Mycobacterium tuberculosis (Mtb) is an etiologic pathogen of human tuberculosis (TB), a serious infectious disease with high morbidity and mortality. In addition, the threat of drug resistance in anti-TB therapy is of global concern. Despite this, it remains urgent to research for understanding the molecular nature of dynamic interactions between host and pathogens during TB infection. While Mtb evasion from phagolysosomal acidification is a well-known virulence mechanism, the molecular events to promote intracellular parasitism remains elusive. To combat intracellular Mtb infection, several defensive processes, including autophagy and apoptosis, are activated. In addition, Mtb-ingested phagocytes trigger inflammation, and undergo necrotic cell death, potentially harmful responses in case of uncontrolled pathological condition. In this review, we focus on Mtb evasion from phagosomal acidification, and Mtb interaction with host autophagy, apoptosis, and necrosis. Elucidation of the molecular dialogue will shed light on Mtb pathogenesis, host defense, and development of new paradigms of therapeutics.
연구배경 : 급성 폐손상에서는 호중구가 조직손상에 중요한 역할을 하는데 호중구는 외부자극에 의해 단핵식세포에서 분비되는 여러 화학주화인자에 인하여 국소염증부위로 이동하며, 이중 대표적인 물질이 호중구에 비교적 특이적으로 작용하는 IL-8이다. IL-8은 호중구에 대한 주화작용외에 호중구 표면에 유착성 분자의 발현을 증가시키고 호중구 자체를 활성화 시키는 등 직,간접적으로 염증반응에 관여한다. 그러나 아직까지 급성폐손상의 표본인 성인성 호흡곤란증후군의 가장 흔한 원인인 내독소에 의한 단핵식세포에서 IL-8의 분자생물학적 조절기전에 대한 연구는 많지 않은 설정이다. 방법 : 정상인의 페포대식세포와 말초혈액 단핵세포를 분리하여 내독소에 의한 IL-8 mRNA 발현양상을 관찰하기 위하여 내독소의 여러 농도와 배양시간에 따라 IL-8 mRNA에 대한 Northern blot analysis를 시행하였다. 내독소에 의한 IL-8 유전자 발현의 분자생물학적 조절기전을 규명하기 위해 actinomycin D와 cycloheximide로 전처치한 후 내독소에 의한 IL-8 mRNA와 배양액에서 면역반응성 IL-8을 측정하기위해 각각 Northern blot analysis와 ELISA를 시행하였다. 결과: 1) 폐포대식세포와 말초혈액 단핵세포 모두에서 내독소에 의한 IL-8 mRNA의 발현은 내독소 1 ng/ml의 농도에서부터 증가되었으며 내독소 농도의 증가에 따라 증가되었다. 또한 내독소에 의한 IL-8 mRNA의 발현은 내독소 투여 2시간후부터 증가되기 시작하여 24시간까지 지속되었으며 폐포대식세포에서는 8시간, 말초혈액 단핵세포에서는 4시간에 각각 정점을 이루었다. 2) actinomycin D는 페포대식세포와 말초혈액 단핵세포 모두에서 IL-8 유전자 발현을 mRNA와 단백질 수준에서 억제시켰다. 3) cycloheximide는 폐포대식세포와 말초혈액 단핵세포 모두에서 IL-8 유전자 발현을 단백질 수준에서는 억제시켰으나 mRNA발현은 폐포대식세포에서는 약간 증가 시켰고 말초혈액 단핵세포에서는 약간 억제시켰다. 결론 : 폐포대식세포와 말초혈액 단핵세포 모두에서 내독소에 의해 IL-8 mRNA의 발현과 IL-8 단백의 분비가 증가되었는데 이는 일부 전사이전 수준에서 (pretranslational level) 조절되며 폐포대식세포에서는 de novo 단백합성과는 관계가 없고 불안정한 억제인자 (labile repressor)의 조절을 받고 있고 말초혈액 단핵세포에서는 지속적인 de novo 단백합성이 중요할 것으로 생각된다.
전신마취제인 케타민은 흥분성 아미노산의 활성을 방해하는 N-methyl-D-aspartate (NMDA) 수용체의 비경쟁적인 길항제이다. 본 연구는 개 말초혈액 백혈구의 순간산소과소비현상(Oxidative burst activity; OBA)에 있어서 케타민의 효과를 검토하였다. 탐식세포의 OBA는 유세포 분석기로 분석하였다. 케타민을 말초혈액 다형핵백혈구(peripheral blood polymorphonuclear cells; PMN)와 monocyte-rich cells에 직접처리 하였을 때는 OBA가 감소하였으며, 또한 케타민을 처리한 말초혈액 단핵구세포(peripheral blood mononuclear cells; PBMC) 배양상층액에 의해서도 PMN과 monocyte-rich cells의 OBA가 감소하였다. 그러나 케타민을 처리한 PMN 배양상층액에 의해서는 탐식세포의 OBA에 있어서 아무런 변화가 없었다. 하지만 이러한 OBA의 감소는 latex beads를 넣어 탐식반응이 일어날 때만 측정되었다. 이상의 결과로부터 탐식반응이 일어나는 동안 케타민은 호중구와 단핵구와 같은 개 말초혈액 탐식구의 OBA에 있어 억제효과를 나타내었다.
돼지 말초혈액 탐식세포(PMN 및 monocyte)의 탐식성에 있어서 CLA 이성체의 탐식증강 효과를 검토하였다. 탐식세포의 탐식석은 fowl cytomery로 분석하였으며 결과는 다음과 같다. 1. CLA 이성체(CLA mixture, 10t-12c CLA, 9c-11t CLA, 9c-11c CLA, 9t-11t CLA)를 직접 첨가하여 배양한 PMN과 PBMC 및 fowl cytometry cytograpy에서 세포크기에 의해 분획한 monocyte-rich fractiondpsms 탐식증강 효과가 없었다. 2. 각각의 CLA 이성체로 배양한 PBMN 배양상층액으로 PBMC의 탐식활성을 측정한 결과 증강효과는 관찰되지 않았다. 3. CLA 이성체로 배양한 PBMC 배양상층액 중 CLA mixture, 10t-12c CLA, 9c-11c CLA 처리군에서는 PMN과 monocyte-rich fraction의 탐식활성에 있어서 현저한 증강효과가 관찰되었다. 그러나, 말초혈액 탐식세포들은 9c-11c CLA와 9t-11t CLA로 배양한 PBMC 배양상층액에 의해서는 증강효과가 나타나지 않았다. 4. CLA 이성체로 배양한 PMN 배양상층액에 있어서는 PMN과 monocyte-rich fraction의 탐식성을 측정한 결과, 어느 경우에도 증강효과는 나타나지 않았다. 이상의 결과로부터 CLA 중 CLA mixture, 10t-12c CLA. 9c-11t CLA가 돼지 말초혈액 탐식세포에 대하여 탐식증강효과를 가지고 있으며 이러한 증강효과는 직접적이라기보다는 CLA에 의해 활성화된 단핵구세포에서 분비되는 탐식촉진인자를 함유한 가용성 물질에 의해 autocrine 또는 paracrine 양상으로 탐식세포에 작용하는 것으로 생각되었다.
Sang-chul, Han;Ji-houn, Kang;Sung-mok, Son;Chung-soo, Chung;Chul-young, Lee;Mhan-pyo, Yang
한국임상수의학회지
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제20권4호
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pp.437-442
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2003
CLA를 급여시킨 돼지에 있어 말초 혈액 세포의 변화와 탐식세포의 탐식반응을 조사하였다. 100일령, 평균체 중 80kg인 거세 수퇘지에게 10t-l2c CLA와 CLA mixture를 각각 사료 중에 5% 첨가하여 총 4주간에 걸쳐 자유급여 시켰다. 급여 전 (0주), 급여 2주후, 4주후 그리고 급여 중지 후인 5주차에 각각 혈액세포 수치(PCV 백혈구수 및 백혈구 감별계산치)의 변화와 탐식세포의 탐식활성을 측정하였다. CLA의 급여 따른 PCV의 수치에 있어서는 아무런 변화가 없었다. 그러나 10t-l2c CLA 또는 CLA mixture가 함유된 사료를 급여한 돼지에 있어서 CLA를 급여하지 않은 돼지에 비해 백혈구수 특히 호중구 수가 현저히 증가하였다. 말초혈액 단핵구세포(mononuclear cells; MNC)와 다형핵백혈구(polymorphonuclear cells; PMN)의 탐식능를 유세포분석기로 분석한 결과, 10t-l2c CLA 또는 CLA mixture 급여와 상관없이 MNC와 단구세포들(monocyte-rich cells)의 탐식능에는 변화가 없었다. 그러나 PMN의 탐식 활성은 CLA 무급여 대조돼지들에 비해 CLA 급여군은 2주에서 5주차에 걸쳐 증가된 탐식능를 나타내었다. 이상의 결과로부터 돼지에 CLA 급여는 호중구수 증가와 호중구 탐식능 증가를 유도할 수 있음을 제시하였으며 향후 생체방어 증강을 위해 CLA를 임상적으로 투여할 수 있을 것으로 보인다.
The aim of this study is to determine the phagocytosis-promoting factor(s) for feline peripheral blood polymorphonuclear cells (PMN) by culture supernatant from mono-nuclear cells (MNC) treated with egg white derivatives (EWD). The phagocytic activity of PMN was analyzed by a flow cytometry system. The EWD did not show direct effect on the phagocytic response of PMN. The phagocytic activity of PMN was enhanced by culture supernatant from MNC but not PMN treated with EWD. Therefore, it was suggested that the enhanced phagocytic activity of feline PMN could be mediated by humoral factor(s) released from MNC treated with EWD. Thus, the phagocytosis-promoting factor(s) in supernatant fraction from MNC culture treated with EWD were isolated by reverse phase high pressure liquid chromatography. The resulting supernatant fraction on 29.02 minutes of retention time showed high phagocytic activity of PMN. The molecular weight of this supernatant fraction was 16 to 18 kDa when analyzed by capillary electrophoresis. The isoelectric point was pH 5.76 when assessed by ion-exchange chromatography. These results suggest that EWD stimulates feline MNC to elaborate a phagocytosis-promoting factor, 16 to 18 kDa of molecular weight, which could be an important mediator for the enhancement of phagocytic activity of feline peripheral blood phagocytes. Further study will be needed to elucidate this phagocytic factor.
As known by other name(natural immunity), the innate immune system comprises all those mechanisms for dealing with infection that are constitutive or built in, changing little with age or with experience of infection. Though in some ways less sophisticated than adaptive immunity, innate immunity should not belittled, since it has evidently protected thousands of species of invertebrates sufficiently to survive for up to 2 billion years. In the innate immune system, molecules of both cellular and humoral types are involved, corresponding to the need to recognize and dispose of different types of pathogen, to promote inflammatory responses and to interact to the adaptive immune system. A major features of innate immunity are the presence of the normal gut flora, complements, macrophages, dendritic cells, natural killer cells and many cytokines that can block the establishment of infection. Both phagocytic cells and complement system have tremendous potential for damaging host cells, but fortunately they are normally only triggered by foreign materials, and usually most of their destructive effects are focussed on the surface of these or in the safe environment of the phagolysosome. This article addreses the comprehensive mechanisms of the major components of the innate immune system to prevent the infection.
Olive flounder immunoreceptor DAP10 homologue cDNA was cloned from a peripheral blood lymphocytes (PBLs) cDNA library. The length of the olive flounder DAP10 cDNA is 473bp and it contains an open reading frame of 234bp. The predicted polypeptide sequence is 78 amino acids, consisting of a 22-amino acid leader, an 11-amino acid extracellular domain, a 21-amino acid transmembrane segment, and a 24-amino acid cytoplasmic domain. The amino acid sequence of olive flounder DAP10 has 56%, 50%, 32%, 31%, and 31% sequence identity with zebrafish DAP10, catfish DAP10, cattle DAP10, rat DAP10 and Monkey DAP10, respectively. Olive flounder DAP10 has a conserved aspartic acid in the transmembrane domain and a phophatidylinositol-3 kinase-binding site (YxxM/V) in the cytoplasmic region. Genomic organization reveals that olive flounder DAP10 comprises five exons and four introns. A phylogenetic analysis based on the deduced amino acid sequence grouped the olive flounder DAP10 with other species DAP10. In RT-PCR analysis, DAP10 transcripts were detected predominantly in PBLs, kidney, spleen and intestine.
The aims of this study were investigated the antitumor effects and immunological activities of lipopolysaccharides (LPS) extracted from Proteus vulgaris RH-90 toward sarcoma-180 cells. LPS extracted from Proteus vulgris RH-90 was irradiated with gamma ray for detoxification. The tumor incidence of sarcoma-180 occurs all group which injected with gamma ray irradiated LPS and tumor of sarcoma-180 was necrotized with breeding in the injected group of l0$\mu\textrm{g}$ LPS. The inhibition ratio of tumor growth showed at the highest level of 60.88% when 5$\mu\textrm{g}$ gamma ray irradiated LPS was injected into mice. The prolongation ratio of life showed 20.72% when injected into mice with gamma ray irradiated LPS of 5$\mu\textrm{g}$. In the effect of immunological activity, the number of circurating leucocyte and peritoneal exudate cells were increased significantly in the treatment group than that control group, and dose-dependent response indicated by the increase of weights of immunorgans which revealed the improvement of immunity. The effect of macrophage on phagocytes, there were not found the differences between phagocytic and corrected phagocytic index.
This study was performed to determine the optimal dose of laser energy for wound healing. The skin wound with 8mm diameter was induced over the lumbar vertebrae of the rats, and wound squares, scab hardness, hematologic findings and histopathlogic findings according to irradiation of laser energy were studied. 1. Wound square was significantly reduced at Day 1 (p<0.01), 2 (p<0.01), 3 (p<0.05), 7 (p<0.01) and 8 (p<0.05), respectively in experimental groups, especially group II, compared with control group. 2. Scab hardness was significantly increased at Day 1 (p<0.01), 2 (p<0.01), 3 (p<0.05), 5 (p<0.01) and 7 (p<0.01), respectively in experimental groups, especially group II, compared with control group. 3. In hematological findings, red blood cells and white blood cells in experimental group were increased according to the lapse of days, but they were not significant. 4. In histopathologic findings, experimental groups, especially group II, revealed early scab formation, early appearance of phagocytes and fibroblast, rapid growth of granulation tissue and collagen, and promotion of wound healing in the result.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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