The bacterial motility in sand was studied with Alcaligenes xylosoxidans Y234 which is known as a strong decomposer of aromatic chemicals, especially toluene. Apparent motility coefficient (${\mu}$c,app) and apparent chemotaxis coefficient (${\mu}$c,app) for toluene were measured in the sands which have four different porosities. Adsorption ratio of Alcaligenes xylosoxidans Y234 on the sands was measured as 17%. The ramdom motility coefficients were 0.85∼1.68${\times}$10-3$\textrm{cm}^2$/sec, and decreased as the porosity of sands decreased. Apparent chemotaxis coefficients were measured as 1.1∼6.8${\times}$10-5$\textrm{cm}^2$/sec, and decreased as the porosity decreased and with time. The tendency of alcaligenes xylosoxidans Y234 movement towards toluene seemed very weak and showed little chemotaxis.
A bacterial strain which formed a distinct colony on agar plate containing naphthalene as a vapor phase and grew well ina liquid minimal medium was isolated and identified as Alcaligenes sp. A111. Optimum temperature and pH for the cultivation of Alcaligenes sp. A111 were 30$\cir$C and 7.0, respectively. Cell growth increased dramatically from 12 hours after inoculation and revealed a stationary phase at about 48 hours. Relative growth rate ($\mu$')increased hyperbolically depending on the conceration of naphthalene up to 500 ppm and reached to the maximum value pf 2.8/day, but $\mu$' didn't change within a range of 500~4000 ppm naphthalene. NH$_{4}$Cl or NH$_{4}$NO$_{3}$ was preferrd as a nitrogen source and a P : N ratio by weight og 6 : 1 was favorable to cell growth. Alcaligenes sp. A111 utilized the intermediates of degradation of naphthalene and showed tolerance to benzene, toluene, and octane. therefore, it is suggested that Alcaligenes sp. A111 could be effectively used for the biological treatment of wastewater containing naphthalene in the presence of some aromatic compounds.
Pseudomonas agarici에 의해 발생하는 세균성회색무늬병은 양송이 재배에서 문제가 되는 대표적인 병해이다. 본 연구에서는 세균성회색무늬병의 생물학적 방제법에 이용할 수 있는 길항미생물의 항균활성과 선발된 길항미생물에 대해 폿트 수준의 생물검정 실험을 실시하였다. 재배중인 양송이 배지에서 세균성회색무늬병 병원균을 강하게 억제하는 길항세균 HC12를 선발하였으며, 생리 생화학적 실험과 유전적 실험결과 HC12균주는 Alcaligenes sp.로 동정되었다. Alcaligenes sp. HC12를 양송이에 처리한 결과 63%의 방제효과를 보였다. 따라서 Alcaligenes sp. HC12가 양송이버섯 세균성회색무늬병 방제를 위해 합성농약을 대체할 수 있는 친환경 방제제가 될 수 있을 것으로 생각된다.
Our works performed for preparation of oligosaccharides from carrageenan, seaweed polysaccharide, and one active strain for carrageenan was isolated from sea water and identified to Pseudomonas alcaligenes. Carrageenan degrading enzyme was purified from the culture fluid of isolated strain-Pseudomonas alcaligenes JCL-43, by DEAE-Cellulose, Sephadex G-100, Q-Sepharose and CM Sepharose CL-6B column chromatography. Two enzyme-F-I, F-II- was identified this purifying process, and the molecular weight of the purified carrageenase were estimated to be 23.6kDa and 30.2kDa, respectively. The optimum pH and temperature for two carrageenase activity were 7.0 and 4$0^{\circ}C$. These enzymes were stable in the pH range of 6.0~7.5 and lower than 5$0^{\circ}C$, and required 1.5% NaCl for optimum activity. And these carragennase were inhibited by metal ions such as Cu2+, Zn2+, Hg2+, but increased by Ba2+ and Ca2+, and showed specificity on -carrageenan.
The medium compositions of Alcaligenes eutrophus were optimized for increasing PHB productivity. It is very important to optimize the concentrations of inorganic salts and trace eleme- nts as well as carbon and nitrogen sources to maximize cell growth rate and productivity. The fed-batch culture of Alcaligenes eutrophus by dual feeding of ammonia water and glucose under optimized initial medium concentrations was carried out. Glucose was fed manually according to glucose consumption rate and ammonia water by pH-stat. The final cell concentrations and PHB content in 30 hours were 122 g/l and 65% of dry cell weight(yielding 79 g of PHB/l), respectively and 2.64 g/l/hr of PHB production rate was obtained.
Alcaligenes sp. SH-69 can synthesize poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) from a single carbon source such as glucose. To clone the phaC gene from Alcaligenes sp. SH-69, a polymerase chain reaction was performed using the oligomers synthesized based on the conserved regions of the phaC genes from other bacteria. A PCR product (550 bp) was partially sequenced and the deduced amino acid sequence was found to be homologous to that of the phaC gene from Alcaligenes eutrophus. Using the PCR fragment Southern blotting of Alcaligenes sp. SH-69 genomic DNA digested with several restriction enzymes was carried out. To prepare a partial genomic library, about 5-Kb genomic DNA fragments digested with EcoRI, which showed a positive signal in the Southern blotting, were eluted from an agarose gel, ligated with pUC19 cleaved with EcoRI, and transformed into Escherichia coli. The partial library was screened using the PCR fragment as a probe and a plasmid, named pPHA11, showing a strong hybridization signal was selected. Restriction mapping of the insert DNA in pPHA11 was performed. Cotransformation into E. coli of the plasmid pPHA11 and the plasmid pPHA21 which has phaA and phaB from A. eutrophus resulted in turbid E. coli colonies which are indicative of PHA accumulation. This result tells us that the Alcaligenes sp. SH-69 phaC gene in the pPHA11 is functionally active in E. coli and can synthesize PHA in the presence of the A. eutrophus phaA and phaB genes.
습지의 갈대토양으로부터 중금속에 내성이 있는 세균이 분리되었다. 분리된 균주는 16S rDNA 염기서열분석에 의거하여 Alcaligenes sp.로 동정되었다. 납, 크롬, 카드뮴, 아연 및 구리와 같은 중금속을 배지에 첨가하였다. 분리균주 Alcaligenes sp. KC-1을 구리가 0 mM에서 20 mM의 농도로 첨가된 배지에서 배양하였을 때 균주의 생장에 미치는 독성을 알아보았다. 분리균주는 구리가 존재할 때 42시간 배양된 후 7.34 mM의 $EC_{50}$값과 $OD_{600\;nm}$에서 0.83의 흡광도 값을 보여주는 구리 내성균주였다.
Alcaligenes eutrophus A52의 무세포 추출액으로부터 유안염석 및 DEAE-cellulose 이온교환 크로마토그래피로서 D-$\alpha$-Amino-$\varepsilon$-Caprolactam(DAC) racemase 와 L-$\alpha$-Amino-$\varepsilon$-Caprolactam(LAC) hydrolase를 분획하였다. A. eutrophus A52에 의한 DAC로부터 L-lysine으로의 전환은 DAC가 racemase에 의해 LAC로 전환된 후 hydrolase에 의해 L-lysine으로 가수분해됨을 확인하였다. DEAE-cellulose 이온교환 크로마토그래피에 의해 분리된 racemase의 분획은 최적온도가 55$^{\circ}C$, 최적 pH는 8.0이었으며 hydrolase의 분획은 최적온도가 $65^{\circ}C$ 최적 pH가 9.0이었다. 이 두 효소를 모두 함유하는 무세포 추출 액에 의한 DAC로부터 L-lysine으로의 전환은 6$0^{\circ}C$와 pH8.5에서 최대를 나타내었고 2% 이상의 DAC와 L-lysine에 의해 상당한 저해를 받았으나 0.5% DAC를 3.1mg의 단백질에 상당하는 무세포 추출액으로서 전환시킨 결과 55$^{\circ}C$에서 10시간 동안에 약 98%가 L-lysine으로 전환되었다.
버섯 세균갈성색무늬병원균인 Pseudomonas agarici에 대한 길항미생물로 보고된 Alcaligenes sp. HC12 균주의 배양적 특성과 대량 배양을 위한 최적배양 조건을 설정하였다. HC12균주의 생육온도는 $20{\sim}40^{\circ}C$, pH는 6.0 이상에서 왕성한 생육을 보였다. 대량배양을 위한 효율적인 영양원 선발을 위하여 기본배지에 탄소원 fructose 등 18종, 무기질소원 $NH_4Cl$ 등 6종, 유기질소원 peptone 등 6종 그리고 아미노산 asparagine 등 11종을 각각 1%씩 첨가하였고, 무기염류 13종을 첨가하여 각각에 대한 생육에 미치는 영향을 조사하였다. 또한 선발된 각각의 영양성분들에 대한 최적 농도를 조사하기 위하여 각각의 성분을 최소 0.1%에서 최대 4.0%까지 배지에 첨가하여 배양 후 생육정도를 조사하였다. 그 결과, 대량배양을 위한 생육최적조건은 온도 $30^{\circ}C$, pH 9, 탄소원 0.5% dextrine, 유기질소원 1.5% yeast extract, 무기질소원 1.0% $NaNO_3$, 아미노산 1.5% asparagine 그리고 무기염류는 0.5% $KH_2PO_4$에서 왕성한 생육을 보였다.
Alcaligenes sp.의 인 제거에 대한 환경인자로 각각 온도, pH, 탄소원의 효과를 알아본 결과 $25^{\circ}C$, pH 7, glucose+acetate이 탄소원일 때 인 제거효율이 가장 좋은 것으로 확인 할 수 있었다. 5가지 중금속의 독성효과에 따른 Alcaligenes sp.의 생장은 중금속의 농도가 높아질수록 억제되었으며, $IC_{50}$값은 구리 5.03 mg/L, 카드뮴 0.08 mg/L, 아연 0.73 mg/L, 비소 282.20 mg/L, 니켈 4.74 mg/L로 나타났다. 모든 중금속의 농도가 높아질수록 생장이 억제되어 인 제거 역시 억제되는 것을 확인 할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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