• Applied Biological Chemistry
• /
• 제49권3호
• /
• pp.192-195
• /
• 2006

국내에서 개발된 비타민 E 강화 유전자변형 들깨의 정성 PCR 분석법의 개발을 위해 들깨의 내재 유전자로써 KAS-I (Beta-ketoacyl-ACP synthase I)를 선별하였고, 이러한 내재유전자를 특이적으로 증폭시킬 수 있는Primer(Pfru3-F/R)쌍을 이용한 PCR에서 95 bp의 PCR증폭 산물을 얻었으며, 들깨를 포함한 16개 작물에 대해 PCR을 수행한 결과에서 들깨만이 특이적으로 증폭되는 것을 확인하였다. 또한, 비타민 E 강화 유전자변형 들깨에 삽입된 TMT(${\gamma}$-tocopherol methyltransferase) 유전자와 OCS(Octopine synthase) terminator 연결 부위를 증폭시켜 148 bp의 PCR 산물을 얻을 수 있는 primer(TMTO-F/R)를 제작하였으며, 이러한 두 쌍의 primer를 이용하여 국내 개발된 비타민 E 강화 유전자변형 들깨의 PCR 정성 분석법을 확립하였다.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제48권4호
• /
• pp.335-338
• /
• 2005

국내에서 개발된 GM 쌀인 밀양 204호, 익산 483호의 정성 PCR 분석법의 개발을 위해 쌀의 내재 유전자로써 SAMDC1(S-adenosylmethionine decarboxylase)에 특이적인 primer (OsSAMDC1-5'/3')쌍을 제작하여 쌀을 포함한 20개 작물에 대해 PCR을 수행하여 쌀에 특이적으로 증폭되는 것을 확인하였다. 또한, 밀양 204호에 삽입된 GUS 유전자와 NOS terminator 연결 부위를 증폭시켜 172 bp의 PCR 산물을 얻을 수 있는 primer(Os204-5'/OsNOS-3')와 익산 483호에 삽입된 bar 유전자와 NOS terminator 연결 부위를 증폭시켜 161 bp의 PCR 산물을 얻을 수 있는 primer(Os483-5'/OsNOS-3')을 이용하여 국내 개발된 GM 쌀인 밀양 204호, 익산 483호의 PCR 정성 분석법을 확립하였다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
• /
• 제52권1호
• /
• pp.1-7
• /
• 2009

후대교배종 CM 벼의 정성 PCR 검정방법을 개발하기 위하여, 벼의 내재유전자로써 OsCs-J(rice cytochrome c gene)을 선발하여 OsCytC-5'/3'의 primer쌍을 제작하고, 벼를 포함한 서로 다른 8개 작물에 대하여 PCR을 수행한 결과 벼에 특이적으로 증폭되는 111 bp의 반응 산물을 확인하였다. 국내 개발된 LS28$\times$CryIAc1 GM 벼의 검정 분석으로 정성 PCR 반응을 수행하였다. 정성 PCR을 위하여 GM 벼에 도입된 T-DNA 및 게놈상의 도입유전자 삽입부위의 인접서열을 바탕으로 구조 및 계통 특이적인 검정 primer 쌍을 제작하였다. ActCk-5'/3' primer 쌍을 이용하여 LS28의 T-DNA 내의 actin 프로모터와 OsCK1 유전자 사이를 증폭시켜 306 bp의 PCR 반응 산물을 얻을 수 있었으며, 또한 계통특이 primer 쌍인 CryIAc1 GM 벼유래의 CrLB-5'/3' 및 LS28 GM 벼 유래의 CKRB-5'/3'를 이용한 PCR 반응으로 각각 142 bp와 91 bp의 도입유전자의 인접서열 부위의 특이적인 증폭 산물을 확인할 수 있었다. 계통 특이적 검정을 위한 이들 개발 primer 쌍들은 event 계통과 대조적으로 non-GM 벼와 다양한 작물에 대하여 어떠한 특이적인 PCR 증폭 산물을 형성하지 않았다. 따라서 본 연구에서 계통특이 primer를 이용하여 후대교배종 GM 벼 계통, L528$\times$CryIAc1을 특이적으로 검출할 수 있음을 확인하였고, 제시된 방법이 GM 벼의 실용화를 위한 위해성평가의 검정방법 자료로 제공될 수 있음을 확인하였다.

• 한국식품위생안전성학회지
• /
• 제25권3호
• /
• pp.278-280
• /
• 2010

This study was aimed to develop a novel qualitative multiplex polymerase chain reaction (PCR) for simultaneous detection of genetically modified (GM) soy and maize within a single reaction. The specific primers designed to detect four respective GM events (A2704-12, MON88017, Bt11, and MON863) were included in the tetraplex PCR system. Each of PCR products for four GM events could be distinguished by agarose gel based on their different lengths. The specificity and reproducibility of this multiplex PCR were evaluated. This multiplex PCR consistently amplified only a fragment corresponding to a specific inserted gene in each of the four GM events and also amplified all four of the PCR products in the simulated GM mixture. These results indicate that this multiplex PCR method could be an effective qualitative detection method for screening GM soy and maize in a single reaction.

• Journal of Plant Biotechnology
• /
• 제40권1호
• /
• pp.18-26
• /
• 2013

살충성 유전자 mcry1Ac1을 포함하고 있는 해충저항성 유전자변형(GM) 벼 Agb0101이 국내에서 개발되었다. 향후 Agb0101 벼의 환경방출에 따른 모니터링과 이력추적을 위해서는 신뢰성 있는 검출방법의 개발이 필요하다. 따라서, 본 연구에서 해충저항성 GM벼의 사후 안전관리를 위한 정성적 및 정량적 PCR 검정 방법을 개발하였다. 벼 녹말분지효소 유전자 RBE4를 PCR 분석의 내재유전자로 사용하였고, 이의 primer쌍 RBEgh-1/-2는 101bp의 PCR 증폭산물을 형성하였다. 정성 PCR 분석을 위해서 삽입된 T-DNA를 바탕으로 특이 primer를 제작하였고, 이벤트 특이적 검출 primer의 경우 Agb0101의 도입유전자 및 벼 염색체 DNA 사이의 5' 또는 3' 인접염기부위를 정확하게 특이적으로 PCR 증폭하였다. 반면, 대조구인 각종 작물, 국내 벼 품종 및 Agb0101과 동일 형질전환 벡터를 갖는 해충저항성 벼에서는 어떠한 PCR 증폭산물도 형성하지 않았다. 표준물질로써 내재유전자 및 이벤트 특이적 단편으로 제조된 pRBECrR을 이용한 real-time PCR 분석에 의해서 정량한계(LOQ)가 10 copies 농도의 범위인 것으로 확인되었고, 이의 유효성을 검증하기 위하여 상이한 농도의 Agb0101시료(10, 5, 3 및 1%)를 real-time PCR 분석하여 정량검정에 대한 표준편차 및 상대표준편차가 각각 0.06 ~ 0.40 및 3.80 ~ 7.01%의 낮은 범위에 포함되는 것을 확인할 수 있었다. 이들 결과로 본 연구에서 개발된 정성 및 정량 PCR 검정 방법이 해충저항성 GM벼 Agb0101의 모니터링 및 이력추적에 효과적으로 이용될 수 있을 것으로 본다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제17권2호
• /
• pp.335-341
• /
• 2007

For the development of qualitative and quantitative PCR methods of genetically modified (GM) pepper developed in Korea, a capsanthin-capsorubin synthase (CCS) gene was used as the endogenous reference gene. The primer pair ccs-F/R amplifying the pepper endogenous gene gave rise to an amplicon of 102 bp. No amplified product was observed when DNA samples from 16 different plants were used as templates. The construct-specific primer pairs amplifying the junction region of the bar gene and Ti7 introduced in GM pepper gave rise to an amplicon of 182 bp. Quantitative PCR assay was performed using a TaqMan probe and a standard plasmid as a reference molecule, which contained both an endogenous and event-specific sequence. For the validation of this method, the test samples containing 0.1, 1, 3, 5, and 10% GM pepper were quantified.

• 생명과학회지
• /
• 제16권5호
• /
• pp.806-811
• /
• 2006

The regulation of labelling criterion for genetically modified (GM) foods has been enforced since 2001 in Korea. Therefore, GM soybean (GMS) or GM maize (GMM) processed foods must be labeled as GMO derived. We surveyed to see whether this regulation is kept relevantly or not and the distributive statue of GM processed foods. Using the method of polymerase chain reaction (PCR) based on endogenous gene (Le1n, SSIIb), promoter gene (P35S), terminator gene (NOS) and transgenic gene (RRS, Bt11, Bt176, GA21, T25, Mon810), we detected GMS and GMM processed foods circulating at the market in Busan area. Out of total 100 samples, 38 items were showed to be contaminated with recombinant gene by qualitative PCR. Among 82 domestic and 18 imported items, 32 (39.0%) and 6 (33.3%) items were detected with GM ingredients respectively. Also among the 80 soybean and 20 maize processed foods, 23 (28.7%) and 15 (75.0%) foods were sensitive to detect GMS and GMM ingredients respectively. For the qualitative PCR positive foods, we chased identity preservation (IP) certificates. And we verified that the PCR positive crops were grown up, harvested and shipped separately from GMO but just mixed with GMO in the threshold of the non attentional contamination levels (3%). Thus we can not find out any regulation-violent case at all. The results of this study will help to keep the regulations of GM labelling and be informative to consumers who want to know the laboratory results of GMO testing.

• 미생물학회지
• /
• 제49권3호
• /
• pp.292-296
• /
• 2013

본 연구는 multiplex real-time PCR을 이용하여 Actinobacillus actinomycetemcomitans, Campylobacter rectus, Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythus, Treponema denticola, Prevotella intermedia 등과 같은 6종의 주요 치주 질환 원인 미생물들을 동시에 검출할 수 있는 분석 방법에 관한 것이다. 4개의 형광 염료를 사용하여 internal control과 함께 3개의 균종씩 나누어 분석하였으며, 분석 대상 균종 간 그리고 다른 종류의 구강 미생물 균종과의 간섭과 교차 반응이 없음을 확인하였다. 본 연구의 multiplex real-time PCR은 타액과 플라그 등의 다양한 샘플에 포함되어 있는 각 미생물들을 정성, 정량적으로 분석할 수 있었으며, 치주염 환자와 건강한 사람들에 대한 비교 분석 결과 분명한 차이를 발견 할 수 있었다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
• /
• 제49권4호
• /
• pp.143-147
• /
• 2006

A rapid PCR-based assay for detecting hepatitis B viral DNA(HBV DNA) in serum and plasma was developed using a new PCR instrument named GenSpector(TMC-1000, Samsung electronics). PCR was carried out using a chip-based platform, which enabled 50 PCR cycles with internal controls, and melting-curve analysis in 30 minutes. Verification of the amplified HBV DNA product and the internal control was based on specific melting temperatures(Tm) analysis, executed by the GenSpector software. Primers were designed within the region conserved through HBV genotypes A to F. The lower limit of detection was 840 copies/ml serum, conducted with serial dilutions of a HBV DNA positive control(ACCURUN 325 series 700, Boston Biomedica Inc.). The assay was also compared to another assay for HBV DNA(Versant HBV DNA 3.0 assay, Bayer HealthCare) for 200 samples(each 100 clinical negative and positive samples). The sensitivity and specificity were 100% matched. This rapid PCR-based assay is specific, reproducible, and enables qualitative detection of HBV DNA.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제45권4호
• /
• pp.185-189
• /
• 2002

우리나라의 유전자변형농산물 의무 표시제가 시행됨에 따라 수입 유전자변형농산물 중 유전자변형 콩의 혼입유무를 판별할 수 있는 검정기술 개발이 요구되고 있다. 근사미(glyphosate)제초제에 저항성을 나타내는 토양미생물인 Agrobacterium CP4 유래의 5-enolpyruvyl shikimate-3-phosphate synthase(EPSPS) 유전자의 도입여부를 PCR로 진단할 수 있는 특이프라이머를 제작하여 제초제저항성 콩(Roundup Ready Soybean, RRS)을 검정할 수 있는 PCR조건을 확립하였으며 콩의 내재유전자인 lectin유전자와 RRS특이 프라이머를 이용하여 duplex PCR에 의한 제초제저항성 콩의 검정법을 확립하였다. 또한 수입 콩 및 콩나물에 대하여 근사미 제초제 처리로 저항성 개체를 판별하는 생물검정법도 확립하여 저항성 개체의 잎에서 분리한 genomic DNA에 대하여 EPSPS특이 프라이머를 이용하여 분석한 결과 RRS특이적인 PCR밴드를 확인하였다. 또한 수입 콩의 백립중과 종실의 제색을 고려할 때 단일품종이 아닌 여러 품종이 혼합되어 있음을 확인하였다.