아미노산 자동분석계를 이용하여 생체분석법으로 수확시기와 제조공정이 다른 6종류의 시판 녹차를 시료로 하여 아미노산 중 특히 theanine을 중점적으로 정량분석하였다. 찐 1번차에서 Theanine의 함량은 2235mg%였고, 수확시기가 늦은 2번차, 3번차로 내려갈수록 그 함량이 급격히 줄어들었다. 볶은 1번차에서는 2106mg%이었고 수확시기가 늦을수록 찐차에서와 같이 함량이 감소하는 경향을 보였다. 또, theanine의 함량은 찐 1번차와 볶은 1번차의 경우 전 아미노산 peak 면적의 약 55%를 차지했다. 제조공정이 다른 찐차와 볶은차에서 theanine의 함량은 약간의 차이가 있었다.
본 연구에서는 저온진공조건에서 추출 시간과 농도에 따른 녹차 열수추출조건을 최적화한 후 HP-20 column으로 caffeine을 제거한 녹차 추출물을 이용해 theanine 함유 기능성 젤리를 제조하였다. 또한, theanine 함유 젤리의 품질 특성, 제형안정성 및 항산화 효과, AChE 억제능을 조사하였다. 최적추출조건은 8% 녹차 분말을 2시간 추출하여 theanine 0.95 mg/mL, GABA 0.28 mg/mL, caffeine 1.45 mg/mL 추출액을 HP-20 column을 이용해 80% 에탄올로 카페인을 제거하였다. 3종의 겔화제와 농도별로 4종의 theanine 추출물 S1-S4(10-50%)을 제조해 품질 특성을 조사한 결과, 젤리에 theanine 추출물이 많을수록 L값과 b값이 증가하였다. 젤리의 물리적 특성을 조사한 결과, 3가지 겔화제 중 타마린드검, 잔탄검, 로거스트콩검(2:3:5=w/w/w)을 조합한 겔화제 III이 경도와 점착성이 낮고 탄력성이 높아 조직감이 가장 뛰어났다. 제형안정성 조사 시, 35%가 첨가된 S3가 이수율 25.88%과 붕괴율 1.31%로 우수한 제형안정성을 나타냈다. 또한 theanine 함유 젤리는 95℃, 30분간 가열조건에도 theanine과 GABA 성분이 파괴되지 않고 대부분 잔존하는 것을 TLC와 LC-MS 분석을 통해 확인했다. Theanine 추출물의 농도가 높을수록 DPPH radical 소거능은 증가하며, S4(50%)는 0.075 mg/mL ascorbic acid 수준과 유사한 항산화력을 나타냈다. AChE 저해 효과는 S3(35%)가 가장 높았으며 이는 donepezil 2.5 μM과 동일한 수준의 AChE 저해 활성을 나타냈다. 따라서 본 연구는 녹차 추출물에서 caffeine을 제거한 theanine 추출물로 기능성 젤리를 제조하였으며 품질 특성을 조사하였다.
아세트아니모펜(APAP)으로 유도된 간독성 모델에 미치는 theanine의 간 보호 작용에 대하여 간 기능 지표효소의 활성 측정, 항산화 및 GSH량 측정, 조직학적 변화 등을 통해 확인하였다. Theanine은 그 자체로 항산화 효과를 보였으며, 과량 투여된 APAP에 의해 발생하는 간조직의 지질과산화의 감소와 GSH가 회복되는 것을 동물실험을 통해 확인할 수 있었다. 또한 지질과산화와 GSH의 감소로 인해 발생한 간세포의 손상이 theanine의 처리 농도에 비례하여 감소하는 것을 간수치 검사와 간조직 검사를 통해 최종 확인하였다. 지금까지 간보호에 효과를 보이는 녹차의 카테킨이 주로 연구되어 왔으나, 본 연구를 통해 녹차의 theanine도 간 보호작용을 알 수 있었다. 이러한 연구 결과는 주 아미노산 성분인 theanine을 강화시킨 기능성 녹차 및 건강기능식품 개발의 기초 자료로 활용 가능할 것으로 사료된다.
Forty weanling piglets ($5.6{\pm}0.5kg$ and 26 to 30 d of age) were used in a 28-d experiment to determine the effects of ${\beta}$-glucan from Paenibacillus polymyxa and L-theanine on growth performance. Piglets were randomly allotted to four groups (n = 10, 2 animals per pen) provided with the basal feed (control), ${\beta}$-glucan 400 mg/kg feed, L-theanine 80 mg/kg feed or ${\beta}$-glucan plus l-theanine (combination of the above-mentioned concentrations). Body weight and feed consumption were recorded during four weeks. Subsequently, the immunomodulatory effects of ${\beta}$-glucan and L-theanine were investigated for lipopolysaccharide (LPS)-induced cytokine production in vitro and in vivo on day 28. Although there were no significant differences in the growth performances among the treatment groups, ${\beta}$-glucan plus L-theanine had 5.6% greater ADG (p = 0.074) on day 21 to 28. ${\beta}$-Glucan alone or plus L-theanine increased interleukin (IL)-10 levels and decreased interferon (IFN)-$\gamma$ and tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$ levels in cultured medium by LPS treatment (p<0.05). Plasma IL-10 levels were also increased in the piglets fed with ${\beta}$-glucan alone or plus L-theanine after LPS challenge ($25{\mu}g/kg$, i.p.), whereas plasma IFN-$\gamma$ and TNF-${\alpha}$ levels were decreased (p<0.05). The levels of IFN$\gamma$ in piglets fed with ${\beta}$-glucan plus L-theanine showed the greatest inhibition after LPS challenges. In conclusion, treatment of ${\beta}$-glucan alone or plus L-theanine might lessen inflammatory responses against Gram-negative bacterial infection via the inhibition of pro-inflammatory cytokine production and enhancement of anti-inflammatory cytokine production. Further studies are needed to determine an optimal concentration of ${\beta}$-glucan and L-theanine for improved growth performance.
Various neurotransmitters are involved in regulating stress systems. In this study, we investigated the combination relieving effect of green tea extract(GTE) and L-theanine on the stress induced by electric foot shock. Four week oral administration of GTE (24 mg/kg), L-theanine (4 mg/kg) or their combination reduced the levels of dopamine, noradrenaline and corticosterone in blood, brain cortex, hippocampus, and striatum, wherease increased serotonin level. The combination of GTE and L-theanine showed much greater effects than single treatment of each component, and the effects are comparable to diazepam (2 mg/kg). Therefore, this study suggests that the combination of GTE and L-theanine may act effective and be useful for stress relieving treatment.
We examined the effect of green tea extract (GTE) and L-theanine combination on the $A{\beta}_{1-42}$-induced memory dysfunction. GTE and combination were administrated into mice for 3 weeks followed by injection of $A{\beta}_{1-42}$ to induce memory impairment. GTE and L-theanine administration significantly improved cognitive ability and reduced $A{\beta}_{1-42}$ level accompanied with the inhibition of neuronal cell death and activities of secretase. These results suggest that GTE and L-theanine combination may be a useful for preventing for the development or progression of Alzheimer's disease.
Acetylcholinesterase (AChE) plays a role in the progression of Alzheimer's disease (AD). In this study, we examined the improving effect of L-theanine, a major amino acid in Japanese green tea (Camellia sinensis) on the scopolamine (1 mg/kg/mouse)-induced memory dysfunction in mice. Treatment with L-theanine (2, 4 mg/kg/mouse p.o.) in the drinking water for 7 days reversed the scopolamine-induced latency time and distance in the water maze test, latency time in the passive avoidance test, and inhibited AChE activity. This study suggests that L-theanine may be a useful agent for prevention of progression of AD.
Amyloid beta ($A{\beta}$)-induced neurotoxicity is a major pathological mechanism of Alzheimer's disease (AD). In this study, we investigated the inhibitory effect of L-theanine, a component of green tea (Camellia sinensis) on $A{\beta}_{1-42}$-induced neurotoxicity and oxidative damages of macromolecules. L-theanine inhibited $A{\beta}_{1-42}$-induced generation of reactive oxygen species, and activation of extracellular signal-regulated kinase and p38 mitogenic activated protein kinase as well as the activity of nuclear factor kappa-B. L-theanine also signifi cantly reduced oxidative protein and lipid damage, and elevated glutathione level. Consistent with the reduced neurotoxic signals, L-theanine (10-50 ${\mu}g$/ml) concomitantly attenuated $A{\beta}_{1-42}$ (5 ${\mu}M$)-induced neurotoxicity in SK-N-MC and SK-N-SH human neuroblastoma cells. These data indicate that L-theanine on $A{\beta}$-induced neurotoxicity prevented oxidative damages of neuronal cells, and may be useful in the prevention and treatment of neurodegenerative disease like AD.
하동지역에서 생산되는 잎 녹차(우전, 세작, 중작, 대작)에 함유되어 있는 catechin류, alkaloid류 및 theanine를 HPLC를 이용하여 분석을 함과 동시에 녹차 추출물을 이용하여 총 페놀 물질과 항산화능을 측정하였다. Catechin류와 alkaloid류, theanine, 총 페놀 화합물의 함량은 물 추출물 보다 80% 알코올 추출물에서 더 높았다. 총 catechin과 alkaloid의 함량은 80% 에탄올로 추출한 우전(172.33 mg/g, 30.80 mg/g)에서 가장 높았다. Theanine의 함량도 80% 에탄올 추출물에서 높았고 55.36에서 37.48 mg/g의 범위였다. 녹차의 총페놀 화합물은 우전에서 가장 높았고, DPPH법, FTC법 및 TBA법을 이용한 항산화 활성 측정에서도 우전에서 높은 결과를 나타내었다.
ʟ-Theanine, found in green tea leaves has been shown to positively affect immunity and relaxation in humans. There have been many attempts to produce ʟ-theanine through enzymatic synthesis to overcome the limitations of traditional methods. Among the many genes coding for enzymes in the ʟ-theanine biosynthesis, glutamylmethylamide synthetase (GMAS) exhibits the greatest possibility of producing large amounts of production. Thus, GMAS from Methylovorus mays No. 9 was overexpressed in several strains including vectors with different copy numbers. BW25113(DE3) cells containing the pET24ma::gmas was selected for strains. The optimal temperature, pH, and metal ion concentration were 50℃, 7, and 5 mM MnCl2, respectively. Additionally, ATP was found to be an important factor for producing high concentration of ʟ-theanine so several strains were tested during the reaction for ATP regeneration. Baker's yeast was found to decrease the demand for ATP most effectively. Addition of potassium phosphate source was demonstrated by producing 4-fold higher ʟ-theanine. To enhance the conversion yield, GMAS was additionally overexpressed in the system. A maximum of 198 mM ʟ-theanine was produced with 16.5 mmol/l/h productivity. The whole-cell reaction involving GMAS has greatest potential for scale-up production of ʟ-theanine.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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