• 농업과학연구
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• 제18권2호
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• pp.157-163
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• 1991

백색 부후균 Coriolus versicolor CV3 균주를 공시하여 laccase 생성을 위한 배양 조건을 검토하였다. 감자, 양파 또는 맥아의 추출물을 주재로 한 각종 백색 부후균용의 배지를 비교한 결과, 공시 균주의 laccase 생성은 potato-malt extract 배지에서 가장 높아서 배양 11일 후 배양액당 $1.50unit/m{\ell}$, 균체 건물 중당 119.5 unit/g 수준의 laccase 활성도에 도달하였다. potato-malt extract 배지에 각종 유기 및 무기 질소원 중 yeast extract 또는 $KNO_3$를 0.2% 첨가하였을때 laccase의 생성 수준이 높았으며, inducer로서 2.5-xylidine을 $4{\times}10^{-4}M$ 첨가한 경우 대조구에 비하여 3.1배 수준으로 laccase 생성이 유도 되었다. Laccase 생성을 위한 배양 최적 pH는 4~4.5 이었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제47권2호
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• pp.250-258
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• 2019

삼림지역의 고목에서 분리한 Peniophora sp. JS17 균주는 사람 머리카락 유래 멜라닌을 탈색하는 세포 외 분비효소를 생산했다. JS17 균주는 laccase 및 manganese peroxidase 활성을 나타냈지만 lignin peroxidase 활성은 나타내지 않았다. 본 균주를 회분배양한 결과 멜라닌 탈색 활성은 laccase 활성으로부터 유래하는 것으로 확인되었다. Peniophora sp. JS17 균사체로부터 멜라닌 탈색 효소를 생산하기 위한 배지 조건을 조사하였다. 다양한 합성 배지 중에서 minimal medium (2% glucose, 0.2% malt extract, 0.1% $KH_2PO_4$, 0.4% $MgSO_4{\cdot}7H_2O$)이 가장 높은 laccase 활성을 나타내었다. Laccase 생산에 대한 배양 조건을 최적화하기 위하여 minimal medium의 조성 중에서 탄소원 및 질소원에 대한 영향을 조사하였다. 다양한 탄소원 및 질소원 중에서 각각 2% xylose 및 0.4% tryptone의 경우에 가장 높은 laccase 활성을 나타내었다. Ammonium sulfate 침전 및 Hitrap Q Sepharose column을 이용하여 정제한 효소는 SDS-PAGE에서 약 70 kDa의 분자량 부근에 2종류의 isozyme 형태로 존재 하였다. 멜라닌 탈색율은 HBT 및 syringaldehyde의 존재하에서 48시간 만에 각각 77% 및 55%를 나타내었고, mediator가 없는 조건에서는 9%의 멜라닌 탈색율을 나타내었다.

• 한국균학회지
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• 제15권2호
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• pp.99-170
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• 1987

Coriolus versicolor가 생산(生産)하는 laccase 생산(生産) 조건(條件)과 그 특성(特性)을 검토하여 다음과 같은 결과를 얻었다. Laccase 생산(生産)은 영양적 최적(最適) 조건(條件)은 indulin AT1%, peptone 0.3%, $KH_2PO_4$ 0.1%, $MgSO_4$ 0.02%, $CuSO_4$ 0.1mg%, thiamine HCI 0.005 mg%였다. Laccase 생산(生産)의 최적(最適) 온도(溫度)는 $25^{\circ}C$ 최적(最適) pH는 5.0이었고 배양기간(培養期間)은 20日이었다. Laccase 작용(作用) 최적(最適) pH는 4.6이었고 최적온도(最適最適)는 $40^{\circ}C$였으며 pH 안정성은 $40^{\circ}C$에서 15분간 보존(保存)하였을 때 pH4.6에서 가장 안정하였다. 열안정성(熱安定性)은 $40^{\circ}C$ 이하에서 는 비교적 안정하였으나 그 이상 올라갈수록 열에 민감한 반응(反應)을 보였고 sodium azide 1mM차 KCN 1mM에서 완전 저해(沮害)되었다.

• 한국버섯학회지
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• 제15권4호
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• pp.168-177
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• 2017

To evaluate effects of ligninolytic enzyme type on the mycelial response and ligninolytic enzyme production during interspecific interactions among wood-rotting fungi, 4 fungal strains, Trichophyton rubrum LKY-7, Trichophyton rubrum LSK-27, Pycnoporus cinnabarinus, and Trichoderma viride, were selected. Regarding ligninolytic enzyme production, LKY-7 secreted laccase and manganese peroxidase (MnP), P. cinnabarinus secreted only laccase, and LSK-27 secreted only MnP in glucose-peptone medium, while T. viride did not produce any ligninolytic enzymes. In the co-culture of LKY-7 with P. cinnabarinus, the formation of aerial mycelium was observed and the enhancement of laccase activity owing to interspecific interaction appeared to be very low. In the co-culture of LKY-7 and P. cinnabarinus with LSK-27, a hypha-free clear zone was observed, which resulted in deadlock, and increased laccase or MnP activity was detected at the interaction zone. The interaction responses of LKY-7, P. cinnabarinus, and LSK-27 with T. viride were characterized by the formation of mycelial barrages along the interface. As mycelial barrages were observed at the T. viride territory and no brownish pigment was observed in the mycelial barrages, it is suggested that laccase and MnP are released as part of an offensive response, not as a defensive response. The co-culture of P. cinnabarinus with T. viride lead to the highest enhancement in laccase activity, yielding more than 14-fold increase in laccase activity with respect to the mono-culture of P. cinnabarinus. MnP activities secreted by LKY-7 or LSK-27 was generally low in interspecific interactions.

• Journal of the Korean Wood Science and Technology
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• 제14권3호
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• pp.36-42
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• 1986

The production media and the enzymatic charateristics of laccase from Flammulina velutipes were investigated. The activity of laccase during incubation reached to the maximum at the 40 days of incubation in the case of Barley straw medium. The maximum laccase activity in Barley straw medium was 5 and 16 times higher than those in Onion basic and Sawdust media, respectively. The laccase from Flammulina velutipes has the optimum pH of 6.6 and showed to be stable at relatively broad pH range. 4.5-9.5. Temperature stability showed that above 96% activity could be preserved after holding at 40$^{\circ}C$ for 40 minutes. At the above 70$^{\circ}C$, the laccase activity decreased very rapidly. The Km value of the laccase was estimated to be 28.0 mM which is much higher than that of the laccase from Pleurotus ostreatus. Organic solvents for precipitiation of the enzyme did not inactivation the laccase. Sodium azide which was added for preventing microbial deterioration affected significantly the inactivation of laccase, but this activity was recovered completely by precipitating the enzyme with acetone.

• 한국균학회지
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• 제32권2호
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• pp.112-118
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• 2004

한국산 흰구름버섯(Trametes hirsuta S1)로부터 배지 내로 분비된 laccase를 ultrafiltration과 anion exchange chromatography, adsorption chromatography를 이용하여 분리 정제하고 정제된 효소의 특성을 조사하였다. Laccase는 균주의 일차 대사 과정에서 주로 생산되는 세포의 페놀 산화효소였다. 흰구름버섯을 기본 배지에서 배양하였을 때 생장은 배양 6일까지 급속히 이루어졌고, laccase의 활성은 배양 5일에 최대활성을 나타냈으며 배양액에서 LiP와 VAO의 활성은 측정되지 않았다. Laccase의 생산에 미치는 유도원의 영향을 조사하기 위하여 배양 중인 흰구름버섯에 몇몇 유도원을 첨가한 결과, 2,5-xylidine은 대조구에 비하여 laccase의 생산을 약4배 증가 시켰다. 정제된 laccase는 SDS 젤 전기영동에서 대략 66 kDa의 분자량을 가지는 단일 폴리펩타이드(single polypeptide)였고, 탄수화물 함량은 12%였다. 정제된 laccase의 $K_m$과 $V_{max}$를 ABTS[2,2-azino-bis(3-ethylbenzthiazo line-6-sulfonic acid)]를 기질로 사용하여 조사한 결과 각각 $51.2\;{\mu}M$과 $56.8\;{\mu}mole{\cdot}min^1{\cdot}mg^{-1}$로 측정되었다. Laccase 활성의 최적 pH는 3.0이며, 이 효소는 $50^{\circ}C$ 미만에서 1시간 동안 처리하였을 때 안정적이었고 $70^{\circ}C$에서 20분간 처리하였을 때 효소의 활성이 반감되었다. Laccase의 분광학적 특성을 조사한 결과 구리를 포함하는 단백질로 나타났다. 일반적으로 알려진 laccase의 기질들에 대한 특이성을 조사한 결과, 5 mM ABTS에서 가장 높은 활성을 나타내었으며 tyrosine에서는 laccase의 활성이 나타나지 않았다. 저해제의 영향을 조사한 결과, 일반적으로 구리를 포함하는 단백질의 저해제인 $NaN_3$, TGA, DDC를 일정 농도로 처리한 실험구에서는 효소의 활성이 완전하게 억제되었으며, EDTA 처리구에서는 효소의 활성이 억제되지 않았다. 한국산 흰구름버섯 S1 균주로부터 생산되는 laccase의 N-말단의 아미노산의 서열은 Coriolus hirsutus의 laccase와 100%의 상동성을 나타냈고, T. versicolor의 laccase I과는 68%의 상동성을 나타냈다.

• 한국펄프종이공학회:학술대회논문집
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• 한국펄프종이공학회 2001년도 춘계학술발표논문집
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• pp.18-25
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• 2001

A new wood-degrading fungus Trichophyton rubrum LKY-7 secretes a high level of laccase in a glucose-peptone liquid medium. The production of laccase by the fungus was barely induced by 2,5-xylidine. The laccase has been purified to homogeneity through three chromatography steps in an overall yield of 40%. The molecular mass of the purified laccase was about 65 kDa by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. The purified laccase had the distinct blue color and had basic spectroscopic features of a typical blue laccase: two absorption maxima at 278 and 610 nm and a shoulder at 338 nm. The N-terminus of the laccase has been sequenced, revealing high homology to laccases from wood-degrading white-rot fungi such as Ceriporiopsis subvermispora. The enzyme had a "low" redox potential (0.5 V vs normal hydrogen electrode), yet it was one of the most active laccases in oxidizing a series of representative substrates/mediators. Compared with other fungal laccases, the laccase has a very low Km value with ABTS [2,2'-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid] as a substrate and a very high Km value with violuric acid as a substrate. The laccase has the isoelectric point of 4.0. The laccase had very acidic optimal pH values (pH 3-4) while it was more stable at neutral pH than at acidic pH. The laccase oxidized hydroquinone faster than catechol and pyrogallol. The oxidation of tyrosine by the laccase was not detectable under the reaction conditions. The laccase was strongly inhibited by sodium azide and sodium fluoride. fluoride.

• 한국균학회지
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• 제31권2호
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• pp.59-66
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• 2003

한국산 주걱송편버섯(Pycnoporus cinnabarinus) SCH-3로부터 배지 내로 분비된 laccase를 ultrafiltration과 anion exchange chromatography, adsorption chromatography를 이용하여 분리 정제하고 정제된 호소의 특성을 조사하였다. Laccase는 균주의 일차 대사 과정에서 주로 생산되는 세포외 페놀 산화효소였다. 주걱송편버섯을 기본 배지에서 배양하였을 때 생장은 배양 9일에 최대였고, laccase의 활성은 배양 7일에 최대활성을 나타냈으며 배양액에서 LiP, MnP 그리고 AAO의 활성은 측정되지 않았다. Laccase의 생산에 미치는 유도원의 영향을 조사하기 위하여 배양 중인 주걱 송편버섯에 몇몇 유도원을 첨가한결과, 2,5-xylidine은 대조구에 비하여 laccase의 생산을 25배 증가 시켰다. 정제된 laccase는 SDS 젤 전기영동에서 대략 66 kDa의 분자량을 가지는 단일 폴리펩타이드(single polypeptide)였고, 탄수화물 함량은 9%였다. ABTS [2,2-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)]를 기질로 사용하며 정제된 laccase의 $K_{m}}$과$V_{max}$를 조사한 결과 각각 $44.4{\mu}M\;and\;56.0{\mu}mole$로 측정되었다. Laccase 활성의 최적 pH는 3.0이며, 이 효소는 $60{\circ}C$에서 1시간 동안 처리하였을 때 매우 안정적이었고 $80{\circ}C$에서 10분간 처리하였을 때 효소의 활성이 반감되었다. Laccase의 분광학적 특성을 조사한 결과 구리를 포함하는 단백질로 나타났다. 일반적으로 알려진 laccase의 기질들에 대한 특이성을 조사한 결과 5mM ABTS와 5mM hydroquinone에서 높은 활성을 나타내었으며 tyrosine에서는 laccase의 활성이 나타나지 않았다. 저해제의 영향을 조사한 결과, 일반적으로 구리를 포함하는 단백질의 저해제인 $NaN_{3}$, TGA, DDC를 일정농도로 처리한 실험구에서는 효소의 활성이 완전하게 억제되었으며, p-coumaric acid와 EDTA 처리구에서는 효소의 활성이 억제되지 않았다. 한국산 주걱송편버섯 SCH-3 균주로부터 생산되는 laccase의 N-말단의 아미노산의 서열은 P. coccineus의 laccase와 호주에서 분리 동정된 P.cinnabarinus PB의 laccase와 94%가 같았다.

• Mycobiology
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• 제42권2호
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• pp.193-197
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• 2014

Laccase activity of Pleurotus ostreatus is significantly increased by the addition of apple pomace. Among various conditions, the best concentration of apple pomace and cultivation time for the production of laccase by P. ostreatus was 2.5% and 9 days, respectively. Reverse transcription polymerase chain reaction analyses of laccase isoenzyme genes, including pox1, pox3, pox4, poxc, poxa3, and poxa1b, revealed a clear effect of apple pomace on transcription induction. Our findings reveal that the use of apple pomace can be a model for the valuable addition of similar wastes and for the development of a solid-state fermenter and commercial production of oyster mushroom P. ostreatus.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제23권6호
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• pp.864-871
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• 2013

The recombinant strain P. pastoris GS115-lccC was used to produce laccase with high activity. Factors influencing laccase expression, such as pH, methanol concentration, copper concentration, peptone concentration, shaker rotate speed, and medium volume were investigated. Under the optimal conditions, laccase activity reached 12,344 U/L on day 15. The recombinant enzyme was purified by precipitating and dialyzing to electrophoretic homogeneity, and was estimated to have a molecular mass of about 58 kDa. When guaiacol was the substrate, the laccase showed the highest activity at pH 5.0 and was stable when the pH was 4.5~6.0. The optimal temperature for the laccase to oxidize guaiacol was $60^{\circ}C$, but it was not stable at high temperature. The enzyme could remain stable at $30^{\circ}C$ for 5 days. The recombinant laccase was used to degrade chlorpyrifos in several laccase/mediator systems. Among three synthetic mediators (ABTS, HBT, VA) and three natural mediators (vanillin, 2,6-DMP, and guaiacol), vanillin showed the most enhancement on degradation of chlorpyrifos. Both laccase and vanillin were responsible for the degradation of chlorpyrifos. A higher dosage of vanillin may promote a higher level of degradation of chlorpyrifos, and the 2-step addition of vanillin led to 98% chlorpyrifos degradation. The degradation of chlorpyrifos was faster in the L/V system ($k_{obs}$ = 0.151) than that in the buffer solution ($k_{obs}$ = 0.028).