것을 SDS-PAGE로 확인하였고, 발현된 단백질을 western-blot, MALDI-TOF 질량분석으로 동정하였다. 이를 통하여 TIR 딘백질이 P. pastoris에서 안정적으로 발현됨을 알 수 있었다. 그리고 발현된 단백질을 니켈 친화, 양이온교환수지, 겔 투과 크로마토그라피를 사용하여 순수 분리 정제하였다. P. pastoris를 이용한 단백질의 발현과 정제방법은 대장균에서 잘 발현되지 않는 단백질의 발현에 응용될 수 있을 것이다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제27권1호
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• pp.36-42
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• 2017

In this work, we isolated a surface layer protein (SLP) from a Bacillus thuringiensis (Bt) strain to evaluate it cytotoxic effects against MDA-MB-231 human breast cancer cells. AP11 was selected from a g roup of Bt strains using SLP olig onucleotides developed from Bacillus conserved regions. The AP11 strain was grown in Luria Bertani medium until the late exponential phase; an 86 kDa protein was extracted using 5 M LiCl and identified by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. It corresponded to a multispecies SLP highly similar to previously described SLPs in Bt. The MDA-MB-231 breast cancer cells $LC_{50}$ was obtained using $0.25{\mu}g/ml$ of the isolated SLP. HaCat non-cancerous cells presented 90% survival using the same protein concentration. Our data suggest that SLP cytotoxicity against MDA-MB-231 could be induced by an interaction with the CDH11 cell membrane receptor.

• Mycobiology
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• 제38권4호
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• pp.302-309
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• 2010

Formic acid is a representative carboxylic acid that inhibits bacterial cell growth, and thus it is generally considered to constitute an obstacle to the reuse of renewable biomass. In this study, Saccharomyces cerevisiae was used to elucidate changes in protein levels in response to formic acid. Fifty-seven differentially expressed proteins in response to formic acid toxicity in S. cerevisiae were identified by 1D-PAGE and nano-liquid chromatography-tandem mass spectrometry (nano-LC-MS/MS) analyses. Among the 28 proteins increased in expression, four were involved in the MAP kinase signal transduction pathway and one in the oxidative stress-induced pathway. A dramatic increase was observed in the number of ion transporters related to maintenance of acid-base balance. Regarding the 29 proteins decreased in expression, they were found to participate in transcription during cell division. Heat shock protein 70, glutathione reductase, and cytochrome c oxidase were measured by LC-MS/MS analysis. Taken together, the inhibitory action of formic acid on S. cerevisiae cells might disrupt the acidbase balance across the cell membrane and generate oxidative stress, leading to repressed cell division and death. S. cerevisiae also induced expression of ion transporters, which may be required to maintain the acid-base balance when yeast cells are exposed to high concentrations of formic acid in growth medium.

• Animal Bioscience
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• 제35권9호
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• pp.1351-1359
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• 2022

Objective: The objective of this study was to analyse the differentially abundant proteins caused by freeze-thawing of ram sperm and explore candidate proteins of interest for their ability to improve ram sperm cryopreservation outcomes in vitro. Methods: Sperm were from three mature Dorper. Fresh and frozen sperm proteins were extracted, and the differentially abundant proteins were analysed by mass spectrometry. Among these proteins, lactoferrin (LTF) was selected to be added before cryopreservation. Next, sperm samples were diluted in Tris extender, with the addition of 0, 10, 100, 500, and 1,000 ㎍/mL of LTF. After thawing, sperm quality was evaluated by motility, plasma membrane integrity, mitochondrial activity and reactive oxygen species (ROS). Results: Cryopreservation significantly altered the abundance of 40 proteins; the abundance of 16 proteins was increased, while that of 24 proteins was decreased. Next, LTF was added to Tris extender applied to ram sperm. The results showed that sperm motility and plasma membrane integrity were significantly improved (p<0.05) by supplementation with 10 ㎍/mL LTF compared to those in the control group. There was no significant difference in mitochondrial activity between the 0 ㎍/mL group and other groups (p>0.05). Supplementation of the cryoprotective extender with 10 ㎍/mL LTF led to decreased ROS levels compared with those in the control and other groups (p<0.05). Conclusion: The LTF is an important protein during cryopreservation, and the addition of 10 ㎍/mL LTF to a cryoprotective extender can significantly improve the function of frozen ram sperm.

• 전기화학회지
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• 제12권2호
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• pp.181-188
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• 2009

carbon nanofiber (CNF)의 표면을 질산과 황산을 사용하여 산화시킨 후 백금 촉매를 modified polyol method로 담지시켰다. 산처리 시간이 길어질수록 탄소 표면에 산소 작용기의 양이 증가 했으며 그 결과 백금 담지량이 증가하고 분산도가 향상되었다. CNF의 산처리 시간이 전기화학적 부식특성에 미치는 영향을 평가하기 위해서 단위전지형태에서1.4 V의 정전압 조건을 30분간 인가하였으며 이 때 발생한 $CO_2$ 의 양을 on-line mass spectrometry로 측정하였다. 실험 결과 산처리한 CNF를 사용한 Pt/CNF 촉매가 산처리 하지 않은 CNF를 담체로 사용한 경우보다 $CO_2$ 발생량이 많았으며 산처리 시간이 증가할수록 $CO_2$ 발생량이 증가하였다. 부식실험 이후 성능감소의 폭은 카본부식이 증가할수록 증가하였다. 이는 CNF에 대한 산처리가 촉매 담지에는 유리할 수 있으나 전기화학적 카본 부식을 가속화 시키는 결과를 초래하여 결과적으로 연료전지 내구성을 저하시키는 요인이 될 수 있는 것으로 사료된다.

• 분석과학
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• 제31권4호
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• pp.161-170
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• 2018

메스암페타민(methamphetamine, MA)과 암페타민(amphetamine, AP)은 전세계적으로 널리 퍼진합성 흥분제로 보건 및 사회 문제, 경제적 비용 발생 등의 다양한 문제를 일으킨다. 또한 이러한 마약은 중독 및 남용 가능성이 매우 높기 때문에 확산 방지를 위한 방안의 하나로 복용자의 생체시료에서 이들 마약을 검출하기 위한 분석법 개발이 필요하다. 따라서 본 연구에서는 액체크로마토그래피-질량분석법(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)를 이용하여 소변에서 MA와 4-하이드록시메스암페타민(4-hydroxymethamphetamine, 4HMA), AP, 4-하이드록시암페타민(4-hydroxyamphetamine, 4HA)을 동시에 분석할 수 있는 분석법을 개발하였고 유효성 평가를 수행하였다. 전처리 시간 단축을 위해 50000 g에서 3 min 동안 초고속원심분리 후 시료 희석 주입법을 이용하여 LC-MS/MS에 주입하였다. 분리관은 역상 C18 컬럼을 사용하였고, 정량분석을 위해 MRM (multiple reaction monitoring) 모드를 적용하였다. 가중계수 $1/x^2$에서 정량 범위는 MA는 10-2500 ng/mL, AP는 1.0-800 ng/mL, 4HA와 4HMA는 2.0-200 ng/mL로 설정하였고, 검량선의 직선성은 결정계수($r^2$)를 구하여 평가하였다. 초고속원심분리법의 효율성을 확인하기 위해 전처리 과정으로 시린지 필터(membrane-filtration)를 적용한 결과와 비교하였고, 그 결과 분석물질에 따라 6-15 % 성능이 우수한 것으로 나타났다. 일내(intra-day)와 일간(inter-day) 정밀도는 6.6 % 미만이었고, 정확도는 -14.9-11.3 % 였다. 최저정량한계(LLOQ)는 2.0 ng/mL (4HA 및 4HMA), 1.0 ng/mL (AP), 10 ng/mL (MA)로 확인되었다. 선택성, 검출한계, 희석무결성, 기질효과, 효율성, 안정성을 평가한 결과 만족스러운 측정값을 얻었다. 또한 개발된 분석법을 마약 복용자의 소변에 적용하여 분석법의 유용성을 확인하였다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제58권3호
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• pp.249-255
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• 2020

Toxoplasma gondii, a ubiquitous, intracellular parasite of the phylum Apicomplexa, infects an estimated one-third of the human population as well as a broad range of warm-blooded animals. We have observed that some tyrosine kinase inhibitors suppressed the growth of T. gondii within host ARPE-10 cells. Among them, afatinib, human epithermal growth factor receptor 2 and 4 (HER2/4) inhibitor, may be used as a therapeutic agent for inhibiting parasite growth with minimal adverse effects on host. In this report, we conducted a proteomic analysis to observe changes in host proteins that were altered via infection with T. gondii and the treatment of HER2/4 inhibitors. Secreting proteins were subjected to a procedure of micor basic reverse phase liquid chromatography, nano-liquid chromatography-mass spectrometry, and ingenuity pathway analysis serially. As a result, the expression level of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K, semaphorin 7A, a GPI membrane anchor, serine/threonine-protein phosphatase 2A, and calpain small subunit 1 proteins were significantly changed, and which were confirmed further by western blot analysis. Changes in various proteins, including these 4 proteins, can be used as a basis for explaining the effects of T. gondii infections and HER2/4 inhibitors.