• 제목/요약/키워드: Fluorescence in-situ hybridization (FISH)

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Molecular and Cytogenetic Analysis of Transgenic Plants of Rice(Oryza sativa L.) Produced by Agrobacterium-mediated Transformation

  • Cho, Joon-Hyeong;Kim, Yong-Wook
    • Plant Resources
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    • 제7권1호
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    • pp.39-46
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    • 2004
  • To demonstrate the importance of transformation efficiency in independent event, molecular and cytogenetic analysis were conducted with genomic DNA and chromosome of transgenic plants produced by Agrobacterium tumefeciens LBA4404 (pSBM-PPGN: gusA and bar). Selection ratios of putative transgenic calli were similar in independent experiments, however, transformation efficiencies were critically influenced by the type of regeneration media. MSRK5SS-Pr regeneration mediun, which contains 5 mgL$^{-1}$ kinetin, 2% (w/v) sucrose in combination with 3% (w/v) sorbitol, and 500 mgL$^{-1}$ proline, was efficient to produce transgenic plant of rice from putative transgenic callus in the presence of L-phosphinotricin (PPT). With MSRK5SS-Pr medium, transformation efficincies of Nagdongbyeo were significantly enhanced from 3.7% to 6.3% in independent callus lines arid from 7.3% to 19.7% in plants produced, respectively. Stable integration and expression of bar gene were confirmed by basta herbicide assay, PCR amplification and Southern blotting of bar gene, and fluorescence in situ hybridization (FISH) analysis using pSBM-PPGN as a probe. In Southern blot analysis, diverse band patterns were observed in total 44 transgenic plants regenerated from 20 independent PPT resistant calli showing from one to five copies of T-DNA segments, however, the transformants obtained from one callus line showed the same copy numbers with the same fractionized band patterns.

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깽깽이풀의 핵형분석과 McFISH를 이용한 rDNA의 물리지도 작성 (Karyotype Analysis and Physical Mapping of rDNAs Using McFISH in Jeffersonia dubia Benth)

  • 김수영;최혜운;구달회;김찬수;방재욱
    • 한국약용작물학회지
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    • 제13권1호
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    • pp.48-51
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    • 2005
  • 보호식물이며, 약용식물인 깽깽이풀 (Jeffersonia dubia)을 대상으로 핵형 분석과 McFISH 기법을 이용한 염색체 분석을 수행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 체세포 염색체 수는 2n=2x=12였으며, 2쌍의 중부 염색체 (염색체 1, 3), 2쌍의 차중부 염색체 (염색체 2, 4) 그리고 2쌍의 차단부 염색체 (염색체 5, 6)로 구분되었고, 염색체의 평균 길이는 $1.95{\sim}3.50{\mu}M$이었다. McFISH기법을 이용하여 45S와 5S rDNA의 염색체상의 위치를 확인한 바, 3쌍의 45S rDNA signal은 4번, 5번 그리고 6번 염색체의 단완 말단 부위에서 관찰되었고, 한 쌍의 5S rDNA signal은 2번 염색체의 동원체 부위에서 관찰되었다.

노화촉진마우스의 텔로미어 함량 분석 (Amount of Telomeric DNA on Lymphocytes in Senescence Mouse by Quantitative Fluorescence in situ Hybridization)

  • 이미랑;도경탁;한정주;문소현;강한석;김선구;신택순;이홍구;황대연;김용균;손시환;최나은;김병우;조병욱
    • 생명과학회지
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    • 제19권10호
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    • pp.1463-1467
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    • 2009
  • Telomeres, comprised of tandem repeats of TTAGGG sequences, are special nucleoprotein structures that protect and stabilize chromosome ends. These structures form the crux of the telomere concept of aging, senescence and genomic instability. The classic terminal restriction fragment (TRF) analysis to quantify the amount of telomeric DNA is disadvantageous in species containing ultra long telomeres like in mice (100Kb). In this study, we used a more sensitive quantitative fluorescence in situ hybridization (Q FISH) technique to quantify telomeric DNA, and used it as a biological aging marker in mice. 12 litters each of Senescence-Resistant (SAMR1) and -Prone (SAMP1) known as senescence accelerated mouse strains were purchased from Central Lab, Animal Inc. We quantified the amount of telomeric DNA using telomere specific DNA probes on the two strains of male mice at 8 weeks, 18 weeks and 26 weeks of age. The amount of telomeric DNA correlated with aging and age associated changes in body and organ weight between SAMR1 and SAMP1 strains of mice. These data suggest the usefulness of the amount of telomeric DNA as a biological aging marker in human aging studies.

Prenatal Diagnosis of Chromosome 22q11.2 Deletions: Experiences in a Single Institution

  • Chae, Yong Hwa;Kwak, Dong Wook;Kim, Moon Young;Park, So Yeon;Lee, Bom Yi;Lee, Yeon Woo;Lee, Young Ho;Song, Mi Jin;Ryu, Hyun Mee
    • Journal of Genetic Medicine
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    • 제10권2호
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    • pp.99-103
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    • 2013
  • Purpose: This study was designed to determine the frequency and echocardiographic findings of 22q11.2 deletions in fetuses with cardiac defects on fetal ultrasound or familial backgrounds of 22q11.2 deletions. Materials and methods: We retrospectively reviewed the medical and ultrasonographic records of 170 fetuses that underwent fluorescence in situ hybridization (FISH) analysis for chromosome 22q11.2 deletions between February 2001 and April 2013. Results: Among 145 fetuses with cardiac defects, six (4.1%) had 22q11.2 deletions. Deletions of 22q11.2 were detected in 6 (5%) of the 120 fetuses with conotruncal defects: 5 (8.9%) of 56 with tetralogy of Fallot (TOF) and 1 (5.9%) of 17 with double outlet right ventricle (DORV). No deletions were found in cases of pulmonary atresia, truncus arteriosus, right aortic arch, or transposition of the great arteries. No 22q11.2 deletions were found in non-conotruncal cardiac malformations. Among 25 fetuses with familial backgrounds of 22q11.2 deletions, one (4%) had a maternally inherited 22q11.2 deletion with no cardiac findings. Conclusion: Knowledge of the frequency and echocardiographic findings of 22q11.2 deletions might be helpful for prenatal genetic counseling. It is advisable to perform FISH analysis for 22q11.2 deletions in pregnancies exhibiting conotruncal cardiac defects such as TOF or DORV.

Prognostic Factors Influencing Clinical Outcomes of Malignant Glioblastoma Multiforme: Clinical, Immunophenotypic, and Fluorescence in Situ Hybridization Findings for 1p19q in 816 Chinese Cases

  • Qin, Jun-Jie;Liu, Zhao-Xia;Wang, Jun-Mei;Du, Jiang;Xu, Li;Zeng, Chun;Han, Wu;Li, Zhi-Dong;Xie, Jian;Li, Gui-Lin
    • Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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    • 제16권3호
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    • pp.971-977
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    • 2015
  • Malignant glioblastoma multiforme (GBM) is the most malignant brain tumor and despite recent advances in diagnostics and treatment prognosis remains poor. In this retrospective study, we assessed the clinical and radiological parameters, as well as fluorescence in situ hybridization (FISH) of 1p19q deletion, in a series of cases. A total of 816 patients with GBM who received surgery and radiation between January 2010 and May 2014 were included in this study. Kaplan-Meier survival analysis and Cox regression analysis were used to find the factors independently influencing patient progression free survival (PFS) and overall survival (OS). Age at diagnosis, preoperative Karnofsky Performance Scale (KPS) score, KPS score change at 2 weeks after operation, neurological deficit symptoms, tumor resection extent, maximal tumor diameter, involvement of eloquent cortex or deep structure, involvement of brain lobe, Ki-67 and MMP9 expression level and adjuvant chemotherapy were statistically significant factors (p<0.05) for both PFS and OS in the univariate analysis. Cox proportional hazards modeling revealed that age ${\leq}50$ years, preoperative KPS score ${\geq}80$, KPS score change after operation ${\geq}0$, involvement of single frontal lobe, deep structure involvement, low Ki-67 and MMP9 expression and adjuvant chemotherapy were independent favorable factors (p<0.05) for patient clinical outcomes.

분말활성탄 및 제올라이트 담지 폴리우레탄 담체를 이용한 바이오필터에서의 악취가스 제거 (Odorous Gas Removal in Biofilter with Powdered Activated Carbon and Zeolite Coated Polyurethane Foam)

  • 이수철;김동진
    • 청정기술
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    • 제18권2호
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    • pp.209-215
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    • 2012
  • 분말활성탄과 제올라이트가 담지된 폴리우레탄 담체를 충진한 파일롯 규모의 바이오필터를 이용하여 암모니아와 황화수소의 처리 성능을 평가하였다. 약 10개월간 하수처리장 슬러지 농축조에서 발생하는 악취를 대상으로 바이오필터 유입 암모니아 농도는 0.1~1.5 $ppm_v$, 황화수소 농도는 2~20 $ppm_v$ 범위에서 운전되었다. 바이오필터의 공탑체류시간 3.6~5초 범위에서 초기 순응기간을 제외하고는 거의 모든 경우 100%에 가까운 악취 제거율을 보여주었다. 바이오필터에서의 기체흐름에 의한 압력손실도 매우 낮아 10개월 동안 최대 31 mm $H_2O$ 정도의 차압이 발생하였다. 이것은 본 연구에 이용된 바이오필터의 막힘이나 담체의 압착 현상이 거의 일어나지 않아 장기간의 운전에도 안정성을 확인할 수 있었다. 담체에 부착하여 서식하는 미생물군집은 바이오필터의 처리 성능에 중요한 영향을 미치는데 특히 암모니아나 황화수소를 제거하기 위한 암모니아 산화균과 황산화균의 분포가 중요하다. FISH (Fluorescence in Situ Hybridization) 방법으로 확인한 결과 질산화를 주관하는 암모니아 산화균인 Nitrosomonas sp.와 황산화균인 Thiobacillus ferroxidans가 검출되었다. 또한 바이오필터의 운전기간이 길어질수록, 그리고 악취의 유입부분이 유출부분에 비해 미생물 분포량이 더 많음을 확인하였다.

연속회분반응기의 아질산 축적 특성과 질산화 및 탈질 미생물의 정량적 분포 연구 (Nitrite Accumulation Characteristics and Quantitative Analyses of Nitrifying and Denitrifying Bacteria in a Sequencing Batch Reactor)

  • 김동진;권현진;윤정이;차기철
    • 한국물환경학회지
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    • 제24권3호
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    • pp.383-390
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    • 2008
  • Recently, the interests on economical nitrogen removal from wastewater are growing. As a method of the novel nitrogen removal technology, nitrogen removal via nitrite pathway by selective inhibition of free ammonia and free nitrous acid on nitrite oxidizing bacteria have been intensively studied. The inhibition effects of free ammonia and free nitrous acid are low when domestic wastewater is used, however, because of its relatively lower nitrogen concentration than the wastewater from industry and landfill, etc. In this study, a sequencing batch reactor (SBR) is proposed for nitrogen removal to investigate the effect of the low nitrogen concentration on nitrite accumulation. Nitrification efficiency reached almost 100% during the aerobic cycle and the maximum specific nitrification rate ($V_{max,nit}$) reached $17.8mg\;NH_4{^+}-N/g\;MLVSS{\bullet}h$. During the anoxic cycle, average denitrification efficiency reached 87% and the maximum specific denitrification rate ($V_{max,den}$) reached $9.8mg\;NO_3{^-}-N/g\;MLVSS{\bullet}h$. From the analysis the main reason of nitrite accumulation in the SBR was free nitrous acid rather than free ammonia. Nitrite accumulation increased with the decrease of organic content in the wastewater and the mechanism is not well understood yet. From the result of fluorescent in situ hybridization, the distribution of nitrite oxidizing bacteria was in equilibrium with ammonium oxidizing bacteria when nitrite accumulation did not occur.

Importance of FISH combined with Morphology, Immunophenotype and Cytogenetic Analysis of Childhood/Adult Acute Lymphoblastic Leukemia in Omani Patients

  • Goud, Tadakal Mallana;Al Salmani, Kamla Khalfan;Al Harasi, Salma Mohammed;Al Musalhi, Muhanna;Wasifuddin, Shah Mohammed;Rajab, Anna
    • Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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    • 제16권16호
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    • pp.7343-7350
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    • 2015
  • Genetic changes associated with acute lymphoblastic leukemia (ALL) provide very important diagnostic and prognostic information with a direct impact on patient management. Detection of chromosome abnormalities by conventional cytogenetics combined with fluorescence in situ hybridization (FISH) play a very significant role in assessing risk stratification. Identification of specific chromosome abnormalities has led to the recognition of genetic subgroups based on reciprocal translocations, deletions and modal number in B or T-cell ALL. In the last twelve years 102 newly diagnosed childhood/adult ALL bone marrow samples were analysed for chromosomal abnormalities with conventional G-banding, and FISH (selected cases) using specific probes in our hospital. G-banded karyotype analysis found clonal numerical and/or structural chromosomal aberrations in 74.2% of cases. Patients with pseudodiploidy represented the most frequent group (38.7%) followed by high hyperdiploidy group (12.9%), low hyperdiploidy group (9.7%), hypodiploidy (<46) group (9.7%) and high hypertriploidy group (3.2%). The highest observed numerical chromosomal alteration was high hyperdiploidy (12.9%) with abnormal karyotypes while abnormal 12p (7.5%) was the highest observed structural abnormality followed by t(12;21)(p13.3;q22) resulting in ETV6/RUNX1 fusion (5.4%) and t(9;22)(q34.1;q11.2) resulting in BCR/ABL1 fusion (4.3%). Interestingly, we identified 16 cases with rare and complex structural aberrations. Application of the FISH technique produced major improvements in the sensitivity and accuracy of cytogenetic analysis with ALL patients. In conclusion it confirmed heterogeneity of ALL by identifying various recurrent chromosomal aberrations along with non-specific rearrangements and their association with specific immunophenotypes. This study pool is representative of paediatric/adult ALL patients in Oman.

2배체 담배 Nicotiana plumbaginifolia의 핵형 분석과 rDNAs의 Physical Mapping (Karyotype Analysis and Physical Mapping of rDNAs in Diploid Nicotiana plumbaginifolia)

  • 조혜경;구달회;김수영;방재욱
    • Journal of Plant Biotechnology
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    • 제30권1호
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    • pp.7-11
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    • 2003
  • 2배체 담배인 Nicotiana plumbaginifolia를 대상으로 상염색법과 FISH 기법을 통한 염색체 분석을 수행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. N. plumbaginifolia의 체세포 염색체 수는 2n=20이며, arm ratio 비교를 통한 핵형 분석에서 중기 염색체 조성은 3쌍의 중부 염색체 (염색체 1,2 및 7)와 7쌍의 차중부 염색체 (염색체 3, 4, 5, 6, 7, 9 및 10)로 관찰되었다. 염색체의 길이는 2.29~4.50 $\mu\textrm{m}$로 나타났으며, 염색체 1번과 2번은 부수체 염색체로 관찰되었다. 5S와 45S rDNA를 탐침으로 FISH를 수행한 결과 2번 염색체의 동원체 부위에서 한 쌍의 5S signal이 확인되었고, 1번 염색체의 부수체에서 한 쌍의 45S signal이 관찰되었다.

FISH 기법을 이용한 소 수정란의 성감별과 산자 생산 (The Production of Sex Determined Cattle by Embryonic Sexing Using Fluorescence In Situ Hybridization Technique)

  • 손시환;박희성
    • 한국수정란이식학회:학술대회논문집
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    • 한국수정란이식학회 2007년도 춘계학술세미나 및 워크숍
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    • pp.39-50
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    • 2007
  • 본 연구에서는 소의 체외 수정란에 대해 Y 염색체 특이 DNA 표지를 이용하여 FISH 기법으로서 수정란의 성감별을 수행하고 이를 이식하여 산전 성감별 개체 생산을 시도하였다. 본 연구에 이용된 Y-염색체 특이 DNA probe는 bovine male specific DNA로 알려진 btDYZ-1의 385bp 단편으로 제작하였고, Dig-PCR 방법으로 labeling하였다. 수정란의 성감별은 IVF로서 생산된 $8\;cell{\sim}blastocyst$ 단계의 수정란을 공시하고 이들로부터 단일할구를 생검하여 분석하였다. 생검 방법은 투명대를 laser로 drilling하고 $1{\sim}2$개의 할구를 squeezing하여 분리하였으며 demi-embryo는 1일간 재 배양하여 배반포기 단계에서 이식하였다. 우선, 본 probe의 신뢰성을 검정하기 위하여 생검된 할구는 FISH 기법으로 Y 염색체 존재 여부를 판단하고, 이의 demi-embryo는 재 배양하여 중기상을 유도하여 핵형분석한 후 비교 검토한 바 97.6%의 일치율을 나타내었다. 한편, 수정란에서 성감별을 위한 FISH의 적용 여부를 검토하고자 총 3937개의 공시란 중 3657개(93%)가 분석이 가능하였고, 이들 중 45.8%가 Y 염색체 특이적 접합 발현 양상이 나타났다. 본 결과를 토대로 경남 진주 인근 지역 농장의 15두의 소를 대상으로 성 감별 수정란을 이식한 결과, 7두가 임신한 것으로 확인되었고 이들 중 5마리가 출산하였다. 뿐만 아니라 출산된 송아지들은 모두 예견된 성과 100% 일치하는 것으로 나타났다. 따라서 본 연구에서 적용한 FISH 기법은 수정란의 성감별에 효율성이 높고 매우 높은 정확성을 나타냄에 따라 실질적으로 성감별 수정란의 대량생산이 가능할 것으로 사료되며, 농가차원에서 산업적 실용화가 될 수 있을 것으로 기대한다.twork descrition)를 통해 교통분석후의 제반 교통특성(교통량, 교통량/용량 비(比), 속도 등)을 교통망상에 표시할 수 있음으로서 의사결정에 보다 많은 도움을 줄 수 있을 것이다. 비트율의 증가와 화질 열화는 각각 최대 1.32%와 최대 0.11dB로 무시할 수 있을 정도로 작음을 확인 하였다.을 알 수 있었다. 현지관측에 비해 막대한 비용과 시간을 절약할 수 있는 위성영상해석방법을 이용한 방법은 해양수질파악이 가능할 것으로 판단되며, GIS를 이용하여 다양하고 복잡한 자료를 데이터베이스화함으로써 가시화하고, 이를 기초로 공간분석을 실시함으로써 환경요소별 공간분포에 대한 파악을 통해 수치모형실험을 이용한 각종 환경영향의 평가 및 예측을 위한 기초자료로 이용이 가능할 것으로 사료된다.염총량관리 기본계획 시 구축된 모형 매개변수를 바탕으로 분석을 수행하였다. 일차오차분석을 이용하여 수리매개변수와 수질매개변수의 수질항목별 상대적 기여도를 파악해 본 결과, 수리매개변수는 DO, BOD, 유기질소, 유기인 모든 항목에 일정 정도의 상대적 기여도를 가지고 있는 것을 알 수 있었다. 이로부터 수질 모형의 적용 시 수리 매개변수 또한 수질 매개변수의 추정 시와 같이 보다 세심한 주의를 기울여 추정할 필요가 있을 것으로 판단된다.변화와 기흉 발생과의 인과관계를 확인하고 좀 더 구체화하기 위한 연구가 필요할 것이다.게 이루어질 수 있을 것으로 기대된다.는 초과수익률이 상승하지만, 이후로는 감소하므로, 반전거래전략을 활용하는 경우 주식투자기간은 24개월이하의 중단기가 적합함을 발견하였다. 이상의 행태적 측면과 투자성과측면의 실증결과를 통하여 한국주식시장에 있어서 시장수익률을 평균적으로 초과할 수 있는 거래전략은 존재하므로 이러한 전략을 개발 및 활용할 수 있으며, 특히, 한국주식시장에 적합한 거래전략은 반전거래전략이고, 이 전략의 유용성은 투자자가 설정한 투자기간보다 더욱

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