진균성식물병을 생물학적으로 방제할 수 있는 미생물제제의 개발을 위하여 경북 지역의 저병해 경작지 토양에서 고추역병균 Phytophthota capsici과 시들음병균 Fusarium oxysporum에 강력한 길항능을 가지며 균주 상호간에 공생이 가능한 AY1, AY6, AB1, BB2, F4, 5종의 균주를 선발하였다. 이들의 P. capsici에 대한 길항기작은 모두 내열성 저분자의 항균성 항생물질 생산에 의한 것이었으며, 이 중 BB2균주는 항생물질 생산능뿐만 아니라 고추역병균의 세포의벽 가수분해효소인 cellulase도 생산하여 다기능 길항기작을 보유하고 있었다. 선발된 5종 균주는 Halobacterium sp. AB1, Xenorhadus sp. AY1, Bacillus sp. AY6, Bacillus sp. BB2, Zymomonas sp. F4로 각각 동정되었으며, 이들은 0.1% galactose, 0.1% $NaNO_2$, 5 mM $Na_2HPO_4$가 포함된 배지에서 pH 5.5의 조건에서 48시간 배양했을 때 길항물질 생산능이 매우 우수하였고, 이 배양액을 1톤 규모의 발효탱크에 접종하고 대량배양 후 복합 미생물제제로 생산하였으며, 생산된 시제품의 액상 미생물제제는 경북 영천지역의 농가의 시험포장에서 3일 간격으로 3회 처리 해 본 포장시험에서 오이덩굴쪼김병, 방울토마토시드름병의 방제와 시금치잘록병의 방제 및 생육촉진에 탁월한 효과가 있었다.
본 연구는 식품으로 사용하고 있는 유산균의 보존성과 안정성을 높이고, 맛과 시각적인 차별화를 주기 위한 방법으로 더블매트릭스 캡슐화에 대한 제조방법에 대하여 기술하였다. 일차캡슐화방법으로 5wt%의 슈크로스에스터를 이용하여 부드럽고 촉촉한 크림을 만들었다. 더블매트릭스캡슐화는 키토산과 아르긴산을 1:3의 비율로 혼합하여 제조하였을 때 가장 안정한 캡슐이 형성되었다. 더블매트릭스 캡슐입자의 크기는 지름이 3mm이었다. 유산균의 pH변화에 대한 활성은 산성($pH=4.3{\pm}0.3$)이나 중성($pH=7.12{\pm}0.2$)상태에서보다 알칼리성 ($pH=10.5{\pm}0.3$)에서 더욱 우수한 활성을 보였다. 1개월 경과 후에서도 살아있는 유산균의 활성을 확인할 수 있었다. 식품산업에 응용으로 요거트안에 유산균캡슐이 함유된 제형과 5가지의 색상을 입힌 더블매트릭스캡슐을 개발하였다. 이상의 결과로 볼 때, 유산균을 안정화시키는 방법의 하나의 도구로써, 더블매트릭스캡슐이 식품산업에 크게 기여할 것으로 기대된다. 더 나아가 의약품산업에서 인슐린 등의 캡슐화를 통한 약물전달시스템 (drug delivery system) 및 화장품산업에서의 활성성분의 안정화 기술에 응용이 가능할 것으로 기대한다.
내열성의 cyclomaltodextrin glucanotransferase (CGTase)를 이용하여 열에 안정한 싸이클린 텍스트린 (CD)을 생산하기 위하여 매우 높은 CGTase 활성을 보이는 고열성이며 호알카리성인 B-13세균을 분리하여 형태적, 생리학적 특성과 16S 리보솜 RNA 서열분석 등을 통하여 Bacillus cereus B-13으로 동정하였다. Bacillus cereus B-13 2% 가용성 전분, 1% 효모 추출물, 1% $Na_2CO_3$ 등을 함유하는 SYC 배지 (pH 8.5)에 접종하여 $50^{\circ}C$에서 24시간 배양하였을 때 최고의 CGTase 활성(130 U/ml)을 보였다. 또한 부분 정제된 CGTase의 작용 최적 온도와 pH는 각각 $60^{\circ}C$, pH 8.5-9.0 이었고 $80^{\circ}C$이하와 pH5.0-10.0에서 안정하였다. 1% 가용성 전분을 부분 정제한 CGTase와 작용시켰을 때 49%의 CD 수율을 보였다.
배양한 계배 근원세포의 융합기작을 밝혀보기 위해서 분화과정에 있는 근세포를 lactoperoxidase를 촉매로 써서 막표면단백질을 iodination하여 본 결과, 융합의 과정에서 막표면단백질의 정성적 및 정량적 변화를 볼 수 있었다. 융합전의 세포에서 12개의 주요단백질을 검출할 수 있었는데, 융합시의 세포에서는 165K와 93K의 단백질이 새롭게 나타났으며 동시에 245K 단백질의 감소와 저분자 단백질의 증가를 볼 수 있었다. 이 고분자 단백질의 감소는 세포주기와 관계가 있는 것으로 생각되고 있는 세포내 cAMP 수준은 융합에 앞서서 현저한 일시적인 증가를 보였는데, 이와같은 결과는 cAMP의 증가가 세포의 융합의 유발과 관계가 있음을 보여 주는 것이었으며, 분화하는 근원세포에서는 고도의 동조성이 보였다. 아울러, 근세포의 융합과정에서 적어도 4 가지의 iodination된 저분자 단백질을 배양액에서 발견할 수 있었는데, 이들은 막단백질의 가수분해산물로 생각되었고, 역시 세포의 융합과정과 유관할 것으로 추정되었다. 세포막 표면단백질의 변화, 분화과정 중에 배양액 속으로 방출되는 단백질, 융합과 유관한 cAMP의 증가 및 융합과 관련되는 외적 요인의 가능성에 관해서 논의하였다.
본 연구에서는 자연세포사 (apoptosis)를 유발시키는 것으로 알려진 ceramide를 배양중인 생쥐 과립세포에 처리한 뒤 형광염색, in-situ 3'-end labeling(ISEL), 그리고 flow cytometry 기법을 이용하여, 자연세포사 및 세포주기에 미치는 ceramide의 영향을 조사하였다. Ceramide를 처리하지 않은 대조군에 비하여, ceramide를 처리한 실험군에서 세로의 생존율은 농도에 비레하여 유의하게 감소하였다. 또한 acridine orange에 의한 형광염색 결과, 자연세포사의 양상을 보이는 핵을 갖는 세포의 수가 ceramide의 농도가 증가함에 따라 현저하게 증가되었다. 또한 ISEL을 실시해 본 결과, 자연세포사가 ceramide의 처리농도가 증가됨에 따라 점차적으로 증가되었다. 한편, ceramide를 처리한 과립세포의 세포주기 분석을 위한 flow cytometry 결과도 자연세포사가 일어난 $A_{0}$기에 있는 세포들의 비율이 대조군에 비하여 농도 의존적으로 증가하였으며, $G_{0}$/$G_{1}$ 기에 있는 세포들이 비율은 현저하게 감소됨을 관찰할 수 있었다. 위의 결과로 보아 ceramide는 생쥐 과립세포의 $G_{0}$/$G_{1}$ 기에 특이저긍로 자\ulcorner하여 자연세포사를 유발하며, 난포의 폐쇄시 과립세포의 자연세포사를 유발할 것으로 사료된다.
국가기본도는 국가공간정보의 기준이 되는 공간정보로서 그 가치와 역할이 매우 중요하다. 그러나 현행 국가기본도인 1/5,000 수치지도는 품질 및 정확도의 한계로 인하여 기초 공간정보로서의 역할을 충분히 수행하지 못하고 있는 실정으로 이에 대한 보완 방안이 필요한 시기이다. 이에 본 연구에서는 현 1/5,000 국가기본도의 고도화 방안을 제시하고자 GSD 0.25m 디지털 항공사진으로 제작 가능한 수치지도 지형 지물 항목을 선정하고, GSD 0.25m 디지털 항공사진을 이용한 최적 수치지도 제작 실험을 통해 수치지도 제작 최적 방법을 정립하였다. 또한 GSD 0.25m 디지털 항공사진으로 제작된 수치지도의 정확도 및 활용성 분석을 수행하였다. GSD 0.25m 디지털 항공사진을 이용한 수치지도 제작 기준을 정립하기 위하여 판독력 분석을 수행하여 대분류 9 개, 중분류 31개, 소분류 509개의 지형 지물 항목을 선정하였으며, 수치지도 제작 방법에 따른 수치지도 제작 실험을 수행하여 입체도화 방법을 수치지도 제작 최적 방법으로 선정하고, 최적 공정을 정립하였다. 본 연구 성과를 이용하여 GSD 0.25m 디지털 항공사진을 이용한 수치지도 시범 제작을 수행한 결과 기존 1/5,000 수치지도에 비해 약 2배의 수평 및 수직위치 정확도를 확보할 수 있었으며, 지형 지물의 상세한 묘사가 가능하여, GSD 0.25m 디지털 항공사진을 이용하여 국가기본도를 제작할 경우 신뢰성 있는 공간정보를 제공으로 대국민 서비스 만족도 향상과 국가기본도 고도화를 추진할 수 있을 것으로 판단된다.
Objectives : Regulatory T cells can reduce inflammation and allergic reactions through their inhibitory functions. Gardeniae Fructus(GF) is a Heat-clearing herb used in traditional Korean medicine, and a wide range of studies on its antiinflammatory effects are being carried out. The authors investigated the effect that Gardeniae Fructus has on regulatory T cells. Methods : The authors screened 14 herbs for their effects on regulatory T cells. 100mg of each herb were separately dissolved in 1ml of sterile saline and the supernatant was harvested after 10 minutes of centrifuge at 15,000 rpm. The supernatant was filtered through a 0.2 ${\mu}m$ syringe filter, and the resulting stock was refrigerated at $4^{\circ}C$. The stock was diluted before testing and used at a final concentration of $0.01{\mu}g/ml$. CD4+CD25+ T cells from healthy BALB/c spleens were used as natural regulatory T cells (nTreg), and CD4+CD25- T cells were used as reactive T cells. CD4+CD25+ and CD4+CD25- T cells were activated with anti-CD3e ($10{\mu}g/m{\ell}$)/anti-CD28 ($1{\mu}g/m{\ell}$) and cultured. IL-10 from supernatant of the culture medium was measured by IL-10 cytokine ELISA. The percentages, cell numbers, phenotype and function of CD4+CD25+ Treg cells were determined by flow cytometry. Results : Gardeniae Fructus was shown to be the most potent herb among the 14 herbs tested for suppressing CD4+CD25- reactive T cell proliferation by stimulating CD4+CD25+ natural regulatory T cells. Gardeniae Fructus induces IL-10 secretion increase by stimulating CD4+CD25+ natural regulatory T cells, and indirectly suppresses CD4+CD25- reactive T cell proliferation through increasing CD25 (IL-2 receptor $\alpha$) expression and thus promoting bonding with IL-2. Gardeniae Fructus did not directly affect CD4+CD25- reactive T cell proliferation. Conclusions : Gardeniae Fructus suppressed reactive T cell proliferation through inducing increases in IL-10 secretion and CD25 (IL-2 receptor $\alpha$) expression.
최근 많은 연구자들에 의해 무혈청 배양 체계에 대한 관심이 증가해가고 있다. 이러한 연구 동향에 대한 접근의 일환으로 GAGs의 첨가는 무혈청 배양 체계 확립의 가능성을 제시해 주었을 뿐만 아니라 수정란 이식에 있어서도 동질의 수정란을 공급할 수 있는 배양 체계 확립으로의 접근이 가능해졌다. 특히, 배양액에 혈청인자의 대체물질로 hyaluronic acid 0.1, 0.5, 1.0mg/$m\ell$의 첨가와 chondroitin sulfate 0.5mg/$m\ell$ 을 첨가하였을 때 혈청의 대체효과가 나타났는데, 이러한 결과를 통해 혈청인자 대신 GAGs를 첨가함으로써 기존의 포유동물의 체외배양에 있어 혈청 첨가에 의해 발생되는 세포 이상과 기형을 줄이고, 각 혈청 인자간에서 생기는 조성분의 차이를 줄이므로 생명 공학 연구의 기초적인 연구 자료가 될 뿐 아니라 수정란 이식에 있어 더욱 체계적이고 보편적인 배양 효과를 가져올 것으로 사료된다. 그러므로 더 나아가 GAGs의 다양한 조합을 통한 배양액 첨가와 시기별로 다른 순차적 (sequencial) 첨가에 의한 수정란의 발달에 대한 연구가 더 필요할 것으로 사료된다.
자연 감염된 담배가루이로부터 곤충병원성진균을 분리 동정하고, 이 균주에 대하여 배양특성, 자연발병 요인, 그리고 주요 온실해충인 담배가루이, 점박이응애, 대만총채벌레에 대한 살충력을 검정하였다. 분리 균주의 형태적 특성은 직립한 분생자병에 윤생으로 호리병 형태의 4-6개 phialide를 지녔고, 분생포자의 크기는 $3.0-3.4{\mu}m$ 이었다. 분리 균주의 rDNA의 ITS영역 염기서열 분석에서 Isaria fumosorosea (AF461747)와는 99%의 높은 염기서열 유사도를 보였다. Potato dextrose agar, Sabouraud maltose agar+yeast extract 그리고 Sabouraud dextrose agar+yeast extract 배지에서 IFs 균주는 $24^{\circ}C$의 SDAY 배양에서 균사 성장이 가장 양호하였으며, $15^{\circ}C$보다는 $35^{\circ}C$의 고온에서 균사 성장이 좋았다. I. fumosorosea IFs-08, -09 균주는 담배가루이에 대하여 각각 96.7, 93.9%의 높은 살충율을 보였으며, 점박이응애(92.0, 84.9%) 그리고 대만총채벌레(84.4, 81.5%)에서도 80-90%정도의 살충율을 보인 반면 KACC로부터 분양받은 Isaria tenuipes, Isaria farinosa, Isaria fumosorosea 균주들은 10-20% 내외의 낮은 살충율을 나타내었다.
In this study, the optimum conditions of fermentation were determined by isolating the microorganisms with the ability to bioconvert the Citrus peel flavonoid, and the effect of the fermented Citrus peel extract which was bioconverted on the oxidative damage of HIT-T15 cell was investigated. The Aureobasidium pullulans Y-12 was isolated and identified with the strains having bioconversion activity. The fermentation conditions for bioconversion activity were confirmed to be optimal when culturing for three days at $25^{\circ}C$, 150 rpm in a culture medium containing 5% Citrus peel power and 0.8% casitone. As a result of bioconversion, 32.8 mg/g and 21.5 mg/g of naringenin and hesperetin, which were aglycone flavones, were produced respectively. Also in the flavonoid content, it was confirmed that FCP produced 154.8 mg/g while CP produced 33.7 mg/g, thus producing more by approximately 4.6 times. As a result of treating FCP and CP after inducing the oxidative damage for HIT-T15 cell by treating the deoxy-D-ribose with $IC_{50}$ (38 mM) concentration, the surviving rate was recovered to 90% for FCP treatments in the 0.01 mg/mL concentration and for CP treatments in the 0.025 mg/mL concentration. Also in the insulin secretion rate, FCP treatments increased by 206% and CP treatments by 132% when treated in the 0.1 mg/mL concentration. As the bioconverted FCP can inhibit the oxidative damage of HIT-T15 cell in the low concentration, it was considered its usability as the functional material for prevention of the type 2 diabetes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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