As an opportunistic bacterial pathogen, Pseudomonas aeruginosa PAO1 contains two phenazine-producing gene operons, phzA1B1C1D1E1F1G1 (phz1) and phzA2B2C2D2E2F2G2 (phz2), each of which is independently capable of encoding all enzymes for biosynthesizing phenazines, including phenazine-1-carboxylic acid and its derivatives. Other previous study reported that the RpoS-deficient mutant SS24 overproduced pyocyanin, a derivative of phenazine-1-carboxylic acid. However, it is not known how RpoS mediates the expression of two phz operons and regulates pyocyanin biosynthesis in detail. In this study, with deletion of the rpoS gene in the $PA{\Delta}phz1$ mutant and the $PA{\Delta}phz2$ mutant respectively, we demonstrated that RpoS exerted opposite regulatory roles on the expression of the phz1and phz2 operons. We also confirmed that the phz1 operon played a critical role and especially biosynthesized much more phenazines than the phz2 operon when the rpoS gene was knocked out in P. aeruginosa. By constructing the translational reporter fusion vector lasR'-'lacZ and the chromosomal fusion mutant $PA{\Delta}lasR::lacZ$, we verified that RpoS deficiency caused increased expression of lasR, a transcription regulator gene in a first quorum sensing system (las) that activates overexpression of the phz1 operon, suggesting that in the absence of RpoS, LasR might act as an intermediate in overproduction of phenazine biosynthesis mediated by the phz1 operon in P. aeruginosa.
본 연구는 부위별 녹용 추출물이 PHZ 투여로 용혈성 빈혈을 유도한 흰쥐의 조혈작용에 대한 효과를 검증하고자 하였다. 4주령의 암컷 Sprague-Dawley 흰쥐에 PHZ 10 mg/kg을 4일간 미정맥 주사하여 용혈성 빈혈을 유발한 후 각 부위별 녹용 추출물 200 mg/kg을 일주일간 경구투여 하였다. 용혈성 빈혈 유발군인 PHZ군은 hemoglobin, hematocrit치, 적혈구수가 대조군에 비해 유의적으로 감소하였고, 망상적 혈구수는 유의적으로 증가하였다. 반면, 녹용 추출물 군에서 는 hemoglobin, hematocrit치, 적혈구수가 PHZ 투여군보다 증가하였다. 특히 분골, 상대, 중대 추출물 투여 시 유의성있게 증가하였다. 상대 추출물 투여군에서는 망상적혈구수 증가가 유의적으로 억제되었다. PHZ 투여로 증가된 혈청 EPO 함량은 녹용 추출물 투여군에서 모두 정상적으로 회복 되었다. Hemoglobin 합성에 관여하는 $\delta$-ALAD 활성은 녹용 추출물 투여군에서 활성이 증가되는 결과를 보여주었다. 따라서 녹용 추출물은 PHZ으로 유도한 용혈성 빈혈에 대한 바람직한 조혈효과가 있는 기능성 물질로 사료된다.
Objectives: This study was performed in order to investigate the anti-hemolytic effect of Chunghyuljihwang-tang(CHJHT, Qingxuedihuang-tang) on phenylhydrazine-induced hemolytic anemia in Rats. Materials and Methods: Hemolytic anemia model of rats were induced by phenylhydrazine(PHZ, 40mg/kg/day, i.p.) for 3days. Male Sprague-Dawley rats were divided into three groups for their treatment. Normal group was injected normal saline for 3 days with distilled water(d.w.) orally, control group was injected PHZ for 3 days with d.w. and CHJHT group was injected PHZ for 3 days with administration of CHJHT for 10 days. RBC(Red blood cell), Hb(hemoglobin), mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin, mean corpuscular hemoglobin concentration, reticulocyte were determined on day 0, 4, 7, 10. Body weight was investigated on day 0, 2, 4, 6, 8, 10 and the weight of spleen was measured on day 10. Results: For CHJHT group, the levels of RBC and Hb were significantly higher than control group on day 4, and the concentration of hemoglobin on day 7 was increased more than control group. Moreover, reticulocyte was significantly decreased on day 10 more than control group. These results could be concluded that CHJHT suppressed the hemolytic anemia by PHZ and improved hematological values of anemia earlier.
Park, Gwee-Kyo;Lim, Jong-Hui;Kim, Sang-Dal;Shim, Sang-Hee
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제22권3호
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pp.326-330
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2012
Antifungal metabolites were isolated from a culture of Pseudomonas aurantiaca IB5-10. Chemical structures of the metabolites were elucidated as phenazine-1-carboxylic acid (PCA; 1), 2-hydroxyphenazine (2-OH-PHZ; 2), and cyclo-(L-Pro-L-Val; 3), respectively, based on spectroscopic methods. Among them, 3 was isolated for the first time from this strain. The antifungal activities of 1-3 were evaluated against a variety of plant pathogens. To the best of our knowledge, the antifungal activities of 3 against plant fungal pathogens have been evaluated for the first time in this work. PCA (1) showed the most potent antifungal activities against Phytophthora capsici, Rhizoctonia solani AG-1(IA), and Pythium ultimum with MICs (${\mu}g/ml$) of less than 1.0, 1.3, and 2.0, respectively. On the other hand, 2-OH-PHZ (2) showed potent antifungal activity against R. solani AG-1(IA) with the MIC (${\mu}g/ml$) of 2.0, whereas it showed moderate antifungal activity against P. ultimum with the MIC (${\mu}g/ml$) of 50.0. In addition, 3 showed antifungal activity against only R. solani AG-1(IA).
참나물 (Pimpinella brachycarpa)의 엽병 (petiole)절편체로부터 캘러스가 MS배지 (0.5mg/L 2,4-D와 0.1mg/L BAP)에서 유도되었으며 이들 캘러스로부터 치밀하게 배열된 세포집단(cell cluster)을 선발하여 현탁배양하였다. 이들 현탁배양세포들은 0.1 mg/L NAA가 포함된 MS고체배지에 배양되어 배발생 (embryogenic) 캘러스로 성장하였다. 배발생캘러스는 연한 노란색을 띠며 체세포배로 분화되었으며 이들 체세포배는 MS액체배지에서 발아되어 식물체로 성장하였다. 참나물 현탁배양세포 유래 배발생캘러스로부터 분리한 mRNA로부터 cDNA library를 합성하여 PCR을 수행한 결과 제조된 library의 삽입절편의 크기가 대부분 500bp이상임을 확인하였다. 이들 cDNA library로부터 전체 1.5 $\times$$10^{6}$개의 plaque를 혼성화하여 일차의 screening을 통해 19개의 cDNA clone을, 이차의 screening을 통해 5개의 cDNA clone을 얻었으며 이중 4개의 cDNA clone은 참나물 shoot의 HD-Zip 유전자인 Phz4 유전자와 동일한 약 1.4 kb 정도인 것으로 나타났으나, 1개의 cDNA clone, Phc5는 약 1.5kb정도의 크기를 나타내었다. 1.5kb인 Phc5는 Phz4유전자의 5'쪽으로 163bp의 염기가 추가로 발견되어 총 1,531 bp에 해당하였으며 18개의 polyA tail을 가지고 있었다. Phc5는 284번째에 ATG개시코돈이 있고 302개의 아미노산을 암호화하는 906개의 단백질 암호화 부위와 Homeodomain을 갖고 있었다. Phc5로부터 추정된 단백질은 기존 전사조절자에서 많이 보고된 HD의 구조적 특징을 갖고 있었다.
광 공진기내에 음향광학소자(AOM)를 사용하여 FSF(Frequency-shifted feedback) 레이저를 개발하였다. 공진기는 1차 회절광에 의한 feedback loop로 구성된다. FSF 레이저 출력은 수백 PHz/s의 초고속 주파수 chirp을 갖는“chirped frequency comb”이라 불리는 주파수 출력을 보여준다. FSF 레이저를 광원으로 광거리 계측에서는 chirped 주파수 comb을 이용하여 거리를 알 수 있다.
Objectives : This study was performed in order to investigate the effect of Panax notoginseng(SCG) on phenylhydrazine (PHZ)-induced hemolytic anemia in rats. Materials and Methods : Rats were divided equally into 3 groups (Normal, Control, SCG). Anemic model rats (Control, SCG) were induced by the treatment of PHZ (40mg/kg/day, i.p.) for 3 days. Red blood cell, hemoglobin, reticulocyte count, mean corpuscular volume, mean corpuscular hemoglobin, and mean corpuscular hemoglobin concentration were determined on days 0, 4, 7 and 10. Body weight was investigated on days 0, 2, 4, 6, 8, 10 and weight of spleen was measured on day 10. Results : In the SCG group, significantly higher levels of RBC was found on day 4 and higher concentration of Hb on days 4, 7 and 10. Furthermore, reticulocyte count was dramatically lower on day 10 compared to the control group. Conclusions : These results suggest that SCG may be beneficial in the treatment of hemolytic anemia.
As a global regulatory gene in Streptomyces, afsR can activate the biosynthesis of many secondary metabolites. The effect of afsR on the biosynthesis of a phenazine metabolite, lomofungin, was studied in Streptomyces lomondensis S015. There was a 2.5-fold increase of lomofungin production in the afsR-overexpressing strain of S. lomondensis S015 N1 compared with the wild-type strain. Meanwhile, the transcription levels of afsR and two important genes involved in the biosynthesis of lomofungin (i.e., phzC and phzE) were significantly upregulated in S. lomondensis S015 N1. The optimization of metal chlorides was investigated to further increase the production of lomofungin in the afsR-overexpressing strain. The addition of different metal chlorides to S. lomondensis S015 N1 cultivations showed that CaCl2, FeCl2, and MnCl2 led to an increase in lomofungin biosynthesis. The optimum concentrations of these metal chlorides were obtained using response surface methodology. CaCl2 (0.04 mM), FeCl2 (0.33 mM), and MnCl2 (0.38 mM) gave a maximum lomofungin production titer of 318.0 ± 10.7 mg/l, which was a 4.1-fold increase compared with that of S. lomondensis S015 N1 without the addition of a metal chloride. This work demonstrates that the biosynthesis of phenazine metabolites can be induced by afsR. The results also indicate that metal chlorides addition might be a simple and useful strategy for improving the production of other phenazine metabolites in Streptomyces.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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