본 연구에서는 음이온 고체상 추출법 (AE SPE; anion exchange solid phase extraction)을 사용하여 간섭요인을 제거한 후, 친화 크로마토그래피 AF HPLC; affinity high performance liquid chromatography)와 유도결합 플라스마 질량분석법 (ICP/MS; inductively coupled plasma/mass spectrometry)을 사용하여 한국인의 혈청에서의 셀레노 단백질을 분리하고 정량하였다. 먼저 동위원소 희석법으로 셀레늄 총량을 분석한 결과, 건강한 한국 사람의 혈청내 평균농도는 $94.3{\pm}2.3ngg^{-1}$ 이었다. AE SPE와 AF 컬럼을 online으로 연결하여 셀레노단백질인 glutathione peroxidase (GPx), selenoprotein P (SelP), selenoalbumin (SeAlb)을 분리하고, 후 컬럼 동위원소 희석법 (PC ID; post column isotope dilution)으로 정량하였다. 혈청 인증표준물인 BCR-637을 분석한 결과 전체 셀레노 단백질의 합은 $85.4{\pm}3.4ngg^{-1}$으로 문헌값인 $81{\pm}7ngg^{-1}$과 일치하는 결과를 얻을 수 있었다. 20 명의 건강한 한국인의 혈청에서 얻은 셀레노 단백질 GPx, SelP 및 SeAlb 의 농도는 각각 $12.1{\pm}1.4ngg^{-1}$, $57.2{\pm}2.0ngg^{-1}$, 그리고 $20.0{\pm}1.9ngg^{-1}$ 이었으며 이들의 합인 $89.3ngg^{-1}$은 셀레늄의 총량값인 $94.3ngg^{-1}$과 거의 같은 값으로 혈청에서의 셀레늄은 주로 셀레노 단백질로 구성되어 있음을 알았다. 이 중 GPx의 농도는 간섭을 제거하기 전인 $25.0ngg^{-1}$에 비해 50% 이상 크게 감소하였는데 이로서 간섭은 주로 GPx에 포함되어 있음을 확인할 수 있었다. AE SPE는 간섭요인인 Cl과 Br을 제거 하는데 매우 효과적임을 보여주었다.
Donkey in China is well known for its draft purpose and transportation; however, donkey meat has attracted more and more consumers in recent years, yet it lacks sufficient information on its flavor components compared to other main meats. Therefore, in this study, volatile flavor compounds in neck meat of donkey, swine, bovine, and sheep were classified by electronic nose, then confirmed and quantified by gas chromatography-mass spectrometry. High-performance liquid chromatography (HPLC) and gas chromatography were used to quantify free fatty acid, amino acid, and flavor nucleotide. A total of 73 volatile compounds were identified, and aldehydes were identified as the characteristic flavor compounds in neck meat of donkey, bovine, swine and sheep in proportion of 76.39%, 46.62%, 31.64%, and 35.83%, respectively. Particularly, hexanal was the most abundant volatile flavor. Compared with other neck meat, much higher unsaturated free fatty acids were present in donkeys. Furthermore, neck meat of donkeys showed essential amino acid with highest content. Thus, special flavor and nutrition in donkey neck meat make it probably a candidate for consumers in other regions besides Asia.
본 연구에서는 국산배의 기능학적 우수성 증명을 위해 국산배로부터 생리활성 화합물을 밝히고자 하였다. 이에 배 과피 MeOH 추출물을 용매분획하여 얻은 EtOAc-산성획분을 대상으로 Sephadex LH-20 column chromatography와 ODS-HPLC를 이용하여 순차적으로 정제를 행하여 2종의 화합물을 단리하였다. 단리된 화합물 1과 2는 MS 및 NMR 분석을 통하여 각각 quercetin 3-O-${\beta}$-Dglucopyranoside(화합물 1)와 3,5,6,7,8,3',4'-heptahydroxyflavan [(-)-dulcisflavan, 화합물 2)]으로 동정되었다. 단리된 화합물 1은 동양배로부터, 그리고 화합물 2는 배로부터 처음 동정된 화합물이다. 본 연구결과가 국산배의 기능학적 우수성 증명을 위한 기초자료로 활용되길 기대한다.
에쿠올은 인간의 건강에 유익한 효과를 나타낸다. 발효된 콩 식품들은 에쿠올을 함유하고 있으며, 많은 미생물들이 에쿠올 생산과정에 참여하는 것으로 밝혀졌다. 본 연구에서는 한국의 전통 발효 식품인 된장에 대해 조사하였다. 먼저 서로 다른 제조자로부터 수집 된 37개의 된장 샘플들을 대상으로 에쿠올의 농도를 측정하기 위해 LC-MS/MS를 시행하였다. 측정 결과 3개의 된장 샘플에서 에쿠올이 검출되었고, 507 ng/100 g의 농도가 가장 높게 나타났다. 에쿠올을 함유한 된장에서 15개의 미생물 종들이 16S rRNA gene sequence analysis와 2개의 MALDI-TOF MS분석법에 의해 분리, 동정되었으며 Bacillus spp, Paenibacillus spp, Tetragenococcus spp, Stapylococcus spp, and Clostridium species들이 가장 우세한 미생물들이었다. 이 연구결과로 한국의 전통 발효식품인 된장에서도 에쿠올이 검출되었음을 확인하였다.
메스암페타민(methamphetamine, MA)과 암페타민(amphetamine, AP)은 전세계적으로 널리 퍼진합성 흥분제로 보건 및 사회 문제, 경제적 비용 발생 등의 다양한 문제를 일으킨다. 또한 이러한 마약은 중독 및 남용 가능성이 매우 높기 때문에 확산 방지를 위한 방안의 하나로 복용자의 생체시료에서 이들 마약을 검출하기 위한 분석법 개발이 필요하다. 따라서 본 연구에서는 액체크로마토그래피-질량분석법(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)를 이용하여 소변에서 MA와 4-하이드록시메스암페타민(4-hydroxymethamphetamine, 4HMA), AP, 4-하이드록시암페타민(4-hydroxyamphetamine, 4HA)을 동시에 분석할 수 있는 분석법을 개발하였고 유효성 평가를 수행하였다. 전처리 시간 단축을 위해 50000 g에서 3 min 동안 초고속원심분리 후 시료 희석 주입법을 이용하여 LC-MS/MS에 주입하였다. 분리관은 역상 C18 컬럼을 사용하였고, 정량분석을 위해 MRM (multiple reaction monitoring) 모드를 적용하였다. 가중계수 $1/x^2$에서 정량 범위는 MA는 10-2500 ng/mL, AP는 1.0-800 ng/mL, 4HA와 4HMA는 2.0-200 ng/mL로 설정하였고, 검량선의 직선성은 결정계수($r^2$)를 구하여 평가하였다. 초고속원심분리법의 효율성을 확인하기 위해 전처리 과정으로 시린지 필터(membrane-filtration)를 적용한 결과와 비교하였고, 그 결과 분석물질에 따라 6-15 % 성능이 우수한 것으로 나타났다. 일내(intra-day)와 일간(inter-day) 정밀도는 6.6 % 미만이었고, 정확도는 -14.9-11.3 % 였다. 최저정량한계(LLOQ)는 2.0 ng/mL (4HA 및 4HMA), 1.0 ng/mL (AP), 10 ng/mL (MA)로 확인되었다. 선택성, 검출한계, 희석무결성, 기질효과, 효율성, 안정성을 평가한 결과 만족스러운 측정값을 얻었다. 또한 개발된 분석법을 마약 복용자의 소변에 적용하여 분석법의 유용성을 확인하였다.
Hagfish bradykinin (BK)-related peptide가 먹장어 (E. burgeri)의 피부추출물로부터 분리, 정제되어졌다. 분자량이 875.8 Da인 hagfish BK는 $C_{18}$ 역상 및 양이온교환 high performance liquid chromatography로 순수하게 정제되었다. 자동아미노산서열분석기와 MALDI-TOF mass spectroscopy에서 얻은 결과의 조합으로 hagfish BK의 일차구조는 Gly-Thr-Ala-Gly-Ile-Gly-Pro-Phe-Arg로 판명되었다. 이 아미노산서열을 mammalian BK와 비교하면 다섯 개의 아미노산의 치환을 $(Arg^1{\rightarrow}Gly,\;Pro^2{\rightarrow}Thr,\;Pro^3{\rightarrow}Ala,\;Phe^5{\rightarrow}Ile,\;Ser^6{\rightarrow}Gly)$ 포함한다. Hagfish BK는 먹장어 장관에 대해 수축활성을 나타냈으며, 약 $10^{-11}\;M$의 농도에서 역치반응이 나타났다.
기능성 성분이 향상된 토마토 품종 개발을 위해서는 성분 정량분석법과 토마토 유전자원 간 대사성분 변이에 대한 정보의 확보가 필요하다. 본 연구에서는 토마토 유전자원23개 계통과 12개 상용 F1 품종을 이용하여 수용성 비타민 7종(vitamin C, B1, B2, B3, B5, B6, B9)과 폴리페놀계 성분 5종(quercetin, rutin, kaempferol, myricetin, and naringenin chalcone)에 대한 함량을 비교 분석 하였다. HPLC와 LC-MS 분석 결과, 수용성 비타민과 폴리페놀계의 주요 성분으로 vitamin C와 naringenin chalcone이 각각 검출되었으며 품종 간 높은 수준의 함량 변이가 존재함을 알 수 있었다. 반면에 vitamin B1, quercetin 과 kaempferol은 전 품종에 있어 함량이 가장 낮았다. 대사성분 함량과 토마토 과실특성 간 상관관계에 있어 서 과크기(과중)와 높은 유의성이 관찰되었는데 대부분의 성분에 있어 방울토마토 품종이 완숙용 토마토 품종보다 높은 함량을 보였다. 하지만 naringenin chalcone을 제외하고 대사성분과 과색 간의 상관관계는 뚜렷하게 나타나지 않았다. 본 결과는 토마토 육종과정에 활용될 수 있는 효율적인 대사성분 정량분석법을 제시할 뿐만 아니라 기능성 성분 고함량 육종소재 선발에 중요한 정보를 제공한다.
The purpose of this study was to analyze myosin heavy chain (MHC) isoforms in bovine longissimus thoracis (LT) muscle by liquid chromatography (LC) and mass spectrometry (MS). LT muscles taken from Hanwoo (Korean native cattle) steer (n=3) used to separate myosin bands by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis. The peptide queries were obtained from the myosin bands by LC-MS/MS analysis following in-gel digestion with trypsin. A total of 33 and 43 queries were identified as common and unique peptides, respectively, of MHC isoforms (individual ions scores >43 indicate identity or extensive homology, p<0.05). MHC-1 (IIx), -2 (IIa), -4 (IIb), and -7 (slow/I) were identified based on the Mowse score (5118, 3951, 2526, and 2541 for MHC-1, -2, -4, and -7, respectively). However, more analysis is needed to confirm the expression of MHC-4 in bovine LT muscle because any query identified as a unique peptide of MHC-4 was not found. The queries that were identified as unique peptides could be used as peptide markers to confirm MHC-1 (14 queries), -2 (8 queries), and -7 (21 queries) in bovine LT muscle; no query identified as a unique peptide of MHC-4 was found. LC-MS/MS analysis is a useful approach to study MHC isoforms at the protein level.
Two new fermentation products were separated from cheonggukjang by high performance liquid chromatography (HPLC) and tentatively identified as succinyl daidzin and succinyl genistin by HPLC-mass spectrometry (MS). Both succinyl daidzin and succinyl genistin were detected in all 4 commercially available and one laboratory prepared cheonggukjang and 1 commercially available natto. However, these compounds were not detected in commercially available 4 home-made and 4 factory-produced doenjang. Peak areas of succinyl genistin were about 1.95-2.45 times higher than those of succinyl daidzin in cheonggukjang, which may be due to the higher concentration of genistin derivatives than daidzin derivatives in soybeans. This is the first report on the succinyl derivatives as isoflavone metabolites from cheonggukjang and these 2 isoflavone derivatives could be characteristic indicators for cheonggukjang.
Pharmaceuticals and personal care products (PPCPs) are emerging contaminants in the aquatic environment. Many pharmaceuticals are not completely removed during wastewater treatment, leading to their presence in wastewater treatment effluents, rivers, lakes, and ground water. Here, we developed analytical methods for monitoring ten pharmaceuticals from surface water by LC/ESI-MS/MS. For sample clean-up and extraction, MCX (mixed cation exchange) and HLB (hydrophilic-lipophilic balance) solid-phase extraction (SPE) cartridges were used. The limits of detection (LOD) in distilled water and the blank surface water were in the range of 0.006 - 0.65 and 1.66 - 45.05 pg/mL, respectively. The limits of quantitation (LOQ) for the distilled water and the blank surface water were in the range of 0.02 - 2.17 and 5.52 - 150.15 pg/mL, respectively. The absolute recoveries for fortified water samples were between 62.1% and 125.4%. Intra-day precision and accuracy for the blank surface water were 2.9% - 24.1% (R.S.D.) and -16.3% - 16.3% (bias), respectively. In surface wastewater near rivers, chlortetracycline and acetylsalicylic acid were detected frequently in the range of 0.017 - 5.404 and 0.029 - 0.269 ng/mL, respectively. Surface water near rivers had higher levels than surface water of domestic treatment plants.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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