• KSBB Journal
• /
• 제18권4호
• /
• pp.255-260
• /
• 2003

현재는 재조합 Erythropoietin의 생물학적 활성을 mouse를 이용한 in vivo bioassay로 실시하고 있으나, 이 방법의 여러가서 불편함으로 인하여, 이를 대체하기 위해 Ba/F3 세포주를 이용한 in vitro assay 방법을 확립하였으나, 위에 상술한 바와 같이 in vitro assay는 erythropoietin의 당분포에 의한 차이를 보이지 않게 때문에, 이를 보완하기 위해서는 in vivo bio-activity와 정량적인 상관관계가 있는 당단백질의 isoform 분석법인 Capillary zone electrophoresis (CZE) 와 sialic acid 함량 결과를 동시에 분석해야 했다. 위의 결과 sialic acid 함량은 erythropoietin 원액에서 10 mol/mol,EPO 이상의 sialic acid 함량을 가져야 되며, CZE 결과는 재조합 erythropoietin이 isoform 분포가 isoform 3의 경우 5.594～0.593％, isoform 4의 경우 31.598～11.704％, isoform 5의 경우 37.033～29.301％, isoform 6의 경우 27.837～18.807％, isoform 7의 경우 17.085～7.824％, isoform 8의 경우 7.642～1.964％을 보여줌과 동시에 isoform 4의 면적은 isoform 5의 면적보다 항상 작아야한다. 이상 두 가지 시험결과와 in vitro assay 결과를 combine해서 in vivo assay를 대체할 수 있다는 좋은 실험적 data를 얻었으므로 이상 위의 3가지 분석법을 활용한 combined in vitro bioassay 법의 기초를 확립하였다.

• Journal of the Korean Statistical Society
• /
• 제19권1호
• /
• pp.71-79
• /
• 1990

In the linear model which consider both the multivariate parallel-line bioassay and the multivariate linear calibration, this paper presents a Bayesian procedure which is an extension of Hunter and Lamboy (1981) and has several advantages compared with the non Bayesian techniques. Based on the methods of this article we discuss the effect of multivariate calibration and give a numerical example.

• Archives of Pharmacal Research
• /
• 제21권1호
• /
• pp.67-69
• /
• 1998

Three TNF-$\alpha$inhibitory lignans were isolated from the flower buds of Magnolia fargesii through bioassay-guided isolation. They were identified as eudesmin, magnolin and lirioresinol-B dimethylether on the basis of their spectroscopic data. All three lignans showed inhibitory effects on TNF-$\alpha$ production in LPS-stimulated murine macrophage cell line, RAW264.7 and eudesmin showed the strongest activity ($IC_{50}=51{\mu}M)$.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
• /
• 제10권6호
• /
• pp.349-354
• /
• 2006

The aromatic hydrocarbon receptor (AhR) is a ligand-activated transcription factor that mediates many of the biological and toxicological effects of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD, dioxin) and related chemicals. The application of recombinant reporter plasmid such as the firefly luciferase gene has proven to be a very effective method to detect these chemicals. The bioassay system, CALUX, is sensitive in directly detecting AhR-agonists from a variety of environmental and biologic materials. However, responses of the AhR-dependent bioassays are dependent on the cell types used. Thus, we developed a sensitive bioassay using the recombinant mouse hepatoma cell (Hepa1c1c7) for the determination of dioxins. The recombinant cell line was stably transfected with firefly luciferase reporter gene (pGudLuc1.1). The transfected cells showed the highest induction of luciferase activity at 4.5 hr and a decrease beyond this time point. The system showed the highest sensitivity of detection ever reported. Upon TCDD exposure cells showed 2 fold increase at 10 pM and 7 fold increase at 100 pM, respectively. The passage number after the transfection played an important role in the sensitivity. The increase of passage number tended to increase the sensitivity of the cells up to 15. The media without phenol red showed a higher induction rate than with phenol red, suggesting the preferable use of phenol red-free media for the bioassay. Since each of the assays has unique characteristics that make them suitable for some screening applications and not others, development of sensitive bioanalytical methods based on a variety of cellular systems in a key to the successful determination of dioxins. The bioassay system developed in this study will contribute to further development of successful screening the AhR agonists among the environmental mixture. In addition, the rapid and sensitive nature of this cellular system can be applied as a valuable tool to screen the dioxin-like moieties among the prodrugs at the initial stage, thereby expediting the new drug discovery.

• 한국자원식물학회지
• /
• 제27권5호
• /
• pp.401-414
• /
• 2014

기존의 HPLC 분석법에 활성을 접목시킨 실시간 분석법을 활용한 새로운 표준화 방법을 시도하였다. 항산화, 항염증, 항암작용을 포함한 다양한 생리 활성을 가지고 있는 한약재인 감초를 대상으로 산지가 다른 아홉 종류의 감초 추출물을 시료로 하여 분석을 실시한 결과 영주산 감초에서 라디칼 소거능이 가장 우수하게 나타났으며 실시간 활성 측정법에 의해 세 개의 활성 peak가 확인되었다. 이를 대상으로 크로마토그래피를 실시하여 세 개의 활성 피크의 물질을 각각 dehydroglyasperin C, dehydroglyasperin D, isoangustone A로 동정하였으며 감초의 항산화 지표 성분으로 설정하였다. 실시간 활성 분석법에 대한 validation을 수행한 결과 다른 물질과의 간섭이 없는 특이성, 상관계수 0.99~1.00의 직선성, 일내와 일간 정밀도의 RSD 값이 2% 이내의 정밀성 갖으며, 회수율 98~100%의 정확성을 보여 이 분석방법에 대한 신뢰도와 재현성이 검증되었다. 특히, 실시간 활성측정법은 활성 물질의 정성 및 정량분석을 동시에 측정할 수 있어 빠른 시간내 효과적으로 시료를 비교 분석할 수 있는 장점을 가지고 있다. 결과적으로 ABTS를 이용한 라디칼 소거능을 접목시킨 실시간 활성 분석법은 활성을 기반으로 한 천연물 소재의 표준화 연구 접근법 중의 하나로 유용하게 사용될 것으로 기대된다.

• 생명과학회지
• /
• 제16권6호
• /
• pp.919-924
• /
• 2006

다양한 독성물질 및 이들의 대사산물의 효율적인 생물독성 평가시스템이 지속적으로 개발되고 있다. 본 연구에서는 대분비계 교란물질인 endosulfan, bisphenol A, vinclozolin 및 3,5-dichloroaniline을 대상으로 인간 간암세포주, 지렁이, 효모를 이용한 세포독성 및 성장억제 효과를 평가하였다. 인간 간암세포주 독성평가에서는 endosulfan, 3,5-dichloroaniline, bisphenol A의 순으로 독성이 나타났으며, 지렁이 독성평가에서는 endosulfan, bisphenol A, 3,5-dichloroaniline의 순으로 독성이 나타났다. 효모를 이용한 독성평가에서는 3,5-dichloroaniline, endosulfan, bisphenol A의 순으로 독성이 나타나 다른 시스템과는 부분적인 차이가 나타났으며, vinclozolin의 경우 3가지 독성평가 시스템에서 모두 독성이 나타나지 않았다. 이러한 결과는, 동일한 물질을 서로 다른 생물 독성평가 시스템을 사용하여 평가하는 경우, 부분적인 오류가 나타날 수 있음을 암시하고 있으며, 독성 유무 판단은 가능하더라도, 독성 정량평가 및 독성 정도를 비교하는 것은 어렵다는 것을 제시하고 있다. 또한 본 결과는, 다양한 물질 및 이들의 대사산물의 일차적 독성평가에는 지렁이 및 효모시스템이 빠르고 경제적임을 암시하고 있으며, 독성이 인정될 경우 인간세포주 및 동물시험에 의한 검증이 효율적이라고 판단된다.

• 한국약용작물학회지
• /
• 제27권3호
• /
• pp.208-217
• /
• 2019

Background: In the present study, we identified two cytotoxic compounds from the root of Rumex crispus L. using a bioassay-based method. Methods and Results: Compared with the other fractions, the diethyl ether ($Et_2O$) fraction of R. crispus root extract exhibited the strongest of 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical-scavenging effect [scavenging concentration 50% $(SC_{50})=63.8{\pm}1.47{\mu}g/m{\ell}$], nitric oxide (NO) production inhibitory effect on the mouse macrophage cell line RAW264.7 [inhibitory concentration 50% $(IC_{50})=60.9{\pm}7.52{\mu}g/m{\ell}$] and cytotoxicity effect on the human hepatoma cell line, HepG2 [lethal concentration 50% $(LC_{50})=115.4{\pm}1.86{\mu}g/m{\ell}$]. According to the bioassay-based method, two cytotoxic compounds were purified from the $Et_2O$ fraction by using column chromatography and preparative high performance liquid chromatography (prep-HPLC). These two compounds were identified as parietin and chrysophanol by using nuclear magnetic resonance (NMR) and liquid chromatography quadruple time of flight mass spectrometry (LC-QTOF-MS). In addition, both parietin and chrysophanol exhibited a cytotoxicity effect on HepG2 cells, their $LC_{50}$ values were $169.1{\pm}17.67{\mu}M$ and $111.5{\pm}6.62{\mu}M$, respectively. Conclusions: Parietin and chrysophanol isolated from the $Et_2O$ fraction of the R. crispus root extract showed cytotoxicity in HepG2 cell.

• Journal of Ginseng Research
• /
• 제48권2호
• /
• pp.171-180
• /
• 2024

Background: Epimers of ginsenoside Rg3 (Rg3) have a low bioavailability and are prone to deglycosylation, which produces epimers of ginsenoside Rh2 (S-Rh2 and R-Rh2) and protopanaxadiol (S-PPD and R-PPD). The aim of this study was to compare the efficacy and potency of these molecules as anti-cancer agents. Methods: Crystal violet staining was used to study the anti-proliferatory action of the molecules on a human epithelial breast cancer cell line, MDA-MB-231, and human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and compare their potency. Cell death and cell cycle were studied using flow cytometry and mode of cell death was studied using live cell imaging. Anti-angiogenic effects of the drug were studied using loop formation assay. Molecular docking showed the interaction of these molecules with vascular endothelial growth factor receptor-2 (VEGFR2) and aquaporin (AQP) water channels. VEGF bioassay was used to study the interaction of Rh2 with VEGFR2, in vitro. Results: HUVEC was the more sensitive cell line to the anti-proliferative effects of S-Rh2, S-PPD and R-PPD. The molecules induced necroptosis/necrosis in MDA-MB-231 and apoptosis in HUVEC. S-Rh2 was the most potent inhibitor of loop formation. In silico molecular docking predicted a good binding score between Rh2 or PPD and the ATP-binding pocket of VEGFR2. VEGF bioassay showed that Rh2 was an allosteric modulator of VEGFR2. In addition, SRh2 and PPD had good binding scores with AQP1 and AQP5, both of which play roles in cell migration and proliferation. Conclusion: The combination of these molecules might be responsible for the anti-cancer effects observed by Rg3.

• 한국유기농업학회지
• /
• 제18권4호
• /
• pp.573-586
• /
• 2010

제충국 수집 5계통의 특성 및 추출 부위와 방법에 따른 살충효과 검정을 점박이응애, 벼멸구, 목화진딧물에 시험한 결과는 다음과 같다. 제충국 수집계통 중 0706 계통만 소화성의 폼폰 타입이고 나머지는 모두 아네모네 타입이었으며, 4월 하순부터 7월 초순 까지 개화하였으나, 0721은 개화기간이 11월 하순까지 지속되었다. 수집계통에서 0706을 제외한 모든 계통이 국내 겨울철 월동이 가능하였으며, 0718과 0721 계통은 장마철 고온기에 습해 피해가 높았다. 제충국 계통의 꽃을 에탄올로 추출한 0718계통이 점박이응애에 대해 5일째에 63.8%의 높은 살비율을 나타내었다. 에탄올에 유화제를 혼합하면 에탄올 단독으로 살포한 것 보다는 5일째에 살비율이 더 높아져 69.4%의 살비율을 나타내었다. 물로 추출하면 에탄올이나 에탄올+유화제 추출보다 효과가 떨어져 낮은 살비율을 나타내었다. 제충국 잎을 용매별로 추출하였을때 꽃 추출물보다 살비율이 낮았다. 제충국 꽃에 대한 벼멸구의 살충율은 에탄올에 유화제를 첨가하면 5일째에 65.4%의 비교적 높은 살충율을 나타내었다. 제충국 꽃에 대한 목화진딧물의 방제효과는 초기에는 어느 정도 유지되었으나 진딧물의 산자수가 증가하는 특성으로 인해 시간이 경과할수록 살충율은 하락하였다.

• 생약학회지
• /
• 제39권4호
• /
• pp.347-351
• /
• 2008

The methanol (MeOH) extract of the rhizome of Alpinia officinarum Hance (Zingiberaceae) demonstrated a potent inhibition on the proliferation of cultured human tumor cell lines such as MES-SA (human uterine carcinoma cell line), MESSA/DX5 (multidrug resistant subline of MES-SA), HCT-15 (human colorectal adenocarcinoma cell line), HCT15/CL02 (multidrug resistant subline of HCT15). The MeOH extract was fractionated into four portions by serial solvent partition, ie., methylene chloride (CH2Cl2) soluble part, ethylacetate (EtOAc) soluble part, n-butanol (BuOH) soluble part and remaining water layer. Among them, the $CH_2Cl_2$ soluble part of the extract exhibited a most potent inhibition on the proliferation of tested tumor cell lines. Bioassay-guided fractionation of the $CH_2Cl_2$ soluble part led to the isolation of five diarylheptanoid and two flavonoid constituents, i. e., galangin (1), 7-(4"-hydroxy-3"-methoxyphenyl)-1-phenylhept-4-en-3-one (2), 1,7-diphenyl-5-hydroxy-3-heptanone (3), trans,trans-1-(3'-methoxy-4'-hydroxyphenyl)-7-phenyl-5-ol-4,6-dien-3-heptanone (4), 5-methoxy-7-(4"-hydroxy-3"-methoxyphenyl)-1-phenyl-3-heptanone (5), kaempferide (6), 5-hydroxy-7-(4"-hydroxy-3"-methoxyphenyl)-1-phenyl-3-heptanone (7). Structures of the isolated active components (1 - 7) were established by chemical and spectroscopic means.