조직배양을 통한 대량증식을 목적으로 구문초 (Pelalgonium citrosa)의 엽신, 엽병 및 정단분열조직을 auxin류와 cytokinin류의 생장조절제를 혼합첨가한 MS배지에 배양한 후 캘러스발생 및 shoot분화율을 조사하였고, 분화된 shoot는 NAA와 IAA가 단독첨가된 MS배지에 옮겨 뿌리분화율을 조사하였다. 생장조절제의 효과는 2,4-D와 kinetin의 혼용처리보다 NAA와 BA첨가배지에서 엽신, 엽병조직 모두 캘러스발생 및 multiple shoot분화가 양호하였다. 엽신조직의 경우 암배양 상태에서 캘러스와 shoot의 분화가 좋았고, 0.5 mg/L NAA와 BA 혼용배지에서는 정상적 민 shoot가 분화된 반면 NAA와 BA의 농도가 높을 경우 분화된 shoot는 vitrification현상이 비교적 많이 나타난다. Shoot는 캘러스를 통하거나 직접 절편체에서 분화되었는데 1개의 절편당 shoot분화수는 캘러스를 통해 분화된 경우가 훨씬 많았다. 엽보의 경우 캘러스발생 및 shoot분화양상은 엽신과 비슷하였으나 분화된 shoot수는 훨씬 적었다. 정단분열조직에서 캘러스증식율이 가장 좋았으며 shoot분화는 NAA와 BA 0.5mg/L첨가구에서 양호하여 대량증식에 가장 효과적인 반응이었다. Shoot로부터 뿌리발생은 1.0 mg/L NAA 첨가배지에서 가장 효과적이었다.
우리나라 자생식물인 산호수 (Ardisia pusilla DC)를 기내에서 대량증식하기 위하여 초대배양으로 산호수 경정을 MS, 1/2MS 배지에 BA와 TDZ의 농도를 달리하여 첨가된 배지에 치상하여 배양하였다. 무기염류를 달리한 배지와 생장조절물질 농도를 다르게 한 배지 중 1/2MS 배지에 BA 0.5mL가 첨가된 배지가 신초 수 7개 이상으로 증식이 양호하여 산호수의 초대배양에 적정배지로 나타났다. TDZ를 첨가한 배지에서는 캘러스형성이 과다하여 부정아 형성을 오히려 방해하여 BA 첨가배지보다 신초증식이 양호하지 못하였다. 신초의 증식을 위해 1/2 MS 배지에 BA 0.5 mg와 sucrose의 농도를 달리하여 첨가한 결과, sucrose 농도 20 g/L를 첨가한 배지에서 신초의 증식, 생장 및 다아체 형성이 양호하였다. 형성된 신초의 발근은 1/2MS 배지에 IBA, NAA를 각각 첨가한 배지를 사용하였는데 두 가지 옥신류에서 0.5 mg의 농도에서 신초의 생장과 발근이 양호하였다. 잎과 뿌리가 잘 발달한 유식물체를 원예용 상토에 옮겨 키웠을 때 모든 개체가 정상적인 형태로 성장하였다.
기관배양을 통한 대량증식 방법의 일환으로 액아배양을 이용한 multiple shoot 유도 조건을 조사하였다. 기내 배양 중인 식물체로부터 액아를 절취하여 TDZ와 BA를 각각 농도 별로 첨가한 MS배지와 1/2 MS배지에서 6주간 배양한 결과, MS기본배지에 $0.005\;mg{\cdot}L^{-1}$ TDZ가 첨가된 처리구에서 효과가 가장 양호하였다. 한편 발생된 신초를 $1\;mg{\cdot}L^{-1}\;GA_3$와 $0.5\;mg{\cdot}L^{-1}$ IBA가 첨가된 1/2 MS배지에 배양했을 때 뿌리의 발생과 신장이 가장 양호하였다. 발근된 식물체를 포트에서 순화시켜 온실로 이식하였을 때 90%에 가까운 생존율을 보였으며 형태적인 변이 없이 생장하였다. 이상의 결과는 액아유도를 통한 대량번식의 가능성을 제시한다.
대두의 재분화 체계를 확립하고자 품종별 shoot 형성률, 적정배지 및 적정조직을 구명하고자 하였다. 유묘의 조직부위별 비교에서는 1개의 자엽을 포함한 절에서 multiple shoot 형성률이 높았다. 기본배지에서는 1/2 B5배지가 효율적이었으며, TDZ 처리시에 multiple shoot 형성률이 높았으며, 처리농도는 2mg/L가 효율적이었다. Shoot 형성시 자엽 네 전분은 배양 1주까지 증가 후 감소하였으며, 수용성 당은 배양 2주까지 증가 후 shoot가 형성되는 배양 4주에는 관찰되지 않았다. 품종 간 비교에서는 품종에 따라 shoot 형성 양상이 구분되어, '흑청콩' 등 11품종에서는 multiple shoot 형성률이 높았고, '만리콩' 등 16품종에서는 pair shoot 형성률이 높았다. 자엽절에서 shoot가 형성되는 양상에 따른 조직화학적 관찰 결과 pair shoot의 경우 내생적으로 잠재한 액아에 의한 것이며, multiple shoot의 경우는 새로이 형성된 shoot로 확인되었다.
본 연구는 약용식물자원인 땅꽈리 유식물의 하배축 절편으로부터 부정아 형성을 통한 재분화를 조사하여 효율적인 재분화 조건을 확립하고자 하였다. 신초는 저농도 BAP를 함유하는 MS 배지에서 효과적으로 유도되었다. 신초 유도는 BAP 0.5~1.0 mg/L를 단독으로 또는 NAA 0.1~0.5 mg/L와 함께 처리한 MS 배지에서 활발히 이루어졌으며, 특히 BAP 1.0 mg/L가 포함된 MS 배지가 가장 효과적이어서 다발성 신초가 왕성하게 형성되었다. 유도된 신초를 뿌리 유도 배지로 옮겼을 때, 저농도의 NAA, IBA, IAA에서 뿌리가 잘형성되어 재분화 식물체를 만들어 내기에 적절하였다. 발근 수와 뿌리의 길이는 각각평균 2.0개, 8.0 cm 이상으로 높게 나타났다. 특히, 0.03 mg/L의 NAA, IBA, IAA를 포함한 MS 배지에서 뿌리가 더잘 성장하고, 뿌리의 전체적인 형태도 양호하였다. 그리고, 저농도의 NAA, IBA, IAA를 함유하는 MS 배지에서 새로운 신초의 형성도 잘 이루어져서, 줄기의 수가 2개 이상으로 많이, 그리고 길이는 6.0 cm 이상으로 길게 신장하였다. 배양토에 이식한 재분화 식물체는 100%의 생존율을 보였으며, 모두 정상적인 성체로 생장하였다. 따라서 땅꽈리의 부정아 형성을 이용한 재분화 식물체의 생산은 개체들을 대량 증식할 수 있어 균질한 조원료를 안정적으로 공급하는데 주요 수단이 될 것으로 보인다.
Leaf discs and apical meristems were cultured in Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with cytokinin and auxin at different concentrations. Callus production was observed in all tested media after six days of incubation. Callus produced in the presence of high concentration of NAA (2.0mg/1) was fragile in texture and yellow in colour. Highest callus formation was observed from leaf discs in the medium supplemented with 1.0mg/1 NAA and 0.5 mg/l BAP in dark at $25{\pm}1{\circ}C$. Percentage of callus formation was 95% and mean callus fresh weight was 654.88 43.53 mg. Shoots were induced from the callus after 4 weeks in 1/2MS medium supplemented with BAP and kinetin both at 0.5mg/1. When elongated shoots were separated and transferred into multiplication medium (MS+0.5mg/1 BAP+0.5mg/1 kinetin) multiplication rate was 6.4 after 6 weeks. Higher concentrations of BAP caused callus production at the base. Direct shoot induction was observed from apical meristems in MS medium in the presence of 0.175 mg/1 IAA + 2.25mg/1 BAP and 0.175 mg/1 IAA + 3.0 mg/1 BAP in 16 hour day at $25{\pm}1{\circ}C$. Explants (apical meristems) elongated to form a single shoot forming a callus at the base. Adventitious buds were sprouted out from the base. Percentage explants which producing shoots was 28.57 and 65.5 respectively. Multiple shoot induction was also observed in the same media. Highest multiple shoot production was observed in the presence of 0.175 mg/l IAA and 3.0mg/l BAP, Mean number of shoots per explant was 5.36 and the mean shoot length was $16.66{\pm}4.15$mm. Shoots (20 30m length) were tested for root induction. Excised shoots were transferred into rooting media, which contains different concentrations of NAA and IAA. Best rooting performance was observed in 1/2MS medium supplemented with 0.1mg/1 NAA after 10 days of incubation in 16 hr photoperiod at $25{\pm}1{\circ}C$. Mean number of roots per shoot was 6 and the mean root length was 252mm. Rooted plantlets were transferred into sterile coir dust:sand (1:4) mixture and maintained in a humid chamber for two weeks, They were gradually exposed to the natural environment. After three weeks they were transferred to pots containing coir dust:sand (1:2) mixture for further development where the 90% survival was observed.
마늘의 경정을 기내배양하여 대량의 기내종구를 생산하기 위한 다신초의 유기 및 기내구의 비대조건을 찾고자 배지의 당의 농도를 다르게 하고 또한 생장조절물질을 첨가하여 신초의 대량발생 여부를 확인하였으며, 대형배양용기를 이용하여 대량생산을 하기 위한 tank배양에서 신초의 분화와 기내구의 발달에 관하여 검토하였다. 경정배양에서의 shoot 발생이나 기내구 형성 모두 3% sucrose 첨가 MS고체배지에서 8% 보다 양호하였으며, 생장조절물질의 효과는 2 mg/L 2iP와 0.2 mg/L IAA의 혼합처리에서 shoot 발생과 bulb의 형성수가 양호하였다. 이 처리구에서 발생한 shoot와bulb의 수는 각각 3.3 및 2.7개로 나타났다. 다신초를 유도할 수 있는 조건의 배지에서 경정을 2개월 동안 배양하여 다신초를 분화시킨 후, 20 L water tank를 이용하여 sucrose 농도를 3%와 8%로 설정한 MS액체배지에 옮겨 45일간 배양한 후에 bulb형성을 조사하였을 때 유식물체의 생육에 있어서는 3% sucrose 첨가조건에서 8% 첨가배지보다 양호하였다. 그러나 기내구의 형성이나 생장에 있어서는 sucrose의 농도가 8%일 때 보다 효과적이었다. 경정배양에서의 다신초의 초기생산에는 3% sucrose조건에서 양호한 효과를 보이고 있으므로 마늘의 인경구를 대량으로 생산하기 위해서는 다신초의 생산과 구비대 과정을 구분하는 2단계 배양법을 도입하는 것이 유리할 것이다. Tank배양시 배지에 0.2 mg/L BA, 0.02 mg/L NAA를 첨가한 처리에서 양호하였으며 NAA 농도가 높을 수록 유식물체의 생육이나 구비대의 효과는 현저하게 저하되었다.
Plants of the genus Taraxacum are well-known as a traditional herbal remedy with a long history, and they have also been extensively used as food, chemicals and cosmetics. In this study, four Taraxacum species distributed in Korea (T. mongolicum, T. officinale, T. mongolicum variation and T. officinale variation) were utilized for an efficient method for direct multiple shooting induction and regeneration, using leaf blade, transition zone, petiole and root as explants in MS media with various hormone concentration and combination. MS medium containing IAA 0.2 mg/L and TDZ 1.0 mg/L showed the highest induction frequency of all the hormone combinations. Besides, the induction of T. mongolicum variation was most effective comparing with the other three species by the average induction frequency of four explants. While the induction effect of leaf blade explant was more obvious than the other three explants. This system exhibited a rapid propagation of shoots from the leaf blade explants and makes it convenient to make use of these Taraxacum species to develop their diverse applications in the future.
백리향(Thymus quinquecostatus Celak.)의 기내번식 방법을 개발하기 위해 줄기증식에 미치는 싸이토키닌 효과를 조사하였다. 시료식물은 MS배지에 thidiazuron등 5종의 싸이토키닌을 단독 또는 혼합 처리하여 광배양 또는 암배양 조건에서 식물체 증식을 유도하였다. 백리항의 대량증식에 효과적인 cytokinin종류와 농도는 명배양시 줄기수에 있어서 BA 1.0+TDZ 0.1mg/L (6.50$\pm$1.51) 였고, 신초의 길이는 zeatin 2.0+TDZ 0.1mg/L(3.27$\pm$0.7)가 최적 조건이었다. 또한 암배양시 줄기수의 경우엔 처리간에 별다른 차이 없이 비슷한 경향을 나타낸 가운데 2-ip 2.0mg/L로 처리하였을 때가 가장 뛰어났고, 줄기의 신장은 zeatin 2.0mg/L일 때가 가장 효과적이었다. 전체적으로 기내에서 대량증식율은 평균 89.58%로 비교적 대부분의 시료에서 식물체가 유도되었다.
A method for rapid propagation of mature Jack fruit was developed. Four types of explants (mature embryos, apical meristems of young seedlings, apices from mature plants and nodal segments) were used. It has been found 88% of young apical meristems produced shoots in Campbell and Durzan (CD) medium compared to 60% in Murashige and Skoog (MS) medium. Only 1/3 of them produced multiple shoots. Shoot initiation from nodal segments was very rare. Mature apices produced callus. Although removal of the sheathing cover around mature buds enhanced the shoot initiation but success rate was low in growth regulator free medium. Embryos respond to the CD medium but not to the MS medium. Embryos from seeds soaked in water for 24 hours produced shoots after 8 weeks of incubation and the success rate was 70% while embryos from dry seeds only produced roots. There was no significant effect of cold storage (refrigeration) for 7 days on shoot initiation from mature embryos (65%) but the ability for shoot induction declines with storage time (55% after 21 days of cold storage). Mature axillary buds were established in Modified Campbell and Durzan (CD) medium supplemented with 0.5mg/1 and IBA. There was a significant difference in the growth performance of shoots according to the period of the year in which explants were collected. Highest (60%) was observed in November-January period. It was only 30% when the explants were collected in February-April or May-July and decreased to 20% in August-October. The shoots produced in November-January showed a higher vigor than those produced in other months. Since Jak fruit show seasonal changes in fruit bearing and shedding of leaves, it can be suggested that the difference in growth performances of tissues cultured in artificial culture media would have been affected by endogenous rhythms.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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