The optimum medium composition for the production of L-tryptophan with Klebsiella pnuemoniae pheA tyrA trpE trpR/pSC 101-trp$^{+}$ and the effect of precusors in the optimum medium were studied. The specific growth rate in the optimum medium was almost the same as that in the basal medium, the former showing 1.01 and the latter 1.07 hr $$^{-1}$, but the produced tryptophan was increased 45% in the optimum medium. The maximum amount of produced tryptophan was 159 mg/l within 14 hours. Tryptophan production was ceased by casamino acid addition over 4 g/l in medium, but cell maSS increased with its addition. Indole and anthranilate as precusors had toxic effect on growth and tryptophan production at experimented concentration range (over 20 mg/l), but L-serine had good effect on tryptophan production, resulting in 175 mg/l tryptophan within 14 hours.
유전자 조작된 Klebsiella pnuemonia를 이용하여 트립토판 생산을 위한 최적 조건 및 플라스미드 안정성에 대한 연구를 수행하였으며, 최적온도는 $37^{\circ}C$, 최적온도에서의 비증식속도는 1.05$h^{-1}$로 측정되었다. 포도당을 기질로 사용하여 첨가회분배양 36시간 후의 트립토판 농도는 0.175g/l 이었으며, 이 결과는 다른 회분배양이나 플라스크 배양에 비해 1.2 및 1.6배 증가한 수치이다. 첨가회분배양에서의 균주안정성은 플라스크에서의 연속 교대 배양에서는 95%가 유지되었으나 첨가 회분배양에서는 50%만이 유지됨을 측정했다.
Kim, Jung-Ho;Kim, Hyun Joong;Kim, Yong Hyun;Jeon, Jong Min;Song, Hun Suk;Kim, Junyoung;No, So-Young;Shin, Ji-Hyun;Choi, Kwon-Young;Park, Kyung Moon;Yang, Yung-Hun
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제26권9호
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pp.1586-1592
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2016
Klebsiella pneumoniae is a gram-negative, non-motile, rod-shaped, and encapsulated bacterium in the normal flora of the intestines, mouth, skin, and food, and has decarboxylation activity, which results in generation of diamines (cadaverine, agmatine, and putrescine). However, there is no specific information on the exact mechanism of decarboxylation in K. pnuemoniae. Specifically lysine decarboxylases that generate cadaverine with a wide range of applications has not been shown. Therefore, we performed a functional study of lysine decarboxylases. Enzymatic characteristics such as optimal pH, temperature, and substrates were examined by overexpressing and purifying CadA and LdcC. CadA and LdcC from K. pneumoniae had a preference for L-lysine, and an optimal reaction temperature of 37℃ and an optimal pH of 7. Although the activity of purified CadA from K. pneumoniae was lower than that of CadA from E. coli, the activity of K. pneumoniae CadA in whole cell bioconversion was comparable to that of E. coli CadA, resulting in 90% lysine conversion to cadaverine with pyridoxal 5'-phosphate L-lysine.
본 연구는 부산지역 하천에서 plasmid 매개성 광범위 ${\beta}-lactam$ 분해효소(extended spectrum ${\beta}-lactamase;\;ESBL$)를 생성하는 세균을 분리하여 생성된 광범위 ${\beta}-lactam$ 분해효소를 유형별로 분류하기 위함이다. Escherichia coli 6균주와 Klebsiella pneumoniae 15균주가 피전달균주인 Escherichia coli J53 $Azid^{R}$에 plasmid 매개성 광범위 ${\beta}-lactam$ 분해효소 생성 인자를 전달하였다. PCR 후 얻은 유전인자를 plasmid로 매개된 광범위 ${\beta}-lactam$ 분해효소 유전자의 염기서열 분석결과, E. coli와 K. pneumoniae 유전자를 BCM Search Launcher 및 GenBank nucleotide database를 통하여 검색한 결과 ESBL 유형은 TEM-52형과 SHV-12형이었다. TEM-52는 E. coli와 K. pneumoniae 양쪽에서 분리되었다. 그러나 SHV-12는 K. pneumoniae에서만 분리되었다. 이상의 결과로부터 plasmid 매개성 광범위 ${\beta}-lactam$ 분해효소를 생성하는 세균이 한국에서는 이미 임상범위를 넘어 자연계까지 확산되었음을 알 수 있었다.
본 연구에서는 도축장과 도축물에서 plasmid 매개성 광범위 ${\beta}$-lactam (extended spectrum ${\beta}$-lactamase) 분해효소를 생성하는 Klebsiella pneumoniae와Escherichia coli가 분리됨으로서 한국에서는 이들 균주가 임상범위를 넘어 자연계까지 확산되었음을 확인하였다. 디스크 확산 시험, 등전점 수치, 접합시험 등을 통하여 돼지의 분변으로부터 최종 10균주의 접합자를 얻었고 이들의 형별결정은 아미노산서열분석과 기준주와 대조등을 BCM Search Laucncher 및 NCBI blast를 통해 이루어졌다. 광범위 ${\beta}$-lactam 유형은 Klebsiella pneumoniae 8균주가 TEM-52형이었고 2균주 Escherichia coli가 SHV-12형이었다. CMY-1형은 본 연구에서 분리되지 않았다.
한약재(韓藥材) 중 폐렴(肺炎)의 치료효과가 기대되는 청열화담(淸熱化痰), 지해평천약(止咳平喘藥)을 중심으로 23종(種)의 약재(藥材)를 사용하여 폐렴(肺炎)을 유발하는 K.pnemoniae, S. pyogenes 및 S. pneumoniae 세균의 생육을 억제하는 약재(藥材)를 탐색하고, 탐색된 약재(藥材)의 추출물에 대한 세균의 최소생육억제농도(最小生育抑制濃度)를 측정하였다. 한약재(韓藥材)의 수용성(水溶性) 추출물 중 황련(黃連), 호황련(胡黃蓮), 패장(敗醬), 황금(黃芩)이 K. pneumoniae에서, 황련(黃連)이 S. pyogenes에 대해서 생육억제 효과가 있었으며, S. pneumoniae에 대한 비교저지환(比較沮止環)의 직경(直徑)은 황련(黃連), 오매(烏梅), 오미자(五味子), 황금(黃芩)쪽이 우수하였으나 황련(黃連) 추출물 사용시 병원균 모두에서 생육저지환(生育沮止環)의 크기가 가장 크게 나타났으며 대조군(對照群)으로 사용된 대장균(大腸菌)과 고초균(枯草菌)에서도 어느 정도의 항세균(抗細菌) 효과를 볼 수 있었다. 에탄올 추출물에서는 패장(敗醬), 황금(黃芩), 오미자(五味子), 오매(烏梅)가 K. pneumoniae 세균의 생육을 억제하였으며. S. pyogenes 세균은 황련(黃連), 황금(黃芩), S. pneumoniae 세균은 황련(黃連), 오미자(五味子), 오해(烏海), 마두령(馬兜鈴), 황금(黃芩)에 의하여 생육이 억제되어 황련(黃連)은 수용성(水溶性) 및 에탄올 용해성(溶解性) 추출물에서 모두 우수한 항세균(抗細菌) 효과를 보여주고 있다. 각 세균에 대한 최소생육저지농도(最小生育沮止濃度)(MIC)는 K. pneumoniae 세균일 경우 황련(黃連) 및 황금(黃芩)의 수용성(水溶性) 추출물과 오매(烏梅) 및 패장(敗醬)의 에탄올 용해성(溶解性) 추출물이 유의성을 보였으며, S. pyogenes 세균은 황련(黃連)의 수용성(受容性) 및 에탄올 용해성(溶解性) 추출물과 오매(烏梅)의 에탄올 용해성(溶解性) 추출물, S. pneumoniae 세균은 황련(黃連)과 오매(烏梅)의 수용성(水溶性) 및 에탄올 용해성(溶解性) 추출물에서 유의성이 나타났다. 이상의 결과를 통하여 황련(黃連), 오미자(五味子), 오매(烏梅), 황금(黃芩), 호황련(胡黃連), 패장(敗醬)의 수용성(水溶性) 및 에탄올 용해성(溶解性) 추출물이 폐렴(肺炎) 유발균(誘發菌) K. pneumoniae, S. pyogenes. S.pneumoniae에 대(對)하여 우수한 생육억제(生育抑制) 작용(作用)을 나타냄을 알 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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