Human lactoferrin is an iron-binding glycoprotein with many biological activities, including the protection against microbial and virus infection and stimulation of the immune system. We introduced a human lactoferrin (hLf) cDNA under the control of 35S promoter into sweet potato by particle bombardment. Transgenic plants were regenerated via somatic embryogenesis. Transgenic plants were produced typical tuberous roots in soil. PCR, Southern and northern analyses confirmed that the hLf cDNA was incorporated into the plant genome and was properly expressed in plants. Western blot analysis showed that the 80 kDa full length hLf protein was produced in transgenic tuberous roots. Overall results indicated that sweet potato would be an excellent host to produce human therapeutic proteins.
IbMYB1, a transcription factor (TF) for R2R3-type MYB TFs, is a key regulator of anthocyanin biosynthesis during storage of sweet potatoes. Anthocyanins provide important antioxidants of nutritional value to humans, and also protect plants from oxidative stress. This study aimed to increase transgenic potatoes' (Solanum tuberosum cv. LongShu No.3) tolerance to environmental stress and enhance their nutritional value. Transgenic potato plants expressing IbMYB1 genes under the control of an oxidative stress-inducible peroxidase (SWPA2) promoter (referred to as SM plants) were successfully generated through Agrobacterium-mediated transformation. Two representative transgenic SM5 and SM12 lines were evaluated for enhanced tolerance to salinity, UV-B rays, and drought conditions. Following treatment of 100 mM NaCl, seedlings of SM5 and SM12 lines showed less root damage and more shoot growth than control lines expressing only an empty vector. Transgenic potato plants in pots treated with 400 mM NaCl showed high amounts of secondary metabolites, including phenols, anthocyanins, and flavonoids, compared with control plants. After treatment of 400 mM NaCl, transgenic potato plants also showed high DDPH radical scavenging activity and high PS II photochemical efficiency compared with the control line. Furthermore, following treatment of NaCl, UV-B, and drought stress, the expression levels of IbMYB1 and several structural genes in the flavonoid biosynthesis such as CHS, DFR, and ANS in transgenic plants were found to be correlated with plant phenotype. The results suggest that enhanced IbMYB1 expression affects secondary metabolism, which leads to improved tolerance ability in transgenic potatoes.
Sweet potato has low regeneration capacity, which is a serious obstacle for the fruitful production of transgenic plants. Simple and rapid regeneration method from storage root explants of purple sweet potato (Ipomoea batatas L.) was investigated. The embryogenic callus was observed from 4 cultivars and its highest rate was induced at 1 μM 2,4-D after 5 weeks of culture. Result revealed that a low concentration of 2,4-D and low light intensity was important factors for embryogenic callus formation. After subculture on medium with 5 μM ABA for 4 days, subsequently, occurred the regeneration of shoots within 4 weeks when these embryogenic callus was transferred onto the MS hormone free medium. Regenerated shoots were developed into platelets, and grown normal plants in the greenhouse. We developed a simple and quickly protocol to regenerate plantlets in storage root explants of purple sweet potato. This regeneration system will facilitate tissue culture and gene transfer research of purple sweet potato.
R2R3 유형의 단백질인 IbMYB1 전사인자는 고구마의 뿌리에서 안토시아닌 생합성 과정을 조절하는 중요한 단백질이다. 선행연구에서 IbMYB1 유전자의 발현 증가를 통한 안토시아닌의 합성 증가가 담배, 애기장대 및 고구마의 저장뿌리에서 증명된 바 있다. 본 연구에서는 괴경(저장줄기) 특이적 PATATIN 프로모터와 산화스트레스 유도성 SWPA2 프로모터의 조절하에서 안토시아닌을 고함유하는 IbMYB1 유전자 과발현 형질전환 감자를 개발하여 그 특성을 분석하였다. PAT-IbMYB1 형질전환 식물체들은 대조구 식물체 및 SWPA2-IbMYB1 식물체 보다 높은 안토시아닌 함량을 괴경에서 나타내었다. 본 연구의 결과로서, IbMYB1의 과발현은 형질전환 기술을 이용한 특정 조직 특이적 안토시아닌 생산에 매우 좋은 개발 기술이 될 것으로 생각되는 바이다.
고구마 산성 peroxidase (POD) (swpal) 또는 중성 POD(swpnl)을 도입한 형질전환 담배에 다양한 선량의 감마선을 조사한 후 30일에 항산화효소 활성과 식물생장에 미치는 영향을 조사하였다. 감마선은 조사선량에 비례하여 형질전환 식물체와 정상식물에 관계없이 모든 식물체의 생장을 크게 억제시켰다. 50-70 Gy 처리에서 식물체의 신장이 크게 억제되었고 새로운 잎이 발생되지 못하였다. 10-50 Gy의 조사선량에서는 POD, superoxide dismutase, catalase 활성에 큰 변화를 주지 않았다. 이러한 결과는 고구마 POD는 감마선 조사에 의해 유도되는 산화적인 스트레스에 대한 보호효과에 관여하지 않음이 시사된다.
본 연구는 유전자총기법에 의해 생산된 형질전환 고구마를 사용하여 glufosinate-ammonium에 대한 저항성 유무를 빠르고, 경제적이며, 신뢰할 수 있는 간이분석법을 찾고자 수행되었다. 저항성 진단법은 whole-plant 진단법, one leaf 진단법 및 leaf disk 진단법을 사용하였고, 이들 진단법에 의해 glufosinateammonium을 처리하고 잎의 피해율과 암모늄 축적량을 조사하였다. Leaf disk 진단법에서 glufosinateammonium 처리 후 형질전환 라인 7171의 잎에 대한 약해는 wild type에 비해 1.9배 낮았다. One leaf 진단법과 whole plant 진단법의 경우 glufosinateammonium 처리 후 7171의 잎에 대한 약해는 wild type에 비해 각각 59배와 92배 적었다. Leaf disk, one leaf와 whole plant 진단법에서 0.5-5mM glufosinateammonium 처리 후 암모늄 축적은 wild type이 7171에 비해 각각 2-20, 4-43 및 6-115배 더 많이 축적되었다. 이들 3가지 방법 모두 형질전환 고구마에 대한 glufosinate-ammonium 저항성 유무를 판단하는데 가능한 방법이나 one leaf 진단법이 가장 간편하면서 빠른 진단방법이었다. 그러나 이 방법은 엽령별 내성차이가 존재할 수 있어 고구마 엽이 10개 전개되었을 때 1, 3, 5, 7, 9엽을 각각 채취하여 3mM glufosinateammonium을 처리시 잎의 피해율과 암모늄 축적을 엽령별로 조사한 결과 유의적인 차이를 보이지 않았다. 따라서 분석에 소요되는 기간, 시료량, 정확성 등을 고려할 때 형질전환 고구마의 저항성을 판별하는데 one leaf 진단법이 가장 적합한 것으로 판명 되었다.
Diseases caused by begomoviruses (family Geminiviridae, genus Begomovirus) constitute a serious constraint to tropical and sub-tropical agro-ecosystems worldwide. In recent years, they have also introduced in temperate regions of the world where they have great impact and are posing a serious threat to a variety of greenhouse crops. Begomoviral diseases can in extreme cases reduce yields to zero leading to catastrophic losses in agriculture. They are still evolving and pose a serious threat to sustainable agriculture across the world, particularly in tropics and sub-tropics. Till recently, there have been no records on the occurrence of begomoviral disease in South Korea, however, the etiology of other plant viral diseases are known since last century. The first begomovirus infected sample was collected from sweet potato plant in 2003 and since then there has been gradual increase in the begomoviral epidemics specially in tomato and sweet potato crops. So far, 48 begomovirus sequences originating from various plant species have been submitted in public sequence data base from different parts of the country. The rapid emergence of begomoviral epidemics might be with some of the factors like evolution of new variants of the viruses, appearance of efficient vectors, changing cropping systems, introduction of susceptible plant varieties, increase in global trade in agricultural products, intercontinental transportation networks, and changes in global climatic conditions. Another concern might be the emergence of a begomovirus complex and satellite DNA molecules. Thorough understanding of the pathosystems is needed for the designing of effective managements. Efforts should also be made towards the integration of the resistant genes for the development of transgenic plants specially tomato and sweet potato as they have been found to be widely infected in South Korea. There should be efficient surveillance for emergence or incursions of other begomoviruses and biotypes of whitefly. This review discusses the general characteristics of begomoviruses, transmission by their vector B. tabaci with an especial emphasis on the occurrence and distribution of begomoviruses in South Korea, and control measures that must be addressed in order to develop more sustainable management strategies.
To examine the chilling tolerance lipids, we compared the chilling susceptibility of photosystem II of wild type tobacco plants with that of transgenic tobacco plants, in which the sensitivity to chilling had been enhanced by genetic modification of fatty acid unsaturation of chloroplast membrane lipids. The transgenic tobacco plants were found to contain reduced levels of unsaturated membrane fatty acids by being tansformed with cDNA for glycerol-3-phosphate acyltransferase from squash. For the purpose of studying on the functional integrity of photosystem II during low-temperature photoinhibition, the photochemical efficiency was measured as the ration of the maximun fluorescence of chlorophyll (Fv/Fm) of photosystem II. In parallel with an investigation on the transgenic plants, susceptibility of chilling-resistant species, such as spinah and pea, and of chilling-sensitive ones, such as squash and sweet potato, to low-temperature photoinhibition was also compared in terms of room temperature-induced chlorophyll fluorescence from photosystem II. When leaf disks from the two genotypes of tobacco plants were exposed to light at 5$^{\circ}C$, the transgenic plants showed more rapid decline in photochemical activity of photosysytme II than wild-type plants. When they were pretreated with lincomycin, an inhibitor of chloroplast-encoded protein synthesis, the extent of photoinhibition was even more accelerated. More impottantly, they showed a comparable extent of photoinhibition in the presence of lincomycin, making a clear contrast to the discrepancy observed in the discrepancy observed in the absence of lincomycin. Restoration of Fv/Fm during recovery from low-temperature photoinhibition occurred more slowly in the transgenic tobacco plants than the wild-type. These findings are discussed in relation to fatty acid unsaturation of membrane phosphatidylglycerol. It appears that the ability of plants to rapidly regenerate the active photosystem II complex from might explain, in part, why chilling-resistant plants can toleratlow-temperature photoinhibition.
환경스트레스에 강한 내성을 지닌 신품종 톨페스큐를 개발할 목적으로 산화스트레스에 의해 강하게 유도되는 SWPA2 promoter 하류에 CuZnSOD와 APX 유전자가 엽록체에 동시에 발현하도록 제작한 벡터를 Agrobacterium법을 이용하여 톨 페스큐에 도입하였다. Hygromycin이 첨가된 선발배지에서 내성을 가지며 재분화된 형질전환 식물체를 pot로 이식하여 기내 순화시킨 후, Southern 분석을 실시하여 본 결과, 발현벡터의 T-DNA 영역이 형질전환 식물체의 genome에 성공적으로 도입되었음을 확인하였다. 형질전환 식물체 잎 절편을 산화스트레스와 중금속을 포함하고 있는 용액에 처리하여 엽록체의 손상정도를 조사한 결과, 비형질 전환체에 비해 형질전환체는 강한 내성을 나타내었다. 또한 유식물체 수준에서 MV를 처리하여 내성을 비교한 결과, 비형질전환체에 비해 형질전환체는 손상을 덜 받았다. 이와 같은 연구결과는 CuZnSOD와 APX 유전자를 엽록체에 동시발현시키는 기술이 다양한 환경스트레스에 대해 복합재해내성을 가지는 다양한 작물을 개발하는데 유용하게 이용될 수 있음을 나타낸 결과이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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