• 한국약용작물학회지
• /
• 제15권6호
• /
• pp.444-450
• /
• 2007

Dried leaves from Cedrela sinensis A. Juss. (CS), have been observed to possess various pharmacological activity and contain various antioxidant constituents. The protective effect of ethanol extract of CS on hydrogen peroxide $(H_2O_2)-induced$ neurotoxicity was examined using primary cultured rat cortical neurons in the present study. Exposure of cultured neurons to 100 ${\mu}M\;H_2O_2$ caused a significant neuronal death as assessed by a 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide (MTT) assay and Hoechst 33342 staining. The addition of CS, over a concentration range of 10 to $50{\mu}g/m{\ell}$, concentration-dependently prevented the $H_2O_2-induced$ neuronal apoptotic death. CS $(50{\mu}g/m{\ell})$ significantly inhibited $H_2O_2-induced$ elevation of the cytosolic $Ca^{2+}$ concentration $([Ca^{2+}]_c)$, which was measured by a fluorescent dye, Fluo-4 AM. CS (30 and $50{\mu}g/m{\ell})$ inhibited glutamate release and generation of reactive oxygen species (ROS) induced by $100{\mu}M\;H_2O_2$. These results suggest that CS may mitigate the $H_2O_2-induced$ neurotoxiciy by interfering with the increase of $[Ca^{2+}]_c$, and then inhibiting glutamate release and generation of ROS in cultured neurons.

• 한국약용작물학회지
• /
• 제20권1호
• /
• pp.8-15
• /
• 2012

The present study investigated an ethanol extract of Chaenomeles sinensis fruit (CSF) for possible neuroprotective effects on neurotoxicity induced by amyloid ${\beta}$ protein ($A{\beta}$) (25-35) in cultured rat cortical neurons and also for antidementia activity in mice. Exposure of cultured cortical neurons to $10{\mu}M\;A{\beta}$ (25-35) for 36 h induced neuronal apoptotic death. At $0.1-10{\mu}g/m{\ell}$, CSF inhibited neuronal death, elevation of intracellular calcium concentration ($[Ca^{2+}]_i$), and generation of reactive oxygen species (ROS) induced by $A{\beta}$ (25-35) in primary cultures of rat cortical neurons. Memory loss induced by intracerebroventricular injection of mice with 15 nmol $A{\beta}$ (25-35) was inhibited by chronic treatment with CSF (10, 25 and 50 mg/kg, p.o. for 7 days) as measured by a passive avoidance test. CSF (50 mg/kg) inhibited the increase of cholinesterase activity in $A{\beta}$ (25-35)-injected mice brain. From these results, we suggest that the antidementia effect of CSF is due to its neuroprotective effect against $A{\beta}$ (25-35)-induced neurotoxicity and that CSF may have a therapeutic role for preventing the progression of Alzheimer's disease.

• 대한한방내과학회지
• /
• 제22권2호
• /
• pp.135-144
• /
• 2001

Objectives : The purpose of this investigation is to evaluate the effects of Woohwangcheongsim-won on neuronal death of hypoxic E18 cortical neuroblast. Methods : To evaluate the effect of Woohwangcheongsim-won on neuronal death caused by hypoxia, the survival rate of E18 cortical neuroblast was measured with MTT assay and the changes of several synaptic proteins and enzymes were investigated with the immunoblot assays. Results : The E18 cortical neuroblasts were added 50, 100, 500, 1,000, and $5,000{\mu}g/ml$ Woohwangcheongsim-won. They showed neurotoxicity, when the concentration of Woohwangcheongsim-won was above $1,000{\mu}g/ml$. The E18 cortical neuroblasts, which were added 50, 100, and $500{\mu}g/ml$ Woohwangcheongsim-won, were exposed 98% $N_2/5%\;CO_2$ for 3 hours to induce hypoxia, 3 days later, the survival rate of $50{\mu}g/ml$ Woohwangcheongsim-won was 141.5% when compared to the control group. On the immuneblot assays, the expressions of ${\alpha}$CaMKII, NR2A, NR28, PDE2, PSD-95, and eEF-$1{\alpha}$ were increased in normoxia, but those of NR2A, NR2B were decreased in hypoxia when compared to the control group. Conclusions : The data shows that the effects of Woohwangcheongsim-won on neuronal death of hypoxic E18 cortical neuroblast is a significant result.

• 대한한방내과학회지
• /
• 제24권2호
• /
• pp.348-357
• /
• 2003

Objectives : The purpose of this investigation is to evaluate the effects of Aucklandiae Radix Moschus(木香 麝香)and to study the mechanism for neuronal death protection in hypoxia with Embryonic day 20 (E20) cortical cells of a rat (Sprague Dawley). Methods : E20 cortical cells used in this investigation were dissociated in Neurobasal media and grown for 14 days in vitro (DIV). On 14 DIV, Aucklandiae Radix Moschus(木香 麝香) was added to the culture media for 72 hrs. On 17 DIV, cells were given a hypoxic shock and further incubated in normoxia for another three days. On 20 DIV, Moschus(麝香)'s effects for neuronal death protection were evaluated by LDH assay and the mechanisms were studied by Bcl-2, Bak, Bax, caspase family. Results : This study indicate that Aucklandiae Radix(木香)'s effects for neuronal death protection in normoxia and Scutellariae Radix(麝香)'s effects for neuronal death protection in hypoxia were confirmed by LDH assay in culture method of Embryonic day 20(E20) cortical neuroblast. Moschus(麝香)'s mechanism for neuronal death protection in hypoxia is to increase the anti-apoptosis protein Bcl-2. Conclusions : It may be reasonable to propose that Moschus(麝香) protects delayed neuronal death in hypoxia by increasing Bcl-2, thereby reducing mitochondrial permeability transition(PT) pores, the cytochrome c channels.

• Neonatal Medicine
• /
• 제18권1호
• /
• pp.59-69
• /
• 2011

목적: 6-cyano-7-nitroquinoxalin-2,3-dione (CNQX)는 저산소성허혈성뇌병증, 외상성뇌손상, 흥분독성과 같은 뇌 손상동물 모델에서 보호 효과가 있다고 발표되고 있지만 신생아기에 그 효과에 대해서는 아직 제한적이다. 저자들은 CNQX를 이용하여 저산소성허혈성뇌손상을 동반한 발달 과정에 있는 흰쥐 뇌에 산화질소합성효소 중재를 통한 뇌 보호 효과를 알아보고자 하였다. 방법: 생체내 실험으로 생후 7일된 신생 흰쥐의 좌측 총 경동맥을 결찰한 후 6개군(정상산소군, 수술없이 저산소군, sham수술 후 저산소군, 수술 후 저산소군, vehicle 투여 후 저산소군, CNQX 투여 후 저산소군)으로 나누었고, 저산소 손상은 특별히 제작한 통속에서 2시간 동안 8% $O_2$에 노출시켰다. CNQX은 뇌손상 전 30분에 체중 kg당 10 mg를 투여하였다. 생체외 실험으로 재태기간 18일된 태아 백서의 대뇌피질 세포를 배양하여 정상산소군은 5% $CO_2$ 배양기(95% air, 5% $CO_2$)에 두었고, 저산소군과 뇌손상 전 CNQX 투여군(10 ${\mu}g$/mL)은 1% $O_2$). 배양기(94% $N_2$, 5% $CO_2$)에서 16시간동안 뇌세포손상을 유도하였다. 생체내 외 실험 모두 산화질소합성효소와 관련된 iNOS, eNOS, nNOS 항체와 primer를 이용하여 western blotting과 실시간중합효소연쇄반응을 시행하였다. 결과: 산화질소합성효소와 관련된 생체외 내 실험에서 iNOS와 eNOS의 발현은 저산소군에서 정상산소군보다 감소하였으나 CNQX 투여군에서는 저산소군보다 증가하였다. nNOS의 발현은 반대로 표현되었다. 결론: 본 연구에서 CNQX는 산화질소합성효소 중재를 통하여 주산기 저산소성 허혈성 뇌손상에서 신경보호 역할을 하는 것을 알 수 있었다.

• Journal of Korean Neurosurgical Society
• /
• 제29권9호
• /
• pp.1161-1170
• /
• 2000

Objective : The transverse hippocampal slice is one of the most commonly studied in vitro models of mammalian brain physiology. However, despite its broad usage, there has been no standardization of slice preparation techniques or recording condition. It is well known that variations in recording conditions can result in profound different effects to neuronal responses. Evoked field potentials, recorded extracellularly, were used to investigate the effects of variations in hippocampal slice preparation protocol on hypoxia responses of CA1 neurones. Material & Methods : Before hypoxic injury, hippocampal slices were incubated for 4 hours. During incubation period, the slices were placed in a incubation chamber($21^{\circ}C$) for recovery from preparation injury and then transferred to recording chamber($34^{\circ}C$) for more recovery and baseline electric recording with current stimulation(0.1Hz). Various time periods in incubation chamber and recording chamber were applied to each experimental group(group 1=60min : 180min, group 2=90min : 150min, group 3=180min : 60min, time in incubation chamber : time in recording chamber) before 10 min hypoxia produced by replacing 95% $O_2$+5% $CO_2$ mixed gas to 95% $N_2$+5% $CO_2$ gas. Calcium, Magnesium ions and several drugs effecting on glutamate receptor also were studied. Recoveries from hypoxic injury of hippocampal slices were estimated by percent recovery of population spike(PS). Statistic analysis of study were performed using paired t-test. Results : The percent recovery of PS after 10min hypoxia was considerably enhanced by increasing the period of current stimulation during incubation period before hypoxic injury. Temperature effect on the result of this experiment was also studied(group 4) but the result from this showed no statistic significance. Low magnesium ion concentration of artificial CSF(Mg-free aCSF) during incubation period enhanced the recovery of PS but low calcium (calcium-free) and high magnesium ion concentration(2mM) reduced it after hypoxic injury. L-glutamate($100{\mu}M$) and AP-5($50{\mu}M$) had no effect on the recovery of PS but CNQX($10{\mu}M$) in artificial CSF during incubation period markedly enhanced the recovery of PS. Co-treatment of AP-5($50{\mu}M$), CNQX($10{\mu}M$) and high magnesium concentration(2mM) enhanced recovery of PS in immediate following period of hypoxic injury but the effect of cotreatment after then decayed rapidly and lost statistic significance. Conclusions : Judging from above results, the condition of baseline recording is important in observing the recovery of population spike after hypoxia, and the time and the condition should be controled more strictly to obtain reliable results.

• 한국초지조사료학회지
• /
• 제27권2호
• /
• pp.93-100
• /
• 2007

본 연구는 섬유질배합사료의 조단백질 수준이 임신초기 흑염소의 사료섭취량, 영양소 소화율 및 질소 축적율에 미치는 영향을 조사하여 임신흑염소의 적정 조단백질 수준을 구명하기 위하여 실시하였다. 공시축은 임신초기흑염소 12두를 4처리구(관행사료구, 조단백질 10, 12 및 15%)로 나누어 처리구당 3두씩 대사케이지에 완전임의 배치법으로 배치하여 시험을 실시하였으며 그 결과는 다음과 같다. 섬유질배합사료의 일반 조성분은 건물 함량이 $89.0{\sim}91.0%$를 나타내었고, ADF와 NDF 함량은 $18.87{\sim}19.85$ 및 $53.41{\sim}54.80%$로 나타나 조단백질 수준에 따른 섬유소 함량의 차이는 없었다. 조단백질 함량은 TMR10, TMR12 및 TMR14구가 각각 10.61, 12.15 및 14.97% 이었다. 하지만, NFC 함량은 섬유질배합사료내 단백질수준이 증가함에 따라 감소하였다. 건물섭취량, 영양소 섭취량 및 가소화 영양소 섭취량은 TMR15와 대조구가 TMR10과 TMR12구 보다 유의하게 높았으며(p<0.05), 대사체중당 건물섭취량과 체중에 대한 건물섭취비율에서도 대조구와 TMR15구가 유의하게 높았다(p<0.05). 건물소화율은 $69.01{\sim}70.33%$ 범위로 나타났다. 에테르 추출물 소화율은 세 수준의 단백질을 함유하는 섬유질배합사료군이 대조군 보다 유의하게 높았으나(p<0.05), 섬유질배합사료군간에는 유의한 차이가 나타나지 않았다. 질소축적량 및 축적율에서는 TMR15구와 대조구가 다른 처리구 보다 유의하게 높게 나타났다(p<0.05). 이상의 결과에서 임신초기 흑염소사료 내 증가하는 수준의 조단백질 함량은 건물섭취량 및 질소 축적을 증가시켰고, 특히 TMR 사양에서 임신초기 흑염소의 조단백질수준은 적어도 15% 이상은 되어야 할 것으로 추정된다.조생 다수성 IRG, 6월 상순으로 벼 이앙시기가 늦을 경우에는 5월 하순 수확이 가능하면서 생산성과 사료가치가 높은 밀이 권장되었다.함량으로 낮아졌다. 비보존성 반응(즉 침전, 흡착, 산화, 용해 등)과 보존성 반응(예: 수리학적 혼합)은 미량원소가 강으로 이동되는 것을 크게 감소시키는 효과적인 자연저감 기작이었다.가되는 추세를 보이고 있었으나 정상군에 비해 면역반응 신경세포의 총수는 43.9%(1형: $23.7%\downarrow$, 2형: $17.8%\downarrow$, 3형 : $56.2%\downarrow$) 감소한 상태로 남아있었다. 이상의 결과로 capsaicin 투여에 의해 성숙흰쥐의 근육층 신경얼기에서 칼슘채널 ${\alpha}_{1B}$ subunit의 면역활성도는 투여 후 1주일가지 빠르게 저하되며 그 이후부터는 점차 정상으로 회복되나 완전한 상태로의 회복에는 4주 이상의 시간경과가 필요함을 알 수 있었다.形態學的) 배양학적(培養學的) 특성(特性)을 조사(調査)한 결과(結果) Candida guilliermondii var. guilliermondii 로 동정(同定)되었다. 6. CHS-13 균주(菌株)를 당화액(糖化液)에 배양(培養)시켰을 때 Lowry-protein 함량은 $0.72\;mg/m{\ell}$ 이었으며 , yeast extract 첨가(添加)하여 배양시(培養時)는 yeast extract 농도(濃度)가 증가(增加)함에 따라 단백질(蛋白質) 함량(含量)도 증가(增加)하였다. 7. CHS-13 균주(菌株)의 RNA 함량(含量)은 $4.92{\times}10^{-2 }\;mg/m{\ell}$이었으며 yeast extract 농도(濃度)가 증가(增加)함에 따라 증가(增加)하다가 농도(濃度) 0.2%에서 최대함량(最大含量)을 나타내고 그후는 감소(減少)

• Clinical and Experimental Pediatrics
• /
• 제48권10호
• /
• pp.1132-1138
• /
• 2005

목 적 : 뮤코 다당체 침착증은 glycosaminoglycan을 분해하는 라이소솜 효소의 유전적 결핍에 의해 라이소솜에 전구 물질이 축적되는 질환군이다. 임상 양상은 매우 다양하지만, 일반적으로 만성적이고 진행되는 경과를 보이며 투박한 얼굴 모양, 관절의 경직, 간비 비대, 성장 지연, 신경학적 퇴화를 특징으로 한다. 최근 뮤코 다당체 침착증 I형의 효소 대체 요법이 가능하며 곧 II형에서도 실용화될 전망이다. 임상 증상이 나타나기 전에 효소 치료를 시작함으로써, 뮤코 다당체 침착증 환자에서 보이는 신경학적 및 근골격계 퇴행의 예방이 가능할 것으로 기대하고 있으며, 이에 조기 진단이 더욱 강조되고 있는 상황이다. 저자들은 본원 뮤코 다당체 침착증 환아 모임에 가입된 환아 80명을 대상으로 임상 양상을 분석하여, 국내 뮤코 다당체 환아들의 임상양상을 연구하고자 하였다. 방 법 : 1995년 2월부터 2004년 12월까지 삼성서울병원 소아과를 방문한 환아 중, 피부 섬유아세포 배양 효소 검사에 의해 뮤코 다당체 침착증이 확진된 환아 80명을 대상으로 하였다. 입원기록 및 외래기록을 검토하여 진단시 연령과 성별, 가족력, 이학적 특징, 방사선 검사, 이비인후과 검사, 안과 검사, 지능검사, 언어 평가에 대한 결과를 분석하였다. 결 론 : 유형별로 II형이 51명(64%), III형이 14명(17.5%), I형이 12명(15%), IV형이 3명(3.8%)으로 II형의 빈도가 월등히 높았다. 진단시 연령은 1세부터 20까지 있었으며, 평균 5.5세였다. 남녀비는 4.7:1이였고, II형 헌터 증후군 51명은 모두 남아였다. 부모가 환아에서 이상을 느낀 첫 징후는 발달 지연이 12례(17%)로 가장 많았고, 그 외에 언어 발달지연(17%), 외모의 이상(16%), 관절 경직(14%) 등이 있었다. 방사선 검사상 전형적인 골격계 변화가 45례(83%)에서 관찰되었다. 55례에서 심장 초음파 검사를 시행했는데 판막의 비후와 경한 역류 소견이 많았고 특히 승모판막의 비후와 역류가 각각 46례(82%), 31례(55%)로 가장 빈번하였다. 이비인후과 평가를 받은 63례 중 46례(73%)에서 중이저류가 관찰되었고, 28례의 환아는 환기관 삽입을 시행 받았다. 33례(82%)에서 중등도 이상의 청력소실이 있었고, 특히 II형 환아들의 ABR 역치 평균이 66.9로 가장 높았다. 지능검사가 가능했던 35례의 환아 중에서 중등도 이상의 정신 지체가 14례(56%)였다. II형 51례의 환아 중에서 4명이 HLA 일치되는 형제로부터 골수이식을 받았다. 그 중 1명은 이식편대 숙주 반응 합병증으로 사망하였고, 나머지 3명에서도 신경학적 퇴행을 예방하지 못하였다. 현재 5명의 I형 환아들에서 효소 대체 치료를 시작하였고 이들의 임상 경과를 주목하고 있다. 결 론 : 본 연구에서는 80명의 뮤코 다당체 침착증 환자를 대상으로 임상 양상을 분석하였고 유형별로는 II형 헌터 증후군의 빈도가 64%로 외국 연구에 비해 월등히 높았으며 이는 인구학적 차이를 반영한다고 사료된다. 발달 지연, 저신장, 근골격계 변화, 심장판막 변화, 정신 지체, 청력 소실 등 뮤코 다당체 침착증의 전형적인 증상들이 환아의 대부분에서 관찰되었다. 저자들은 국내 뮤코 다당체 침착증 환아들의 임상적 양상을 연구함으로써 조기 진단과 적절한 치료를 하는데 도움이 되고자 하였다.

• 동의생리병리학회지
• /
• 제16권1호
• /
• pp.150-153
• /
• 2002

To elucidate the toxic effect of oxygen free radicals on cultured mouse spinal motor neurons damaged by hydrogen peroxide(H₂O₂)-induced neurotoxicity, we examined the neurotoxicity induced by oxygen radicals by NR assay when cultured spinal motor neurons were grown in the medium containing various concentrations of H₂O₂ for 6 hours. In addition, neuroprotective effects of herb extracts such Rhizoma Gastrodiae(RG), on H₂O₂-induced neurotoxicity in cultured spinal motor neurons were evaluated after cultured spinal motor neurons were preincubated with various concentrations of herb extract, RG for 2 hours before 50uM H₂O₂ for 6 hours. H₂O₂ decreased remarkably cell viability in dose-and time-dependent manner in these cultures, and also herb extract, RG increased cell viability of spinal motor neurons damaged by H₂O₂ in these cultures. From the above results, it is suggested that H₂O₂ was toxic in cultured spinal motor neurons derived from mouse, and RG was effective in blocking the neurotoxicity induced by oxidative stress in these cultures.

• Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
• /
• 제30권1호
• /
• pp.1-16
• /
• 2004

The use of artificial nerve conduit containing viable Schwann cells is one of the most promising strategies to repair the peripheral nerve injury. To fabricate an effective nerve conduit whose microstructure and internal environment are more favorable in the nerve regeneration than existing ones, a new three-dimensional Schwann cell culture technique using $Matrigel^{(R)}$. and dorsal root ganglion (DRG) was developed. Nerve conduit of three-dimensionally arranged Schwann cells was fabricated using direct seeding of freshly harvested DRG into a $Matrigel^{(R)}$ filled silicone tube (I.D. 1.98 mm, 14 mm length) and in vitro rafting culture for 2 weeks. The nerve regeneration efficacy of three-dimensionally cultured Schwann cell conduit (3D conduit group, n=6) was assessed using SD rat sciatic nerve defect of 10 mm, and compared with that of silicone conduit filled with $Matrigel^{(R)}$ and Schwann cells prepared from the conventional plain culture method (2D conduit group, n=6). After 12 weeks, sciatic function was evaluated with sciatic function index (SFI) and gait analysis, and histomorphology of nerve conduit and the innervated tissues of sciatic nerve were examined using image analyzer and electromicroscopic methods. The SFI and ankle stance angle (ASA) in the functional evaluation were $-60.1{\pm}13.9$, $37.9^{\circ}{\pm}5.4^{\circ}$ in 3D conduit group (n=5) and $-87.0{\pm}12.9$, $32.2^{\circ}{\pm}4.8^{\circ}$ in 2D conduit group (n=4), respectively. And the myelinated axon was $44.91%{\pm}0.13%$ in 3D conduit group and $13.05%{\pm}1.95%$ in 2D conduit group to the sham group. In the TEM study, 3D conduit group showed more abundant myelinated nerve fibers with well organized and thickened extracellular collagen than 2D conduit group, and gastrocnemius muscle and biceps femoris tendon in 3D conduit group were less atrophied and showed decreased fibrosis with less fatty infiltration than 2D conduit group. In conclusion, new three-dimensional Schwann cell culture technique was established, and nerve conduit fabricated using this technique showed much improved nerve regeneration capacity than the silicone tube filled with $Matrigel^{(R)}$ and Schwann cells prepared from the conventional plain culture method.