코직산(Kojic acid)은 생리활성물질로서 많이 알려져 있으며 antibacterial, antifungal과 같은 효능을 나타낸다. 또한 티로시나아제(tyrosinase) 억제제로서 작용하여 멜라닌 생성을 저해시키기 때문에 화장품 산업에 있어서도 미백효과를 가지는 중요한 소재로서 각광받고 있다. 본 연구에서는 독립적으로 항산화 효과를 나타내는 유도체와 코직산(Kojic acid)을 연결하여 새로운 기능성을 가지는 신규 화합물을 발굴하고자 하였으며, 클릭 반응(Click reaction)을 통해 트리아졸(triazle)로 연결하여 신규 코직산 컨쥬게이트(conjugated) 화합물을 합성하였다. 먼저 신규 코직산 컨쥬게이트(conjugated) 화합물의 티로시나아제(tyrosinase) 억제 효과에 대해서 연구한 결과 대부분의 화합물이 코직산(Kojic acid)보다 우수한 티로시나아제(tyrosinase) 억제 효과를 나타냈다. 이와 같은 결과로 미루어 보아 신규 코직산 컨쥬게이트(conjugated) 화합물은 항산화용 건강보조식품 조성물 및 항산화 소재, 노화방지 및 미백 기능을 가진 피부외용제 조성물의 유효성분으로 개발될 가능성이 매우 높다고 사료된다.
본 연구는 그라비올라 잎 조다당 분획물(ALP)의 멜라닌 저해활성에 관하여 알아보기 위하여 B16F10 melanoma 세포의 세포 생존율, tyrosinase 저해활성, 멜라닌 함량, 멜라닌 생합성에 관여하는 단백질(TRP-1, TRP-2, tyrosinase, MITF 및 p-CREB)의 발현을 관찰하였다. ALP의 tyrosinase 활성 저해능을 측정하였을 때, 농도 의존적으로 감소하는 것을 알 수 있었다. 또한 B16F10 세포에 ALP를 처리하여 멜라닌 활성 저해능에 관하여 알아봤을 때, tyrosinase, 멜라닌 함량이 농도 의존적으로 줄어드는 것을 확인하였다. 또한 ALP가 미백과 관련된 TRP-1, TRP-2, tyrosinase, MITF 및 p-CREB의 단백질 발현양이 농도의존적으로 감소되는 것으로 관찰되었다. 따라서 ALP는 멜라닌 저해 활성을 효과적으로 나타낸 것으로 보아 기능성 미백 화장품 소재로서의 활용 가능성을 확인할 수 있었다.
To further access honeybee (Apis mellifera L.) venom (BV) as a cosmetic ingredient and potential external treatment for topical use, we investigated its ability to inhibit tyrosinase activity and melanin biosynthesis on melanogenesis in B16F1 melanoma cells. We found that BV increased the cell viability in B16F1 melanoma cell and BV (0.01~1 ${\mu}g/ml$) inhibited melanin synthesis in with 10 nM ${\alpha}$-melanocyte-stimulating hormone (${\alpha}$-MSH) for 48 h. In addition, we used reverse transcription-polymerase chain reaction and western blotting for me melanogenesis-related genes such as tyrosinase to examine the mechanisms underlying the inhibitory effects of BV on melanogensis. BV inhibited direct tyrosinase activity, which decreased melanin synthesis in ${\alpha}$-MSH stimulated B16F1 melanoma cells. Thease findings suggest that BV induces the downregulation of melanogenesis by inhibiting tyrosinase activation.
본 연구의 목적은 애플망고 껍질의 열수 및 70% 에탄올 추출물의 미백 효과를 검증하고자 하였다. 애플망고 껍질의 열수 및 에탄올 추출물의 미백 효과를 측정하기 위해 tyrosinase 저해 활성을 측정한 결과, 최종 농도인 1,000 ㎍/ml에서 열수 추출물은 9%, 에탄올 추출물은 35%의 저해 효과를 보였다. 세포를 통해 미백효과를 측정하고자 멜라노마세포인 B16-F10을 이용해 세포 생존율을 MTT assay를 사용하여 측정하였다. 세포 생존율 측정 결과, 100 ㎍/ml 농도에서 각각 95.64%, 103.36%의 세포 생존율을 나타내었다. 이후 실험은 세포 생존율이 95% 이상 나타난 농도인 100 ㎍/ml 이하의 농도에서 실험을 수행하였다. 미백 효과는 멜라닌 합성에 관여하는 인자의 단백질 및 mRNA 발현을 측정하여 결정하였다. 단백질 발현은 western blot을 이용하여 측정하였으며, 그 결과 MITF, tyrosinase, TRP-1 및 TRP-2에 대한 단백질 발현은 100 ㎍/ml 농도에서 열수 추출물에 의해 59%, 65%, 26%, 18% 감소하였고, 에탄올 추출물에 의해 64%, 40%, 18%, 52% 감소하였다. MITF, Tyrosinase, TRP-1 및 TRP-2의 mRNA 발현은 RT-PCR을 통해 확인하였으며, 그 결과 100 ㎍/ml에서 열수 추출물에 의해 27%, 44%, 40%, 22% 감소하였고, 에탄올 추출물에 의해 9%, 51%, 11%, 52% 감소하였다. 따라서 애플망고 껍질 추출물이 미백 효과가 있음을 확인하였고, 천연물 소재로서의 이용가치가 높을 것으로 사료되어진다.
Purpose: This study was performed to determine the inhibitory effect of Sihosogansangagambang (SS) on melanin synthesis in B16F10 melanoma cells (B16F10). Methods: The inhibitory effects of Sihosogansangagambang on melanin synthesis were used by in vitro assay. To elucidate inhibitory effects of SS on melanin synthesis, we determined the melanin release in B16F10. And to investigate the mechanism of inhibitory effect of SS, we assessed the gene expression of tyrosinase, TRP-1, TRP-2 and ERK-1 in B16F10. Results: 1. SS decreased the release of melanin in B16F10 melanoma cells. 2. SS inhibited mushroom tyrosinase activity in vitro. 3. SS decreased the expression of tyrosinase, TRP-2 in B16F10 melanoma cells, but did not decreased the expression of TRP-1 in B16F10 melanoma cells. 4. SS decreased the expression of ERK-1 in B16F10 melanoma cells. Conclusion: From these results, it may be suggested that SS is possesed of the antimelanogenetic effects.
본 연구에서는 정공피 물 추출물의 미백 효과를 확인하기 위하여 항산화 효능을 검증하였고, 멜라닌 생성의 첫 단계인 tyrosinase 활성, mouse melanoma B16BL6 세포 생존율 및 TRP-1, TRP-2 mRNA 발현 정도를 측정하였다. 정공피 물추출물은 DPPH 및 hydroxy 라디칼 소거 작용을 통하여 높은 항산화 효능을 나타내었고, tyrosinase, TRP-1, TRP-2의 활성을 효과적으로 억제하는 것을 확인하였다. 이는 정공피 물 추출물이 직접적으로 B16BL6 melanoma 세포의 tyrosinase 단백질의 활성을 저해시킴으로써 멜라닌 생성을 억제하는데 효과적임을 의미한다. 결론적으로 정공피 추출물은 항산화 활성과 미백 효과가 우수하여 기능성 화장품의 천연 소재로서 활용 가능성이 매우 높은 것으로 판단된다.
오미자 추출물에 감마선을 조사하여 tyrosinase 저해, xanthine oxidase 저해 및 아질산염 소거능에 대하여 검토하였다. 오미자 추출물은 열수, ethanol, methanol 그리고 acetone등을 이용하여 추출하였으며, 감마선은 10, 20과 30 kGy로 조사하였다. 오미자 추출물은 모두 tyrosinase 저해 효과를 가지고 있는 것으로 나타났다. 감마선 조사 후 오미자 추출물에 대한 tyrosinase는 열수 추출물보다 용매 추출물이 저해 효과가 높게 나타내었다. Xanthine oxidase 저해 효과실험 결과, 오미자 추출물은 열수 및 용매 추출물 모두 저해력을 나타내었으며, 감마선 조사는 xanthine oxidase 저해력에 영향을 미치지 않았다. 아질산염 소거능은 pH 1.2, 3.0 그리고 6.0으로 측정하였다. 오미자 추출물은 pH 1.2와 3.0 에서 높은 소거력을 나타내었고, 열수 추출물은 methanol, ethanol 그리고 acetone 추출물보다 아질산염 소거능이 훨씬 높게 나타내었다. 감마선을 30 kGy까지 조사하였을 때, 오미자 추출물의 생리 활성에는 크게 영향을 미치지 않았다.
The inhibitory effect of extract of Atractylodis Rhizoma alba on melanin biogenesis was studied by using B16/F10 melanoma in culture. Atractylodis Rhizoma alba significantly inhibited tyrosinase activity, and melanin contents with or without $\alpha$-MSH and forskolin in vitro. Melanin contents and tyro-sinase activity have decreased in a dose-dependent manner. These results show that extract of Atractylodis Rhizoma alba could be developed as skin whitening components of cosmetics.
To estimate the inhibitory effect of some mushroom extract on melanin biosynthesis, we tested its inhibitory effects of five mushroom extracts on tyrosinase promoter in Bl6 mouse melanoma cells. In five mushroom extracts, Cordyceps militaris and Poria cocos exhibited low repression effect on tyrosinase promoter. However, Ganoderma lucidum, Paecilomyces japonicus, Phellinus linteus showed high repression effect, Especially, Paecilomyces japonicus and Phellinus linteus extracts had very higher repression effect approximately $81{\sim}83%\;at\;100{\mu}g/mL$. In the MTT assay, Paecilomyces japonicus and Phellinus linteus extracts exhibited high cytotoxicity. Therefore, repression effect of the extracts were closely connected with cytotoxicity.
유전자발현 조절 수준에서 멜라닌 색소 생합성 억제물질을 탐색하고자 지치 뿌리로부터 유용성 물질을 추출${\cdot}$분획하여 tyrosinase 프로모터를 지닌 B16 mouse melanoma cell에 처리한 결과 그 메탄을 추출물은 $10{\mu}g/mL$의 농도에서 약 $33\%$ 이상의 tyrosinase프로모터 활성 억제효과를 나타내었으며, 세포 활성능이 $100{\mu}g/mL$의 농도에서 약 $108\%$로 매우 안전하였다. 그리고 methylene chloride, ethyl acetate, butyl alcohol, 물 등의 용매 분획물들도 농도에 따라 차이는 있었지만 $100{\mu}g/mL$또는 $500{\mu}g/mL$의 고농도에서 tyro-sinase 프로모터의 활성을 억제하였다 또한, 지치 메탄올 추출물의 농도를 달리하여 3일 동안 처리하였을 때 멜라닌색소의 생성능은 $10{\mu}g/mL$와 $100{\mu}g/mL$의 농도에서 대조군 세포에 비 해 각각 약 $11\%$와 $24\%$로 크게 감소하는 결과를 보여주었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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