본 연구의 목적은 누에형질전환 기술을 이용하여 적색형광실크를 개발하는 것으로서, 본 실험에서는 피브로인 H-chain의 N-말단과 C-말단을 이용하여 피브로인 재조합 단백질 발현 시스템을 제작하였고, 종결 코돈이 없는 DsRed2 유전자를 위의 발현 시스템에 클로닝하여 적색형광실크를 제작하였다. 누에형질전환체 선발을 위해서는 3xP3 promoter와 EGFP 유전자를 이용하여 선발하였고, 1020개의 누에알에 microinjection 하여 F1 세대에서 6 broods의 형질전환체를 선발하였다. 선발된 누에형질전환체는 초기배 단계의 눈과 신경조직, 유충과 번데기 그리고 성충의 눈에서 EGFP 형광단백질이 발현되는 것을 확인 할 수 있었다. 또한 실크의 피브로인에서 DsRed2 단백질이 발현되는 것을 확인하기 위해, F2세대의 누에형질전환체 중에서 5령 5일 유충을 해부하여 견사선을 형광현미경으로 관찰하였고, 중부와 후부 견사선에서 적색형광단백질이 발현되는 것을 확인 할 수 있었고, F2 세대의 고치에서도 적색형광단백질의 발현을 확인할 수 있었다. 이상의 결과에서 적색형광실크를 생산하는 누에형질전환체가 성공적으로 제작되었음을 확인할 수 있었고 이러한 결과를 토대로 새로운 산업소재로서 실크를 활용할 수 있을 것으로 기대한다.
본 연구에서는 인체에 유해한 용매를 사용하지 않고 누에 실샘으로부터 가수분해물을 제조하는 새로운 공정을 개발하였다. 제조된 누에 실샘 가수분해물의 특성 분석을 통해 누에고치 유래 세리신 가수분해물(CSH)과 구성 성분 및 물성이 상이함을 확인하였다. 또한 1 mg/ml 수용성 누에 실샘 가수분해물(SSGH)을 첨가한 경우 10% FBS를 첨가한 대조군과 동등한 세포 증식효과가 있음을 증명하였다. 결론적으로 누에 실샘 가수분해물은 혈청을 대체할 수 있는 우수한 소재임을 확인하였다. 본 연구에서 개발한 제조방법을 통해 생산된 누에 실샘 가수분해물은 향후 화장품 및 의료용 소재로 그 응용범위를 확대할 수 있을 것으로 사료된다.
본 연구는 누에 중장으로부터 면역 관련 유전자를 대량 발굴하고 발현 특성을 분석함으로서 곤충 유래 신기능성 의약품 개발을 위한 유전자 소재를 발굴하고자 하였다. 우선 곤충병원성 섭식에 의한 누에 품종에 따른 중장 면역원으로서 적성 병원성 세균인 X. nematophila 등을 선발하고 누에 천연 면역인자의 발굴을 위해 최적 감염 조건을 설정하였다. 감염된 누에 중장 mRNA를 순수 분리하여 subtraction cDNA 유전자은행 1종씩 제작하고, subtractive differential display hybridization 방법에 의해 누에 중장 면역관련 유전인자를 선발하였다. 선발된 유전자의 정보 분석 결과, 세포 내 다양한 생물학적 기능을 수행하는 것으로 알려진 ribosomal protein L5 mRNA 등 면역 관련 유전자 9종을 선발하였다. 본 연구에서 선발된 누에 천연 면역 관련 인자는 신기능성 의약품 소재로 개발하기 위해서는 기능분석 연구가 지속되어야 할 것으로 사료된다.
혈당 조절에 도움을 줄 수 있는 건강기능식품 기능성 원료로 인증을 받은 동결건조 누에분말의 일반 성분 및 영양 성분에 대하여 보고된 바를 고찰하여 다음과 같은 결론을 얻을 수 있었다. 1. 동결건조 누에분말의 일반 성분은 조단백질 57.7%, 조지방 9.5%, 조섬유 5.4%, 회분 9.3%, 수분 4.7% 내외였다. 식육성 재료나 식용 곤충에 비하여 단백질 성분이 높고 지방 성분은 낮았다. 2. 동결건조 누에분말을 이루고 있는 주요 아미노산은 glutamic acid와 aspartic acid로 아미노산의 조성은 누에의 성장 단계에 따른 차이가 있었다. 3. 동결건조 누에분말은 포화지방산과 불포화지방산이 약 3:7의 비율로 있으며, linolenic acid 34.7%, oleic acid 24.4%, palmitic acid 20.2%, stearic acid 9.2%, linoleic acid 7.7%가 많이 포함되어 있다. 4. 동결건조 누에분말에 많이 포함되어 있는 5대 무기물은 칼륨, 인, 칼슘, 마그네숨, 황 등이 있으며, 그 외에도 구리, 망간, 아연, 철 등의 무기물을 가지고 있다.
카드미움을 누에에 투여하여 발육경과에 따른 암수간의 누에 혈액단백질의 변화 및 GOT, GPT활성을 조사하였다. 얻어진 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 카드미움처리구는 무처리구에 비해 총혈액단백질 함량이 낮았다. 한편 카드미움처리에 의한 암수간의 총단백질함량의 변화에 있어서는 숫컷이 더 큰 영향을 받고 있어Te. 2. 발율경과에 따른 Albumin함량은 암컷에 있어서는 카드미움의 영향이 적은데 반해 수컷에 있어서는 무처리에 비해 약 7% 감소하였다. 그러나. Globulin은 암컷 숫컷 모드 카드미움의 영향이 컸다. 3. GPT 및 GOT의 활성은 카드미움에 의해 다같이 저해되었다.
누에유래 불포화지방산의 분리법을 확립하여 특허출원 하였다(출원번호 :2004-76364호). 분리 정제된 누에유래 불포화지방산의 비율은 70% 이상이었다. 누에유래 불포화지방산의 기능성을 시험해본 결과, 고지혈증 개선의 효과를 보였고, 피부단백질인 콜라겐 생성을 유의적으로 증가시키며, 콜라겐 분해효소 활성을 유의적으로 억제하였다. 또한, 피부건조증 개선에 빠르고 탁월한 효과가 있었다.
해충의 방제에 효과적으로 이요할 수 있는 Bactllus thuringiensis 균주를 분리하기 위하여 전국의 다양한 토양을 채취하여 B. thuringiensis의 분포와 독성을 조사하였다. 총 548개의 토양을 전국 각지에 채취하여 포자와 내독소 단백질을 생산하는 64개의 B. thuringiensis를 분리했다. 분리된 64개의 B. thuringiensis를 나비목의 누에(Bombyx mori), 파리목의 빨간집모기(Culex pipens), 딱정벌레목의 쌀바구미(Sitophilus oryzae)의 세 종에 대해서 독성을 검정한 결과, 누에에 독성을 띠는 균주가 42.2%로 가장 많았으며, 누에와 빨간집모기에 동시에 독성을 띠는 균주가 31.3%, 빨간집모기에 독성을 띠는 균주는 20.3%의 비율로 분리되어 다양한 독성 분포를 보였다. 그러나 쌀바구미에 독성을 띠는 균주는 분리되지 않았고, 내독소 단백질은 형성하지만 독성이 없는 무독성 B. thuringiensis가 62%의 비율로 분리되었다.
최근 상문의 생산성을 향상시키기 위하여 우리나라 양잠농가의 실정을 감안할 정도의 다비재배를 할 경우 다비상엽에 대한 누에의 사료가치를 구명하고자 약 1년간 (1969.3월-1969.12월)를 연구기간으로 하여 사육시험에 의하여 얻어진 결과를 실험통계적인 면에서, 다비상엽의 성분분석에 의하여 얻어진 결과를 누에의 영양요구면에서 고찰하였다. 고찰결과 N 44.4kg, P$_2$O$_{5}$ 18.4kg, $K_2$O 34.4kg(년간 10a 당)까지 시여한 다비상엽이라도 누에의 충질과 견질에 영향이 없는 동시에 누에의 사료가치가 인정되었다.
Baculovirus 발현계에서 BmNPV의 증식효율을 향상시키기 위하여, 누에 유충 체액의 BmN-4 세포주에서 BmNPV 증식에 미치는 영향을 조사하였다. 5령 3일째의 누에 유충으로 부터 체액을 추출하여 BmN-4 배양액에 첨가한 결과, 열처리하지 않은 누에 체액의 첨가는 세포의 응집과 소형화 현상으로 인해 세포의 증식을 저해한 반면, $65^{\circ}C$에서 30분간 열처리한 체액 10%와 FBS 3%를 세포배양액에 첨가한 것이 바이러스 감염에 의해 방출된 다각체의 수가 가장 많은 것으로 나타나 바이러스 증식에 가장 효과적이었다. 또한 plaque assay 결과, 체액의 첨가에 의한 바이러스 증식효율의 증가는 세포의 증식에 의한 것이라기보다 바이러스 감염성의 증가에 기인하는 것으로 보여진다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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