GAGs의 추출 방법 중 효소의 사용으로 추출 효율의 상승과 원료수급의 문제점을 해결할 수 있었다. 그러나 효소 사용에 따른 생산단가의 상승과 단백질 함량의 증가에 따른 화장품 규격을 만족시킬 수 없음으로, 1/60 M sodium phosphate buffer로 105$^{\circ}C$로 열수 추출하는 것이 화장품 규격을 만족시키는 방법으로 나타났다. 이렇게 추출한 GAGs의 SO$_4$ 함량은 31.2%이고 회분의 함량이 22.2%로 GAGs 추출 향상을 위해 사용되어지는 sodium phosphate의 사용으로 회분 함량이 높아졌음을 알 수 있고 무기질 분석에서 Na의 함량이 3.0 mg%로 총 무기질의 47.6%를 차지하고 있었다. 시료를 HPLC로 분석하였을 때 chondroitin sulfate A, C와 동일한 분석시간을 나타내어 chondroitin sulfate의 함유 가능성을 나타내고, glucosamine과 galactose가 78.0% 존재하는 것을 당조성 분석을 통해 확인하였다. 일반 성분, HPLC분석, 당 조성분석과 아미노산 분석결과로 glucosamine과 galacturonic acid가 주가 되어 threonine으로 연결된 구조를 하는 GAGs라는 것을 알 수 있다. 화장품 원료 기준에 맞추기 위해서는 sulfate 함량이 35.0~45.0%, 단백질 함량은 14.0~22.0%로 유지해야하므로 제단백결과 5.0%, 10.0%, 20.0% TCA (w/v) 처리, 10.0%, 20.0%, 40.0% HCI (v/v) 처리, UF(ultra filtration)를 포함한 10.0% TCA (w/v), 20.0% SSA (w/v), 25.0% HCI (v/v) 처리 결과 5.0% TCA (w/v) 및 10.0% HCI (v/v)이 화장품 기준에 적합하며 경제적이며 효율적이라는 것을 알 수 있었다.
신선한 미더덕 분쇄물로부터 열처리하지 않은 시료(FR), $110^{\circ}C$에서 15분간 열처리한 시료(H1), $120^{\circ}C$에서 5분간 열처리한 시료(H2), 동결건조한 시료(FD)를 제조하고, 이들로부터 메탄올, 에탄올, 아세톤, 물 추출물을 제조하여 추출수율, 항산화활성, 항암활성을 조사하였다. 수분이 함유된 시료인 FR, H1, H2의 경우 열처리 온도가 높을수록 전체적인 추출수율이 감소하였으나, 용매에 따라 회수되는 비율은 비슷한 경향을 나타내었으며 에탄올을 이용하였을 때 가장 높은 수율을 보였다. 건조시료인 FD의 경우 FR, H1, H2의 경우보다 전체적인 수율이 낮고 경향이 달랐는데, 아세톤에 의해 추출되는 양이 매우 줄었으며 물을 이용한 경우 매우 증가하였다. 미더덕 추출물의 항산화력은 DPPH 라디칼 소거능과 환원력으로 측정하였다. FR, H1, H2은 아세톤>에탄올>메탄올 순으로 라디칼 소거능을 나타내었고, 모든 추출용매에서 FR>H1>H2의 순서로 라디칼 소거능을 보였다. 한편 FD는 에탄올 추출물이 가장 높은 라디칼 소거능을 보였고, 아세톤과 물 추출물에서는 활성을 나타내지 않았다. 환원력의 경우, FR의 메탄올 추출물이 가장 높은 활성을 보였고, 열처리 온도가 높을수록 모든 용매에서 환원력은 감소하였다. FD의 경우에는 메탄올>에탄올>물>아세톤의 순서로 환원력이 측정되었다. 미더덕에 열처리를 한 경우, 열처리 온도가 상승할수록, 라디칼 소거능 및 환원력이 모두 감소하였다. 대장암 세포주 HT-29에 대한 미더덕 추출물의 암세포 증식억제효과는 동결건조 미더덕의 아세톤 추출물이 $500{\mu}g/mL$의 농도에서 약 42%의 높은 활성을 보였다. 이상의 실험 결과로 미더덕에 항산화력과 항암력을 가지는 성분이 함유되어 있음을 알 수 있었다.
신선한 미더덕(FR)과 동결건조 한 미더덕(FD)을 부위별로 제조하여 메탄올, 에탄올, 아세톤, 물로 추출하여 항산화 활성을 조사하였다. DPPH 라디칼 소거능의 경우, 전체 부위의 FR에서는 농도별로 모두 메탄올 추출물에서 높은 활성을 보이나, FD에서는 아세톤 추출물에서 높은 활성을 보였다. 그리고 껍질 부위의 FR에서는 에탄올 추출물, FD에서는 아세톤 추출물, 살 부위의 FR에서는 아세톤 추출물, FD에서는 물 추출물이 각각 높은 활성을 나타내었다. 건조 여부에 의해 비교해보면 전체와 껍질 부분에서는 FR보다 FD에서 활성이 좋았으나, 살 부위에서는 FR가 FD보다 좋은 활성을 보였다. 한편, 환원력의 경우에서는 전체 부위의 FR에서는 농도별로 모두 메탄올 추출물에서 높은 활성을 보이나, FD에서는 아세톤 추출물에서 높은 활성을 보였다. 그리고 껍질부위는 FR, FD에서 모두 아세톤 추출물이 활성이 좋았고, 살 부위의 FR에서는 아세톤 추출물, FD에서는 물 추출물이 각각 높은 활성을 나타내었다. 건조 여부에 의해 비교해보면 전체와 껍질 부분에서는 FR보다 FD에서 활성이 좋았으나, 살 부위에서는 FR가 FD보다 좋은 활성을 보였다. 모든 시료에서 농도가 높아질수록 유의성 있게 모든 결과 값이 높게 나타났으며, 전체 부위의 활성이 살 부위와 껍질 부위의 활성이 서로 조합되어 영향을 미치는 것으로 추측을 할 수 있다. 이상의 결과로 항산화활성 물질을 탐색함에 있어서 미더덕이 중요한 천연자원이 될 수 있다는 가능성을 확인할 수 있었다.
Seven oligonucleotides primers were shown to generate the shared loci, specific loci, unique shared loci to each species and shared loci by the three species which could be obviously scored. In the present study, 7 oligonucleotides primers produced 401 total loci in the Styela clava (SC) species, 390 in the Halocynthia roretzi (HR) and 434 in the Styela plicata (SP), respectively. Seven oligonucleotides primers generated 275 specific loci in the SC, 341 in the HR and 364 in the SP species, respectively. The oligonucleotides primer BION-23 generated 28 unique loci to each species in the SP species. Especially, the oligonucleotides primer BION-25 produced 7 unique loci to each species, which were identifying each species in the SP species. BION-17 distinguished 21 shared loci by the three ascidian species, major and/or minor fragments of sizes, which were identical in almost all of the samples. Based on the average bandsharing values of all samples, the similarity matrix ranged from 0.519 to 0.774 in the SC species, from 0.261 to 0.683 in the HR species and from 0.346 to 0.730 in the SP species. As regards average bandsharing value (BS) results, individuals from SC species ($0.661{\pm}0.081$) exhibited higher bandsharing values than did individuals from HR species ($0.555{\pm}0.074$) (P<0.05). The dendrogram obtained by the seven oligonucleotides primers indicates three genetic groups. In three ascidian species, the shortest genetic distance (0.071) exhibiting significant molecular difference was also between individual no. 20 and no. 21 within the SP species.
척색동물문 미색동물아문에 속하는 미더덕과 오만둥이는 독특한 향과 맛으로 인해 식품에 널리 이용되고 있다. 영양성분으로 EPA와 DHA 와 같은 오메가 3 고도 불포화지방산, 타우린 및 유리 필수 아미노산, 그리고 카로테노이드 화합물이 함유되어 있다. 본 연구에서는 영양생리학적 기능성이 풍부한 미더덕과 오만둥이를 이용하여 술을 제조한 후, 품질을 평가하였다. 미더덕은 전체, 껍질, 살 부분으로 부위를 나누고, 오만둥이는 전체를 이용하여 각각 10, 20, 50 g을 알콜 함량 30%의 시판 과실주용 소주 250 mL에 첨가하여 4달간 숙성한 후 주정도, DPPH 라디칼 소거능, 색도측정, 관능검사를 실시하였다. 제조한 각 술의 알콜 함량은 미더덕과 오만둥이의 첨가량이 증가할수록 감소하였다. 항산화 활성인 DPPH 라디칼 소거능은 오만둥이보다 미더덕이 조금 더 활성이 좋았으며, 미더덕의 부위별로는 살 부분이 가장 좋았다. 술의 색도는 미더덕과 오만둥이의 첨가량이 증가할수록 L값과 a값은 감소하는 경향, b값은 증가하는 경향을 나타내었다. 관능검사에서 미더덕, 오만둥이 술은 비슷한 경향을 보였으며 전체적으로 시험구간의 유의적인 차이는 거의 나타내지 않았다.
Two kinds of humoral factors were observed in 2 orders, 7 families, 10 genera, and 15 different species of Korean ascidians. They are the naturally occuring hemagglutinins and/or hemolysins against human erythrocytes A, B, and 0. All but two species showed aggregative activity, although there were considerable variations in titer. The weak agglutinating and lytic activities were increased in the presence of $Ca^{++}$. Much higher activities of agglutination and/or lysis were shown in the hemolymph than extracts from tissues, and a higher response was shown in adults than in juveniles. No distinct differences from collected locations were observed. The hemolymph of Ciona intestinalis showed a strong hemolytic (cytotoxic) and weak agglutinins capacities. In addition, hemolymph of Styela plicata and Styela clava clava also showed hemoagglutining and hemolytic activities. Botryllus tuberatus had hemagglutining and weak lytic activities. Other species showed only hemagglutining activity. These agglutining activities are probably responsible for carbohydrate recognition in solitary or colonial ascidian. The lytic activity is probably responsible for antibacterial defense and nonfusion reactions between allogeneic colonial ascidians, especially the genus of Botryllus. The occurrences of humoral factors in ascidians were independent of their geographic distributions.
Effects of muscle fluid concentrates from Styela clava on fish diets were investigated in rainbow trout(Oncorhynchus mykiss). Fish were fed on one of the isonitrogenous(48%) and isolipic(20%) feed containing 5 to 20% of muscle fluid concentrates for 8 weeks. Hematological parameters such as hemoglobin, hematocrit, albumin, glucose, total bililubin, triglyceride and glutamic pyruvate transaminase of the rainbow trout which were fed on the diets varied, but no specific trend became apparent. However, glutamic oxaloacetic transaminase value was significantly higher than that of normal fishes. Therefore, concentrated ascidian fluid which is normally discarded, can be combined with commercial diets for the normal growth of rainbow trout.
Carotenoids were found in high levels in both muscle and tunic samples, with the highest and lowest values observed in March and January, respectively. The average values in muscle (GM) and tunic (GT) harvested in Geoje were 49.1 mg/100g and 56.7 mg/100g, respectively, whereas those in muscle (TM) and tunic (TT) harvested in Tongyeong were 42.0 mg/100g and 50.2 mg/100g, respectively. The total phenol contents of the tunic were not significantly different (P < 0.05) between sampling area and month. We investigated the antioxidative activities of the carotenoids against linoleic acid peroxidation [1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)] and hydroxyl radicals as well as their reducing power. The DPPH radical scavenging activity was 7.6-13.5% in GM, which is relatively weak, whereas it was 21.1-29.9% in GT, 9.6-12.4% in TM and 19.3-24.1% in TT. In comparison to ${\alpha}$-tocopherol, the carotenoids were found to have strong inhibitory effects against linoleic acid peroxidation, and exhibited strong hydroxyl radical scavenging activities and reducing power at 120 ${\mu}g/mL$ of each sample.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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