식물자원으로부터 식물병원균에 대한 항균물질을 탐색하고자 국내에서 재배한 40종의 약용식물 추출물을 대상으로 항균활성을 검색하였다. 우선, 각 식물을 methanol (MeOH)로 추출, 농축한 MeOH추출물을 시료로 하여 $2000{\mu}g/mL$ 농도수준에서 6가지 식물병에 대한 in vivo 방제효과를 조사하였다. 40종의 시료 중 14종의 시료가 적어도 한가지이상의 식물병에 대하여 90% 이상의 방제효과를 나타내었다. 벼 도열병, 토마토 역병 및 밀 붉은녹병에 대해서는 각각 8개, 7개 및 3개의 시료가 90% 이상의 효과를 나타내었으나, 벼 잎집무늬마름병, 토마토 잿빛곰팡이병 및 보리 흰가루병에 대해서는 90% 이상의 방제효과를 보이는 시료는 없었다. 벼 도열병에 대하여 높은 활성을 보이는 당귀(Angelica gigas, 당귀(當歸))와 백지 (Angelica dahurica, 백지(白芷))의 MeOH추출물로부터 solvent partitioning과 column chromatography를 통하여 각각 1개 및 2개의 항균물질을 분리하였으며 이들 물질은 질량분석 및 핵자기공명분석에 의하여 모두 coumarin계 물질인 decursin, imperatorin 및 isoimperatorin으로 동정되었다. 구조와 항균활성간의 관계를 알아보기 위하여 분리한 3개의 물질을 7번 위치에 free hydroxyl기를 가지고 있는 umbelliferone (7-hydroxycoumarin)과 scopoletin (6-methoxy-7-hydroxycoumarin)과 비교하여 in vitro 및 in vivo 항균활성을 조사하였다. In vitro에서 균사생육억제활성을 조사한 결과, 이들 물질들은 대상식물병원 곰팡이에 대하여 50% 균사생육억제농도 ($IC_{50}$)가 대부분 $200{\mu}g/mL$ 이상으로 나타나 항균활성이 비교적 약한 것으로 나타났다. 또한 7번 위치에 hydroxyl기가 노출되어 있는 umbelliferone과 scopoletin보다는 7번 위치의 free hydroxyl기 대신에 cyclic alkoxy기로 존재하는 decursin과 imperatorin이 곰팡이에 대한 항균활성이 강한 것으로 나타났다. 특히, decursin과 imperatorin은 각각 Pythium ultimum과 Magnaporthe grisea에 대하여 $25{\mu}g/mL$ 이하의 $IC_{50}$를 보여 강한 항균활성을 나타냈다. In vivo 실험에서는 decursin과 imperatorin은 여섯 가지 식물병 중 벼 도열병에 대하여 항균활성이 높은 것으로 나타났으며, 다른 세 개의 물질은 식물병 방제활성이 거의 없는 것으로 나타났다. 이상의 실험결과 7-hydroxycoumarin계 물질들의 항진균활성과 관련하여 7번 위치에 free hydroxyl기가 있는 것보다는 이 hydroxyl기가 보다 안정한 cyclic alkoxy기로 치환되는 것이 높은 항균활성을 나타내는데 중요하다는 것을 알 수 있었다.
Background: In the herbal medicine market, Angelica gigas, Angelica sinensis, and Angelica acutiloba are all called "Danggui" and used confusingly. We aimed to assess the genetic diversity and relationships among 14 Angelica species collected from different global seed companies. Toward this aim we developed DNA markers to differentiate the Angelica species. Methods and Results: A total of 14 Angelica species, A. gigas, A. acutiloba, A. sinensis, A. pachycarpa, A. hendersonii, A. arguta, A. keiskei, A. atropurpurea, A. dahurica, A. genuflexa, A. tenuissima, A. archangelica, A. taiwaniana, and A. hispanica were collected. The genetic diversity of all 14 species was analyzed by using five chloroplast DNA-based simple sequence repeat (SSR) markers and employing the DNA fragment analysis method. Each primer amplified 3 - 12 bands, with an average of 6.6 bands. Based on the genetic diversity analysis, these species were classified into specific species groups. The cluster dendrogram showed that the similarity coefficients ranged from 0.77 to 1.00. Conclusions: These findings could be used for further research on cultivar development by using molecular breeding techniques and for conservation of the genetic diversity of Angelica species. The analysis of polymorphic SSRs could provide an important experimental tool for examining a range of issues in plant genetics.
구릿대(A. dohurica) 잎의 항산화성과 생리활성을 탐색하기 위하여 물과 에탄올을 용매로 환류 추출방법과 가압열수 추출방법으로 만든 각 추출물에 대하여 폴리페놀의 함량을 측정하였으며, 구릿대 잎의 항산화성을 알아보기 위하여 전자공여능, SOD 유사활성능, 아질산염 소거능을 측정하였다. 또한 xanthine oxidase 및 tyrosinase 저해 활성을 측정하여 구릿대의 생리활성에 대하여 분석하였다. 폴리페놀의 총 함량은 가압 열수 추출물(PW; 95.23 mg/g)>환류 에탄올 추출물(RE; 69.81 mg/g)>환류 물 추출물(RW;41.06 mg/g)으로 PW가 RW 보다 2배 이상 많은 폴리페놀을 함유하였다. 전자공여능은 $1,000{\mu}g/mL$의 농도에서 $61.14%{\sim}76.02%$로 에탄올 추출물인 RE가 가장 높았으며, SOD 유사활성능도 19.00%로 가장 높았다. $pH\;1.2,\;1,000{\mu}g/mL$의 농도조건에서 아질산염 소거능은 $44.24%{\sim}54.33%$로 PW에서 가장 높은 소거활성을 나타내었다. Xanthine oxidase 저해율은 $5,000{\mu}g/mL$의 농도에서 97% 이상이었으며, 특히 환류 물 추출물인 RW는 $500{\mu}g/mL$의 농도에서도 97% 이상의 높은 저해 효과를 나타내었으며, PW에서도 90% 이상의 저해율을 나타내었다. Tyrosinase 저해율은 $5,000{\mu}g/mL$의 농도에서 $23.88%{\sim}46.25%$로 RE의 저해율이 가장 높은 것으로 분석되었으며, $5,000{\mu}g/mL$의 농도에서도30% 이상의 저해효과를 나타내었다. 이상의 결과로 보아 구릿대 잎의 가압 열수 추출물은 다른 추출물에 비해 많은 폴리페놀을 추출할 수 있으며, 높은 아질산염 소거효과를 나타내었다. 환류 에탄올 추출물은 다른 추출물에 비해 높은 전자공여능, SOD 유사활성능, 그리고 tyrosinase 저해효과를 나타내는 것으로 분석되었다. 따라서 구릿대 잎은 식품 첨가물 및 화장품 원료로 사용할 수 있는 좋은 생물자원으로 판단된다.
본 연구는 백지 에탄올추출물의 항산화 활성을 알아보기 위하여 총 포리페놀 함량, 총 플라보노이드 함량, 전자공여능을 독립적으로 3회 이상 반복 실시하여 측정 하였고, brown guinea pig(450~500g)의 등 부위에 1500mJ/$cm^2$ 광량의 자외선 조사로 유발시킨 피부(6areas per group)에 1일 2회, 주 5일, 매회 $30{\mu}{\ell}$씩 총 5주간 시료를 도포한 후 염산 케타민으로 마취, 시료를 도포한 피부 부위를 직경12mm의 biopsy punch로 절취하여 10%의 중성 포르말린 용액에 12시간 실온에서 고정한 후 Hematoxylin and eosin(H&E) 염색으로 표피 및 진 조직을 관찰하였다. 백지 에탄올추출물의 총 폴리페놀 함량과 총 플라보노이드 함량을 측정한 결과, 각각 20.7mg/g, 19.5mg/g으로 확인되어 항산화물질 함량이 양호하게 나타났다. 전자공여능을 측정한 결과, 백지 에탄올추출물은 농도가 증가함에 따라 전자공여능 또한 유의하게 증가하였고, $500{\mu}g/m{\ell}$과 $1000{\mu}g/m{\ell}$농도에서 각각 14.8%, 19.8%의 전자공여능을 보여 양성대조군으로 사용한 Dibutylated hydroxytoluene(BHT)보다 공여능이 낮았으나 의미 있는 항산화 효과를 보였다. H&E 염색 결과, 대조군의 표피에서 경미한 비후도가 나타났으나, 백지 에탄올추출물 도포군은 피부조직 배열이 규칙적이며 염증관련 세포 침윤 등의 별다른 이상 징후는 발견되지 않았다. 이상의 결과를 종합하면 백지 에탄올추출물은 천연 항산화제로서 이용가치가 있을 것으로 판단된다.
본 논문은 백지 에탄올추출물의 미백효능을 조사하기 위하여 melan-a cell, 브라운 기니피그 및 HMB-45 염색을 사용하였다. melan-a 세포에 시료를 6.25, 12.5, 25, 50, ${\mu}g/m{\ell}$ 농도로 처치하여 세포 생장율의 변화 관찰 및 멜라닌세포의 형태학적 변화를 관찰하였다. 또한 brown guinea pig (450~500 g)등 부위에 1500 mJ/$cm^2$ 광량의 ultraviolet B조사로 유발시킨 인공색소반 (${\Phi}$ 2 mm)에 1일 2회, 주 5일, 매회 30 ${\mu}{\ell}$씩 총 5주간 시료를 도포하여 주 1회 육안적 변화를 관찰 하였고, 실험 5주째 되는 날 실험동물은 염산 케타민으로 마취 후 시료를 도포한 인공색소반 부위를 biopsy punch로 절취하여 HMB-45 염색으로 멜라닌소체 내 glycoprotein(gp100) 단백질의 조직학적 변화를 관찰 하였다. 세포생장율 측정에서 시료처치 6.25~50 ${\mu}g/m{\ell}$에서의 세포생장율은 높았고, 멜라닌세포의 형태학적 변화에서는 시료처치 농도가 증가할수록 멜라닌합성 및 수지상 돌기가 적게 관찰 되었다. 동물 실험 육안적 관찰에서 시료 도포군이 용매대조군에 비해 멜라닌 색소침착 정도가 확연하게 밝아졌고, gp100 단백질의 조직학적 관찰에서 시료 도포군은 gp100 단백질 발현 정도가 현저하게 줄어들었으며, 영상분석에서도 시료 도포군이 용매대조군에 비해 유의하게(p<0.001) 감소하였는데 이러한 결과는 현미경 관찰 결과와 일치하였다. 이상의 결과를 종합하면 백지 에탄올추출물은 우수한 미백효과가 있는 것으로 판단된다.
한방에서 생약재로 사용되는 백지를 새로운 기능성 소재로 활용하기 위한 연구의 일환으로 환류 추출방법 가압 열수 추출방법으로 물과 에탄올을 용매로 추출하여 각 추출물에 대한 폴리페놀, 전자공여능, SOD 유사활성능, 아질산염 소거능, xanthine oxidase 및 tyrosinase 저해 활성을 측정하여 백지의 생리활성에 대하여 분석하였다. 백지 추출물의 폴리페놀 함량은 25.34$\sim$156.30 mg/g으로 가압 열수 추출물인 PW가 환류 추출물보다 5배 이상 많이 함유된 것으로 분석되었다. 전자공여능은 1,000${\mu}g/mL$ 농도에서 30.56%$\sim$52.74%로 환류 물 추출물인 RW가 가장 높았으며, SOD 유사활성능은 10.96%$\sim$23.24%로 RE가 PW보다 2배 이상 높은 활성을 나타내었다. 아질산염 소거능은 pH 1.2의 1,000 ${\mu}g/mL$의 농도에서 16.81%$\sim$61.47%로 PW에서 가장 높은 소거효과를 나타내었으며 pH 3.0에서도 54.09%로 RW와 RE보다도 3배 이상의 높은 아질산염 소거능을 나타내었다. Xanthine oxidase 저해 활성은 5,000 ${\mu}g/mL$농도에서 85.92%$\sim$90.91%로 RW가 가장 높았으며, RE도 유사한 저해활성을 나타내었다. Tyrosinase 저해 활성은 18.74%$\sim$51.71%로 RE에서 가장 높았다. 에탄올을 용매로 이용한 RE는 SOD유사활성능과 tyrosinase저해 활성이 다른 추출물에 비해 높은 것으로 나타났으며, 가압 열수 추출물인 PW는 고온과 고압으로 가장 많은 폴리페놀이 추출되었으며, 아질산염 소거능도 매우 우수한 것으로 분석되었다. 그러므로 백지는 다량의 폴리페놀과 우수한 생리활성을 나타내므로 천연 항산화제 기능성 제품을 위한 원료로서 유용한 한방 생약자원으로 생각된다.
Objectives : The purpose of this study is to investigate on storage characteristics of Herbal materials treated with Gamma-irradiation(10 KGy). Methods : This experiments were carried out by field survey and storage characteristics were carried out by physicochemical determination. Results : Antimicrobial activity of oriental medicine materials(Angelica dahurica Radix, Glehnia littoralis Radix) were examined, together with investigation of effects on gamma-irradiation. Oriental medicine materials contaminated in microbial cell were tend to be pinhole in packaging materials(polypropylene) by bug and Larva. At the same time, PVDC (polyvinylldichloride) package also was founded in bug and Larva by microbial contamination during storage in room temperature. Conclusions : In conclusion, it is very desirable to dose gamma-irradiation(10 KGy) in these oriental medicine materials in order to prevent microbial activity.
The purpose of this study was to observe the effects of antibacterial activities on various medicinal herbs. Medicinal herbs used this study was Curcuma aromatica, Scutellaria baicalensis, Angelica dahurica, Platycodon grandiflorum, Houttuynia corolata, and Forsythia saxatilis. To evaluation of the antibacterial effect, we used S. gallinarum(ATCC 9184), S. typhimurium(SAL-13, France), S. enteritidis (ATCC 10376), Escherichia coli(E-62, O78), and S. gallinarum(E. coli). Extracts from each medicinal herbs divided into 100mg/ml, 50 mg/ml, 25 mg/ml, and 12.5 mg/ml. Antibacterial activities achieved by the paper disc test. Antibacterial activities was showed at extracts from Scutellaria baicalensis, Houttuynia corolata, Forsythia saxatilis, but little found at Curcuma aromatica, Angelica dahurica, Platycodon grandiflorum.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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