Immunological method has been applied in biochemical genetic analysis of seed storage proteins. We developed and characterized anti-gliadin polyclonal antibody (AGPab) specific to gliadin fractions whose quality and quantity were known to be associated with wheat end-use quality. Reactions of anti-gliadin polyclonal antibody (AGPab) to gliadin were linearly decreased as AGPab and antigen were diluted. Dot-blot and immunoblot assay showed that produced AGPab specifically reacted to gliadin and mainly $\alpha$-, $\beta$-, and ${\gamma}$-gliadin subunits. Enzyme-linked immuno- sorbent assay (ELISA) was applied for quantifi-cation of gliadins in Korean wheat cultivars and breeding lines by using AGPab. High reactions between AGPab and gliadins were found in wheat cultivars Olmil and Olgeurumil. Significant difference of optical densities for alcohol soluble proteins among crop species was found, as wheat showed the highest value (0.697) followed by rye (0.295), and barley (0.066).
Lee, Yun Gyeong;Choi, Sang Chul;Kang, Yuna;Kang, Chon-Sik;Kim, Changsoo
Plant Breeding and Biotechnology
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제6권4호
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pp.413-425
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2018
A previous work developed and identified a new omega-5 gliadin deficient wheat line named O-free by crossing Keumkang and Olgeuru, which is nutritionally quite meaningful in that omega-5 gliadin is one of the known wheat allergens. To verify the characteristics of the O-free, we performed RNA sequencing (RNAseq) analysis of the O-free and the two parent lines (Keumkang and Olgeuru). The results of the similarity analysis with the ESTs for gliadins and glutenins showed that the O-free ESTs had no similarity with the omega-5 gliadin sequences but had similarity to other gliadins and glutenins. Furthermore, mapping results between the raw RNAseq data from the O-free and the omega-5 gliadin sequence showed a clear deletion of the N-terminal sequences which are an important signature of omega-5 gliadin. We also designed specific PCR primers that could identify omega-5 gliadin in the genomic DNA. The results showed that no omega-5 gliadin fragments were detected in the O-free. According to these results, we confirmed that the deficiency of omega-5 gliadin in the O-free is not caused by post-transcriptional or post-translational regulations such as epigenetic phenomena but by a simple deletion in the chromosome. Furthermore, we showed that the low-molecular weight glutenin subunit (LMW-GS) gene in the O-free had a single nucleotide polymorphism (SNP) causing a premature stop codon, resulting in a truncated polypeptide. We expect that the O-free line may serve as an excellent source of wheat that could prevail in the hypo-allergen wheat market, which has recently gained interest world-wide.
Present work was focused on the influence of methylcellulose (MC) on steady rheology of wheat gliadin solution and the properties of glycerol plasticized gliadin films. The presence of MC below 0.99 wt% improved viscosity and flow activation energy of the 10 wt% gliadin solution significantly. In the casting films containing 0.2 g glycerol/g dry protein, the MC component aggregated in the gliadin matrix. The blend films containing less than 7.7 wt% MC exhibited higher Young's modulus (E) and tensile strength (${\sigma}_b$) and lower elongation at break (${\epsilon}_b$) in comparison with the pure gliadin film, which was related to the intermolecular interaction between MC and gliadins, the brittle fracture of the aggregated MC component, and the increase in glass transition temperature ($T_g$) of the gliadin phase. Increasing MC content led to a slight increase in water vapor permeability (WVP) without significant influence on the moisture absorption (MA).
한국산 밀 품종들 중에서 장광의 것을 선정하여 단백질을 추출한 다음 이 단백질의 아미노산 조성과 gliadin 단백질의 정제로 주 gliadin 단백질을 분리하여 본 결과 1. Gliadin과 glutenin 단백질은 다같이 disc 전기이동상에 5개의 band를 나타내었다. 2. Gliadin과 glutenin 단백질은 다같이 glutamic acid의 함량이 가장 많았다. 3. Gliadin과 glutenin 단백질간에 아미노산 조성의 차이는 gliadin이 glutenin보다 alanine의 함량은 적었으나 proline의 함량은 많았다. 4. 주 gliadin 단백질은 gliadin 단백질을 Sephadex G-150과 A-25 coumn으로 정제하여 얻었다.
본 연구에서는 가압가열 및 microwave 처리에 의한 중력분 반죽 추출물 내의 gliadin 단백질의 항원성 변화에 대해 살펴보았다. 중력분 반죽에 가압가열과 microwave를 단독 또는 병행으로 처리하여 ci-ELISA, SDS-PAGE 및 immunoblotting을 실시하였으며, 가압가열 처리에 의해서 anti-gliadin IgG 항체와 gliadin과의 결합력이 다소 감소한 것을 확인하였다. 특히 30 min 이상 처리시 더욱 감소한 것으로 나타났으며, SDS-PAGE와 immunoblotting 결과에서도 gliadin band의 강도가 약해지고 항체와의 반응도 나타나지 않았다. Microwave 처리의 경우, 5 min 이상 처리시 일부gliadin 단백질의 소실이 관찰되었으나, 항원성에는 큰 변화가 없었다. 또한 가압가열 및 microwave 병행 처리에 의해 항원-항체 결합력이 더욱 감소되었으며, 특히 가압가열 50 min, microwave 10 min 처리시 약 35.0%로 감소되었다. 이상의 결과를 통해 가압 가열 처리에 의해 중력분 반죽 추출물 내 gliadin의 항원성이 감소되는 것을 확인하였으며, microwave와 병행 처리하는 경우, 더욱 감소하는 것을 확인하였다.
본 연구에서는 가압가열 및 microwave 처리가 gliadin의 항원성에 미치는 영향을 살펴보기 위해 강력분에 가압가열과 microwave를 단독 또는 병행으로 처리하여 Ci-ELISA, SDS-PAGE 및 immunoblotting을 실시하였다. 가압가열 처리의 경우 시간이 길어질수록 IgG와의 결합력이 감소하였으며, 특히 50분 처리구에서 약 87%로 가장 낮은 결합력을 보였다. 또한 SDS-PAGE와 immunoblotting 결과에서도 무처리구에서 강하게 보였던 gliadin band가 가압가열 처리에 의해 거의 소실되고 항체와 반응하지 않았다. 가압가열 및 microwave를 병행 처리 시도 마찬가지로 gliadin의 결합력이 감소하였으며, 처리구 중 가압가열 50분, microwave 5분 처리구에서 약 93%로 가장 낮은 결합력을 보였다. 반면 microwave를 단독으로 처리한 경우에는 일부 단백질의 변화는 관찰되었으나, 항원성 감소에는 효과가 없음을 확인하여 단백질 변화가 항원성에는 큰 효과를 준 것 같지 않다. 이상의 결과를 통해 가압가열 단독 처리 및 가압가열 및 microwave의 병행처리 시 gliadin의 항원성이 감소함을 확인하였다.
장광품종의 밀 gliadin 단백질을 정제하여 주 gliadin 단백질을 얻은 다음 이의 아미노산조성과 분자량 그리고 N-말단 및 C-말단 아미노산을 조사하여 본 결과 1. 주 gliadin 단백질의 아미노산 조성은 glutamic acid의 함량이 가장 많았다. 2. 주 gliadin 단백질의 분자량은 60,200 ${\pm}$200이었다. 3. 주 gliadin 단백질의 N-말단 아미노산은 phenylalanine이었고, C-말단 아미노산은 methionine이었다.
Seo, Yong-Weon;Park, Yong-Hack;Hong, Byung-Hee;Park, Moon-Woong;Nam, Jung-Hyun
한국작물학회지
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제45권1호
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pp.38-43
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2000
The environment in which a given genotype is grown may influence its grain quality characteristics. When varieties are $\times$ evaluated over numerous environments, a variety environment interaction usually is observed, but the relative magnitude of environmental(E), genetic(G), and G $\times$ E effects on quality is unclear. In order to determine relative contribution of genotype, environment, and G $\times$ E interaction to the variations observed in grain quality characteristics, 18 Korean wheat cultivars and experimental lines were evaluated in two environments in 1998 and 1999. Correlation coefficients between grain quality and agronomic characteristics were also estimated. The analysis of variance for the optical density obtained by reaction bet- ween gliadin and anti-gliadin polyclonal antibody (AGPab) indicated that gliadin content measured by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA) was significantly in- fluenced by environment and cultivar differences. The significant differences of year and year $\times$ location were also found. The ratio of the variances associated with environmental effects to the variances associated with genetic effect gave relatively greater influence of environmental factor on gliadin content. The different protein content from same genotype grown in different environment might be associated with degree of storage protein accumulations. Significant relationships between ELISA and protein content, yield, ten spike weight, and ten spike number were detected. Polyphenol oxidase (PPO) activity was significantly influenced by year, location, cultivar and year $\times$ location. The variance in grain PPO activities among growing years appeared larger than the variation produced by the cultivar examined. This suggested that the growing environment contributed more to variability in grain PPO concentration.
한국작물학회 2017년도 9th Asian Crop Science Association conference
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pp.259-259
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2017
Wheat is one of important food crop in the world. However, wheat has some negative things that are allergen. Wheat includes four different allergen kwon as alpha-, beta- and gamma gliadin and amylase inhibitor. Recently, people are interesting to gluten free food or low gliadin food. To study about wheat allergies and research trend is important for future research like as wheat breeding and allergy reduction technology. In this study, we analyzed that the reported on the research field of wheat allergy have been reported until now, and was to provide direction for future research. The analysis of 235 episodes of major papers published from 2007 to 2016. The last 5 years from 2012, wheat allergy appears increasing number of related papers. The ratio of national papers 13% and 60% were published by the United States and other European countries, respectively. The fields of wheat allergen-related preclinical technology and wheat allergen related to genome research for discovery technology were represented high rate by 58% and 26%, respectively. In the case of Korea, significantly account genetic and breeding areas. Recently, however, the research of glutenin protein which is closely linked to wheat allergy is in progress. So, we expected to increase wheat allergy of the research is in the future in Korea.
본 연구에서는 가압가열 및 microwave 처리가 gliadin의 항원성에 미치는 영향을 살펴보기 위해 중력분에 가압가열과 microwave를 단독 또는 병행으로 처리하여 Ci-ELISA, SDS-PAGE 및 immunoblotting을 실시하였다. 가압가열 처리의 경우, 처리 시간이 길어질수록 IgG와의 결합력이 감소하였으며, 특히 50분 처리구에서 약 69%로 가장 낮은 결합력을 보였다. 또한 SDS-PAGE와 immunoblotting 결과에서도 무처리구에서 강하게 보였던 gliadin band가 처리에 의해 거의 소실되고 항체와 반응하지 않았다. 가압가열 및 microwave를 병행 처리한 경우도 마찬가지로 gliadin의 결합력이 다소 감소하였으며, 처리구 중에서는 가압가열 50분, microwave 5분 처리구에서 약 73%로 가장 낮은 결합력을 보였다. 반면 microwave를 단독으로 처리하였을 때에는 일부 단백질의 변화는 관찰되었으나 항원성 감소에는 큰 영향을 미치지 않았다. 이상의 결과를 통해 가압가열을 단독 처리에 의해 gliadin의 항원성이 다소 감소되었으며, microwave 병행처리에 의한 차이는 크게 나타나지 않은 것을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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