Redox factor-1 (Ref-1)은 산화적으로 손상된 DNA의 복구와 세포내 산화환원에 민감한 전사인자들의 활성화에 필수적인 역할을 수행한다. 본 연구에서는 마우스 유래 혈관내피세포주 (MAE)에서 nitric oxide (NO) 생성과정에 관여하는 AKT 활성화의 측면에서 adenoviral vector를 사용하여 과발현된 Ref-1의 역할을 살펴보았다. NO 측정을 위하여 fluorophore DAF-2를 사용하였다. 과발현된 Ref-1은 bradykinin으로 자극한 세포뿐만 아니라 자극되지 않은 세포의 NO 생성도 증가시켰다. 놀랍게도 이 과발현된 Ref-1은 AKT의 직접적인 인산화를 유도하였으며, AKT 저해제로 널리 사용되는 wortmannin에 의해 반응이 억제되었다. 또한, Ref-1에 의한 직접적인 AKT 활성화를 증명하기 위하여 HA-tagged activation-deficient AKT를 과발현시키는 adenoviral vector를 사용하였다. 이 방법을 이용한 AKT 활성의 저해는 과발현된 Ref-1에 의한 NO 생성 및 bradykinin 자극에 의한 NO 생성을 억제하였다. 이들 결과는 Ref-1이 마우스 혈관내피세포에서 직접적인 AKT 인산화를 통하여 eNOS 활성화를 유도한다는 것을 의미한다.
A. nidulans의 색소결핍 억제돌연변이주(Suppressor mutant of the null pigmentation; SU-NPG)의 세포벽 구조가 색소형성 및 균사분지에 미치는 영향을 조사하여 다음의 결과를 얻었다. SEM으로 세포 표면구조를 관찰한 결과, 완전배지에서 배양된 SU-NPG의 분생포자벽은 최외각 층이 6일 째부터 박리되었으며, 균사생장이 저조하였다 TEM으로 관찰한 결과, 균사 세포벽은 매우 두꺼워졌다. 이러한 전자현미경관찰 결과는 이들 돌연변이주의 세포벽 구조가 NPG 및 야생형의 그것과는 다르다는 것을 시사한다. 균사에 탄수화물 염색을 한 후, 세포화학적 미세구조를 관찰한 결과, 분생포자벽은 C1, C2, C3와 C4 층으로 되어 있었고, 균사 세포벽은 H1, H2, H3와 H4층으로 되어 있었다. 이러한 C3층과 H3층은 세포분화 시 색소형성 및 균사 분지형성에 필수적인 세포벽 구조임 을 시사한다. SU-NPG는 FGSC4에서와는 다르게 비정상적인 균사생장을 하였지만, 색소결핍 돌연변이를 억제하는데, 이는 SU-NPG의 균사 세포벽에는 H3층이 형성되었으며, 세포벽 형성과정은 정상적으로 진행되기 때문으로 사료된다.
The composition of Hwoangbaec-tang has been traditionally used in Korea to treat cancer. Hwoangbaec-tang I is the water extracts prepared from Angelica dahurica, Fritillariae verticillata, Ailanthus altissima, Viscum coloratun, Scutellaria Radix, Ginseng Radix, Astragalus membranaceus, and Glycyrrhizae Radix. Hwoangbaec-tang II also is the water extracts prepared from Ginseng Radix, Astragalus membranaceus, and Glycyrrhizae Radix. The anti-leukemic effects of human promyelocytic leukaemia (HL-60 cells) by Hwoangbaec-tang I or II was accessed by propidium iodide staining flow cytometric analysis, and apoptosis-inducing activity was further confirmed by a nuclear morphological change, a ladder pattern of DNA fragmentation, and an activation of caspase-3 and 9. Hwoangbaec-tang I was found to induce the apoptosis of HL-60 cells via caspase-3 and 9 pathway. In the other side, Hwoangbaec-tang II was found to inhibit the growth of HL-60 cells by inducing these cells to differentiate toward granulocytes. These results indicate that the different anti-leukemic effects of Hwoangbaec-tang in HL-60 cells can be induce the apoptosis or differnetiation of HL-60 cells in Hwoangbaec-tang composition dependent manner.
Gamigunggui-tang (GMGGT) is one of the important prescriptions that has been used in oriental medicine. We investigated the inhibitory effect of an oral administration of hot water extract of GMGGT on the development of atopic dermatitis (AD) by using Balb/c mice. The induction of atopic dermatitis-like lesion was conducted by the removal of the back hairs and topical application of 2,4-Dinitrochlorobenzene (DNCB) on to the back skin repeatedly. GMGGT was orally administered at a different dose (10.0 mg/kg, 50.0 mg/kg). Skin reactions, consisting of increased ear thickness and the presence of ear inflammation, were observed in mice over three weeks. Oral administration of GMGGT significantly suppressed the skin lesions, ear swelling, spleen weight, total serum IgE in a concentration dependent manner, and also inhibited the infiltration of mast cells in the dorsal skin. In the present study, these results suggested that GMGGT extract inhibits inflammatory response atopic dermatitis. Therefore, GMGGT may be effective substances for the management of AD in human.
The tuberculin test have been widely utilized to diagnose tuberculosis of the dairy cattle. It was reported that approximately 70% of the dairy cattle with positive tuberculin reaction in Korea had been non-pathogenic lesion. So the studies on the specific method to diagnose tuberculosis of them is really need in Korea. Therefore this study investigated upon the diagnostic method for cattle tuberculosis in the aspect of cellular-immunology. The results obtained in this investigation are summarized as follows: 1. All the tuberculin tests to the swine inoculated with BCG.(B group), Mycobacterium avium (A group) and Mycobacterium smegmatis (S group), respectively, were represented high positive reaction and were no differences in the species of inoculated bacteria. 2. In the migration inhibition test using Iymphocyte in circulating blood of the swine inoculated with three species of acid-fast bacteria respectively, the test to A group was represented slight positive for migration in the presence of $15{\mu}g/ml$-PPD and the other reaction were clear and total positive for migration inhibition in the presence of $25{\mu}g/ml$-PPD or more, and the test to B group was the same results as to A group approximately. The test to S group was represented slight positive for migration inhibition in the presence of $15{\mu}g/ml$-PPD, but the results were the same in the presence of $25{\mu}g/ml$-PPD and $35{\mu}g/ml$-PPD. These results showed that there were remarkable differences between group A, B and group S in the presence of $25{\mu}g/ml$-PPD and $35{\mu}g/ml$-PPD. 3. The transformation rates of lymphocyte in PPD treated tissue culture had no significance without any relation between PPD treatment and non-treatment but A group and B group showed significance. And A group and B group showed high significance in comparison with N group and S group in the LSD examination. 4. The infection rated in lymphocyte of BCG inoculated after 3 days tissue culturing were represented those of high infection but its cellular degeneration rates almost did not change. The infection rates in bacilli in N group and S group were low but after 3 days inoculation it shewed higher cellular degeneration.
본 연구에서는 객담 내 결핵균의 배양시험과 약제 감수성 시험 방법으로서 BacT/Alert 액체 배지, Ogawa 배지 및 $L\ddot{o}wenstein$-Jensen 배지 배양법을 비교하였다. 신속 액체배양시스템은 기존의 Egg-based media (Ogawa, $L\ddot{o}wenstein$-Jensen 배지)에 비해 높은 민감도와 빠른 배양으로 결핵환자의 초기 객담 검사와 약제 감수성 시험에 널리 사용되어 왔다. 객담은 N-Acetyl-L-cystine과 4% NaOH로 처리한 후 BacT/Alert 액체 배지 시스템과 Ogawa 배지에 접종하고 배양하여 비교하였다. 결핵환자 객담 검체 135개 중 도말검사결과 양성은 95개였고, Ogawa 배지 배양결과 양성으로 확인된 수는 89개(65.9%)였으며, BacT/Alert 액체 배지에서는 97개(71.9%)가 양성으로 확인되었다. 결핵균 배양 양성 검체의 평균배양일은 Ogawa 배지에서 22.4일, BacT/Alert 액체 배지는 11.3일로 단축되는 것을 확인하였다. 약제 감수성 시험에는 32개 결핵균주를 이용하였으며, isoniazid를 첨가한 BacT/Alert 액체 배지와 $L\ddot{o}wenstein$-Jensen 배지에서의 약제 감수성 시험 검사결과 일치률은 87.5%를 보였고, rifampicin에서의 일치률은 90.6%로 나타났다.
알칼리환원수 (Alkaline Reduced Water: ARW)는 아시아를 비롯한 여러 나라에서 음용수로 사용되고 있으며 항산화효과와 장내이상발효 개선효과 등을 중심으로 안전성과 유효성의 검증이 이루어지고 있다. 본 연구에서는 알칼리환원수가 급성 염증성대 장질환 (Inflammatory Bowel Disease: IBD) 동물모델에 미치는 영향을 알아보기 위해, ARW를 2주 동안 급이 시킨 후 4% DDS 로 염증성 대장염을 유발시키고 대장의 길이와 조직병리학적 변화를 관찰하였다. 그 결과 대장의 길이와 육안적, 현미경적 질환점수의 수치가 대조군과 비교하여 유의한 차이를 나타내지 않았다. 이 결과는 DSS로 유도된 급성 염증성장질환 모델에서는 2주 동안의 ARW 급이가 개선효과를 나타내지 않았음을 말해준다. 그러나 ARW가 장내환경을 개선시키고 위장관의 질환을 개선시키는 효과가 있음을 고려해볼 때 급성 IBD 동물모델이 ARW의 효과를 증명 하기에 적합하지 않았거나 MARW의 급이기간이 장내환경을 개선할 만큼 충분히 길지 않았을 가능성을 추측해 볼 수 있다. 알칼리환원수의 장내이상발효 개선효과는 확인되고 있으나 그 기전은 아직까지 구체적으로 확인되어지지 않고 있다. 이번 연구결과에 의하면 인위적으로 유발시킨 급성 염증성 동물모델에서 ARW가 유의한 영향을 미치지 않았지만, 다른 장질환 모델을 이용한 효과 검증과 ARW의 장기 급이에 따른 효과, 그리고 ARW가 장내환경에 미치는 작용기전에 대한 연구가 더 깊이 있게 이루어져야 할 것으로 사료된다.
본 연구에서는 오리나무유래 HST의 T 세포 비활성화 효능을 확인하고 그 기전을 탐색하여 새로운 항아토피 천연소재로의 개발 가능성을 제시하고자 하였다. HST는 T 세포 mitogen으로서 anti-CD3 mAb가 처리 된 마우스 비장에서 Th 사이토카인(IL-2, IFN-${\gamma}$, IL-4, IL-5, IL-10)의 발현을 효과적으로 억제하였으며, T 세포 early activation marker인 CD25 유전자 발현이 INCA-6에서 매우 효과적으로 억제되는 것으로 보아, NFAT inactivator-유사 NFAT 탈인산화 억제 기전을 가지는 것으로 예측되었다. 또한 세포주기조절 단백질인 p21과 p27의 유전자도 HST에 의해 upregulation이 되어 효과적인 T 세포 증식 및 분화를 억제할 것으로 생각되었다. 이러한 세포주기조절 효과는 AD를 악화시키는 세균인 S. aureus 성장억제 실험에서 확인되어 향후 항박테리아 효능을 갖는 우수한 항아토피피부염 천연소재로서 HST의 활용 가치가 높을 것으로 판단된다.
두꺼비 등 피부손상 후 과립선의 재생과정을 주사전자현미경과 투과전자현미경으로 관찰하였다. 절개에 의하여 피부손상을 가한 후 실험을 위하여 특수히 제작된 cage 내에서 최대 20일간 사육하였다. 투과전자현미경 관찰에서 손상 4일 후 미성숙 형태의 신생 과립선이 관찰되었으며, 상피세포는 신생 과립선의 첨단부로 이동하여 있었다. 상피세포의 표면은 편평하였으며 desmosome 에 의해 서로 연결되어 있지 않았다. 미토콘드리아를 많이 함유한 세포돌기 (MRC)들이 선의 내강을 형성하고 있었고, 이들 돌기에서는 hemidesmosome이 관찰되었다. 신생선의 기저강은 MRC, 과립형성전세포 및 과립형성 세포 등으로 이루어져 있었다. 특히, 손상 후 10일에 xanthophore가 상피세포의 기저부로 이동하여 있음이 관찰되었다. 이들 세포는 다수의 크기가 큰 pterinosome 과 중등도의 전자밀도를 가진 carotenoid vesicle을 포함하고 있었다. 손상 후 13일에, xanthophore는 많은 carotinoid vesicle과 lammelated pterinosomes을 포함하고 있었다. Iridophore는 손상 16일에 분화중인 xanthophore 주변에서 관찰되었다. 이러한 소견은 손상으로부터의 회복 과정에 선조세포(glandular precursor cell)로부터 과립선이 재생되며, 선세포의 팽대는 이들 신생 세포의 성숙 및 증식에 의한 것을 의미한다.
피부질환의 개선을 위한 수치료요법은 예로부터 세계 각지에서 널리 이용되어 왔다. 본 연구에서는 국내 알칼리환원온천수를 이용한 수치료요법이 손상된 피부에 어떠한 영향을 미치는지 확인하고자 하였다. 무모생쥐(hairless mice)의 등 부위에 자외선을 조사하여 피부 손상을 인위적으로 유발한 후 매일 실온에서 40분간 침적시켜 21일간 수치료를 실시한 후 생쥐의 피부조직을 분리하여 검경하였다. 수치료를 하는 동안 실험군의 피부 회복속도가 대조군에 비해 더 빠른 경향으로 관찰되었다. 조직학적으로 관찰한 결과, 대조군에 비해 실험군에서 표피층 비후 및 염증세포 침착 현상이 상대적으로 적게 나타났으며, 비만세포의 증가 및 탈과립 현상 또한 적게 나타났다. 이는 온천수에 함유된 황성분의 박피효과 및 항균작용과 함께 온천수의 항산화능이 피부조직의 치유에 도움을 준 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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